Yöntem makalesi

Akciğer Kanserinin Sinjeneik Ortotopik Fare Modelini Oluşturmak için Minimal İnvaziv Bir Yöntem

DOI:

10.3791/68676

⸱

19 Ağustos 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Stead Family Department of Pediatrics, University of Iowa Health Care, 2Department of Neuroscience and Pharmacology, Carver College of Medicine, University of Iowa, 3Department of Radiation Oncology, Holden Comprehensive Cancer Center, University of Iowa, 4Free Radical Radiation Biology Program, Carver College of Medicine, University of Iowa, 5Geminii, Inc., 6Interdisciplinary Graduate Program in Molecular Medicine, Carver College of Medicine, University of Iowa, 7Department of Ophthalmology and Visual Sciences, University of Iowa Health Care

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Akciğer kanseri için yeni tedaviler geliştirmenin en büyük zorluğu, bölgesel hastalık metastatik hastalığa ilerlerken tümör mikro çevresinin modellenmesini içerir. Burada, zaman içinde hastalığın in vivo olarak izlenmesine izin veren ortotopik bir sinjeneik akciğer kanseri modeli oluşturmanın basit bir yöntemini açıklıyoruz.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Küçük hücreli dışı akciğer kanseri (KHDAK), dünya çapında hem kadınlar hem de erkekler için kansere bağlı ölümlerin bir numaralı nedeni olmaya devam etmektedir. Daha etkili tedavi yöntemleri geliştirmek için kanser hücreleri, bağışıklık sistemi, her tümör içindeki mikro çevre ve konak doku arasındaki etkileşimleri anlamak için daha fazla bilgi toplanması gerekmektedir. Burada bildirilen, fare akciğerinde kanseri indüklemek için basit, tekrarlanabilir bir yöntemdir ve erken evreden geç evre hastalığa kadar tümör büyümesinin izlenmesine izin verir. Cerrahi prosedür, deride küçük bir yüzeysel kesi ve kanser hücrelerinin interkostal kaslar yoluyla akciğere enjeksiyonunu içerir. İn vivo görüntüleme sistemleri (IVIS), lusiferazı eksprese etmek için tasarlanmış hücrelerle kombinasyon halinde, bir çalışma boyunca tümör büyümesini ve hastalığın ilerlemesini değerlendirmek için uygun bir yol sağlar. Bu teknik, çeşitli akciğer kanseri modelleri arasında kolayca aktarılabilir ve doğal tümör mikro çevresini taklit eden klinik öncesi bir akciğer kanseri modelinde yeni terapötiklerin fizibilitesini ve etkinliğini test etmek için kullanılabilir. Bu, deneysel terapötiklerle birlikte cerrahi rezeksiyon, radyasyon ve immünoterapiler dahil olmak üzere standart bakım tedavilerini kullanan hem etkinlik hem de güvenlik / toksisite çalışmalarının alaka düzeyini genişletir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Akciğer kanseri, küresel olarak erkekler ve kadınlar arasında en çok teşhis edilen kanserlerden biri ve kansere bağlı ölümlerin bir numaralı nedeni olmaya devam etmektedir 1,2,3. Küçük hücreli dışı akciğer kanseri (KHDAK), Amerika Birleşik Devletleri'ndeki tüm akciğer kanseri vakalarının yaklaşık %90'ını oluşturmaktadır ve tedavi ortamı son birkaç yılda büyük ölçüde iyileşmiş olsa da, sonuçları iyileştiren yeni tedavilerin geliştirilmesine büyük ilgi olmaya devam etmektedir4. Spesifik sürücü mutasyonlar için hedefe yön....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler, Iowa Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından gözden geçirilir ve onaylanır. C57BL6 / N fareleri (4-6 haftalık) ameliyatlardan en az 1 hafta önce satın alınır ve alıştırılır. Tüm hayvanlar 12 saatlik bir aydınlık/karanlık döngüsündedir. Hayvanlar kafes başına 4 adet barındırılır ve anestezi zamanına kadar yiyecek ve suya tam erişime sahiptir.

1. Enjeksiyon için hücrelerin seçimi ve büyümesi

  1. 35'te açıklandığı gibi bir hücre hattı seçmek için bir lusiferaz testi yapın.
    1. 37 ° C'de....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada, C57BL6 / N farelerine sunulan protokole göre enjekte edildi (Şekil 1). Lusiferazı (LLC-luc) eksprese etmek için genetik olarak tasarlanmış LLC hücreleri kullanıldı. Ek olarak, sahte bir fareye kanser hücreleri olmadan Matrigel enjekte edildi. IVIS üzerinde BLI, ameliyattan 1 gün sonra başlatılabilir. Bu LLC-luc çalışması, erken evre akciğer kanserini değerlendirmek için BLI üzerinde optimize edilmiştir. Bu yazıda kullanılan BLI sistemi, üretici.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, daha önce tarif edilen cerrahi olarak yoğun yöntemlerden farklı olarak, hızlı iyileşme sürelerine ve neredeyse anında tümör izlemeye izin veren optimize edilmiş, minimal invaziv bir prosedürü tanımlar 10,11,20,38,39,40,41,42,43,44,45<.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

