In vivo, glioblastoma (GBM) gibi birçok merkezi sinir sistemi hastalığının temelini oluşturan hücreler arası iletişim, ölçülmesi ve karakterize edilmesi ile ünlüdür. Burada, GBM'nin uzunlamasına hayvan modelinde interstisyel sıvı bileşenlerini örneklemek için kullanılabilecek serebral açık akış mikroperfüzyon (cOFM) prosedürlerini açıklıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Glioblastoma hayvan modelinde interstisyel sıvının boylamasına koleksiyonu için beyin açık akışlı mikroperfüzyonun kullanımı
Bu makalede
Özet
Özet
Merkezi sinir sistemi (CNS) hastalıkları, karmaşık ve dinamik bir hücre arası iletişim ağı aracılığıyla ortaya çıkar. Glioblastoma (GBM), en yaygın ve agresif birincil beyin tümörü, bu karmaşıklığın simgesidir; hızlı ilerlemesi ve yıllar yerine aylarla ölçülen kötü prognozu vardır. GBM'nin biyolojisi, neoplastik ve stromal hücreler arasındaki karmaşık sinyal molekül değişimleriyle yönlendirilir ve bu da agresif hastalık ilerlemesini destekler. Burada, GBM fare modellerinde ayrıntılı bir beyin açık akış mikroperfüzyon (cOFM) protokolünü tanımlıyoruz; bu protokol, interstisyel sıvı (ISF) içindeki tümör mikroortam dinamiklerinin gerçek zamanlı uzunlamasına izlenmesini mümkün kılar. Yaklaşımımız, dayanıklı kılavuz kanül başlık montajlarının implantasyonunu, doğrudan kılavuz üzerinden intracerebral glioma nakleti için kullanımını ve metabolom ile proteomik LC-MS analizleri için yüksek hassasiyetli cOFM örneklerinin toplanmasını tanımlar. Önemli olarak, cOFM geleneksel mikrodiyalizin moleküler boyut sınırlamalarını aşmaktadır. GBM'nin ötesinde, cOFM metodolojisi, ilgili hayvan modellerinde etiyolojik ve tedaviye yanıtlı biyobelirteçler sağlama kapasitesiyle, nörodejeneratif, epileptik ve nöropsikiyatrik durumlar dahil olmak üzere çeşitli CNS bozukluklarına dönüştürücü içgörüler vaat ediyor.
Giriş
Merkezi sinir sistemi (CNS) hastalıklarının araştırılması, interstisial sıvı (ISF) tarafından aracılık edilen karmaşık, çok modlu hücreler arası sinyal kullanımı nedeniyle ünlü bir şekilde zordur. Bu karmaşıklık özellikle glioblastoma (GBM) gibi beyin tümörlerinde belirgindir; burada hücrelerarası sinyaller hem neoplastik hem de stromal hücrelerarasında iletilir 5,6,7,8,9.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu protokol kapsamındaki tüm hayvan prosedürleri, Northwestern Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanır (protokol kimliği: IS00021383) ve Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) Yönergelerine uyar. Bu protokol, hem erkek hem kadın C57BL/6J farelerinde en az 8-10 haftalık yaşta kullanılmak üzere geliştirilmiştir. Bu protokolde kullanılan fare glioma hücre hattı CT2A, Boston Üniversitesi Seyfried Laboratuvarı tarafından sağlanmış ve steril doku kültürü koşullarına uygun olarak kültürlenip hazırlanmıştır.
1. Cerrahi planlama ve hazırlık
- Hayvan bilgisi: cOFM....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Deneysel başarıyı belirlemek için çeşitli değerlendirme önlemleri, temel patolojinin ve araştırma hayvan modelinin özel niteliğine bağlı olarak, ara veya doruk deneysel aşamalarda gerçekleşebilir. GBM biyolojisi incelemeleri için, biyolüminesans görüntüleme (BLI), cOFM rehber aracılı tümör hücre nakletinin etkinliği için ara değerlendirme ölçütü olarak kullanılabilir (Şekil 4A). Ancak, implante edilmiş baş-montajların fiziksel özellikleri, hayvanlar arasında.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu protokolde tanımlanan cOFM prosedürleri, patolojik dokunun ISF'nin endojen bileşenlerini uzunlamasına örnekleme yetenekleriyle CNS hastalıklarının incelenmesinde devrim niteliğinde değişiklik yapma potansiyeline sahiptir. Ancak, bu metodolojinin kullanımının araştırma başarısı, birkaç kritik adımın doğru şekilde uygulanmasına bağlıdır. Bunlardan en önemlilerinden biri cOFM kılavuz kanülünün doğru ve güvenli şekilde yerleştirilmesidir. Yanlış cerrahi işlemler veya yapışma stratejileri,.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma, Ulusal Nörolojik Bozukluklar ve İnme Enstitüsü 1R01NS096376, 1R01NS112856 ve P50CA221747 SPORE for Translatasyonel Yaklaşımlar için Beyin Kanseri (A.U.A.) tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 0.7 mm Matkap ucu | Güzel Bilim Araçları | 19008-07 | Burr deliği sondajı |