S.C.H. ve C.S.C., Geminii, Inc.'in kurucularıdır. Bu düzenlemenin şartları, Iowa Üniversitesi Araştırma Çıkar Çatışması Ofisi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır. Diğer tüm yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Carter ve Sheffield laboratuvarlarının üyelerine, Susan Walsh, Bryan Allen ve Kranti Mapuskar'a değerli tartışmalar için teşekkür ederiz. Hayvan Kaynakları Ofisi'nde kıdemli klinik veteriner olan Samantha Eckley'e rehberliği ve tavsiyesi için de teşekkür ederiz. IVIS Lumina S5 Görüntüleme Sisteminin, Iowa Üniversitesi Radyoloji Bölümü tarafından desteklenen temel bir kaynak olan Küçük Hayvan Görüntüleme Çekirdek Tesisinde kullanıldığını kabul etmek isteriz. Biorender (https://biorender.com) kullanılarak oluşturulan şekillerden grafik çizimler. Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri hibeleri NCI R21CA256301 (C.S.C., V.C.S.), Serbest Rad....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
%0,25 Tripsin-EDTA (1 kat)Gibco25200-056
%10 Nötr Tamponlu FormalinVWR16004-112
100 mm x 20 mm doku kültürü işlenmiş tabaklarDot Scientific Inc.667621
190 Proof Saf EtanolDecon Labs2801
3/10 mL İnsülin Şırınga, BD Ultra-Fine iğneyle 31 G x 5/16 inç.Beckton Dickinson328438
3M Vetbond3M1469SB
ATPSigmaA5394
Betadine Çözeltisi %10 Povidon-iyot AntiseptikArvio Health L.P.67618-150-04
C57BL6/N FareCharles River Laboratuvarları
Hücre Süzcü 40um naylon Doğan352340
Kompakt Anestezi MakinesiVetamac Anestezi 
Kontrol Cihazlı Uzak Kızılötesi Isıtma PediKent Scientific Corporation 
Geleneksel Cerrahi Bıçak Kollu, Beden 3Brad-Parker371030
Kavisli Orta Noktalı Genel Amaçlı PensFisherbrand16-100-110
DitiothreitolResearch Products InternationalD11000
D-Luciferin (sodyum tuzu)Cayman Chemical14682
Perde, Cerrahi 18" x 26" Fenestrat Olmayan, SterilAnlaşma783410
Dulbecco' s Modifiye Kartal Orta (1x)Gibco11965-092
Dulbecco' s Fosfat Tamponlu Tuzlu Çay (PBS) 1xGibco14190-144
EGTASigmaE3389
Fetal Sığır SerumuGibcoA5670402
FL150 Fiber Optik Mikroskop Işık KaynağıMeiji 
Gentamisin Sülfat ÇözeltisiIBI ScientificIB02030
GliserolResearch Products InternationalG22025
İzofluranPrimal Pharma Limited66794-013-25
IVIS Lumina S5PerkinElmer 
Yaşayan İmaj YazılımıPerkinElmer 
LL/2 (LLC1)ATCCCRL-1642Çalışmanın ihtiyaçlarına en uygun kanser hücre hattını kullanın 
Magnezyum SülfatFisher ScientificM63
Matrigel Bazal Zar MatrisiCorning354234
Mayo-Hegar İğne Tutucu, 6", Dişli ÇeneMiltex8-44TC
Micro-Adson ForsepsGüzel Bilim Araçları10018-12
Çift Bıçaklı N5 Köpek Pati KesiciOneisall 
Steril Olmayan, 12 Kat Gazlı Bez SüngerleriNDCP157112
Optixcare Göz KayganlaştırıcısıAventix5914304
Penisilin StreptomisinGibco15140-122
Perma-Hand İpek Dikiş 6-0 1 x 18"Ethicon K802H
Fosforik Asit %85Fisher ScientificA242
Skalpel Bıçağı Boyutu 10, Paslanmaz Çelik, SterilCincinnati Cerrahi110
Vida Kapağı Tüpü Konik 50 mLSarstedt62.547.100
Doku Makas 4.5" Staight PremiumOnsungSCT115
Triton X-100SigmaT6878
Trizma ÜssüSigmaT1503
Trypan Blue Lekesi (%0,4)Gibco15250-061
Astarlı Utility Alüminyum Folyo BantIPGALF150L
Ahşap Gövdeli Pamuk Uçlu ApplikatörlerNDC76200

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bray, F., et al. Global cancer statistics 2022: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 74 (3), 229-263 (2024).
  2. Luo, G., et al.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Akci er Kanseri ModeliSinerjenik Fare ModeliMinimal nvaziv CerrahiT m r Mikro evresiBiyol minesans G r nt lemeT m r mplantasyonuH cre S spansiyonu EnjeksiyonuPreklinik Kanser ModeliErken Evre Akci er Kanseri

İlgili makaleler