| 1 ila 5 ml şırınga | BD | #309646 | Yeniden dolaşımlı perfüzyon örnek retreival |
| 18 G iğne | BD | #305195 | Yeniden dolaşımlı perfüzyon örnek retreival |
| 30G iğne | BD Ultra-Fine | 328438 | Delme durası |
| 4-0 vicryl dikişleri | Dynarex | 9130 | Cerrahi kapanma |
| Alkollü mendiller | FisherBrand | 22-363-750 | Cerrahi bölge cilt dezenfeksiyonu |
| Çapa vidaları | BASi | MD-1310 | cOFM kafa montaj yerleşimi |
| Yapay beyin omuriliği sıvısı (aCSF) | BASi (Joanneum) | MD-2400 | ISF örnekleme |
| cOFM sahte insert | BASi (Joanneum) | cOFM-D- # | cOFM kafa montaj yerleşimi |
| cOFM rehberi | BASi (Joanneum) | cOFM-GD-#- # | cOFM kafa montaj yerleşimi |
| cOFM kılavuz tutucu | BASi (Joanneum) | OFM-STM-1 | cOFM kafa montaj yerleşimi |
| cOFM infüzyon inserti | BASi (Joanneum) | cOFM-I- # | Hücre enjeksiyonu |
| cOFM kilitli kama | BASi (Joanneum) | cOFM-LOCK | cOFM kafa montaj yerleşimi |
| cOFM örnekleme eklemesi | BASi (Joanneum) | cOFM-S-X | ISF örnekleme |
| Pamuk uçlu aplikatörler | FisherBrane | 22363160 | Hidrojen peroksit uygulanarak sıvı emilimi |
| CT2A fare glioma hücre hattı | Seyfried Laboratuvarı - Boston Üniversitesi | NA | Aşılanmış tümör hücreleri |
| Diş çimentolama ajanı | IvoClar | 595953US | cOFM kafa montaj yerleşimi |
| Diş kürleme ışığı | Henry Schein | 5700253 | cOFM kafa montaj yerleşimi |
| Yıkıcı krem | Veet | 3116875 | Cerrahi bölge tüy alma |
| Elektrikli tıraş makinesi | Wahl Clipper Corp. | 8841 | Cerrahi bölge tüy alma |
| İnce uçlu forseps | Güzel Bilim Araçları | 5SF | Kesi, çapa vidasının yerleşimi |
| Flanşlı boru konnektörleri | BASi (Joanneum) | MD-1510 | Hücre enjeksiyonu |
| Fraksiyon toplama şişeleri | BASi (Joanneum) | MF-5281 | Fraksiyonlu örnek depolama |
| Gaz geçirmez cam şırınga (25 μ L) | Hamilton | 80465 | Hücre enjeksiyonu |
| Hidrojen peroksit (%1-3) | Walgreens | NDC: 0363-0268-32 | Kafatası yüzey temizliği |
| İnsülin şırıngaları (0.3 ila 1.0 mL) ve 31G iğnelerle | BD Ultra-Fine | 328438 | Anestezik ve ağrı aljezik uygulaması |
| Mikrosantrifüj tüpleri | Basix | 02-682-002 | Yeniden dolaşımlı perfüzyon örnek retreival |
| Mikromatkap ve stereotaktik tutucu | Harvard Aparatı | 75-1874 | Burr deliği sondajı |
| Fare ceketi | Lomir | MJ 02 | Hayvanların döner kafes sistemine bağlantısı |
| OFM düşük bağlı boru | BASi (Joanneum) | OFM-PP2-100-LB | ISF örnekleme |
| OFM-Pump - Mikroperfüzyon pompası | BASi (Joanneum) | MPP102-PC | ISF örnekleme |
| Oftalmik Merhem | Dechra | 211-38 | Peri-sugrical göz yağlanması |
| Pasifize metal örnekleme iğnesi | BASi (Joanneum) | MW-2310 | Fraksiyonlu örnek depolama |
| Perfusate poşeti | BASi (Joanneum) | OFM-BAG | ISF örnekleme |
| Fizyolojik tuzlu çözelti | ICU Medical | 0990-7983-03 | Kafatası yüzey temizliği, burr deliği deldirmesine yardımcı |
| Povidon-iyot sürüntleri | PDI Sağlık | SKU B40600 | Cerrahi bölge cilt dezenfeksiyonu |
| Prob tutucu | Stoelting | 51633 | |
| Soğutmalı fraksiyon toplayıcı | BASi (Joanneum) | MD-1201 | Fraksiyonlu örnek depolama |
| Döner kafes sistemi | BASi (Joanneum) | AMD-R Raturn | Uyanık cOFM örnekleme için otomatik muhafaza |
| Nesçer bıçakları ve sapları | Fisher Scientific | 22079693 | Kesim |
| Tornavida | cOFM kafa montaj yerleşimi | ||
| Kendi kendine kazınan diş yapıştırıcısı | Tokuyama | Çimentolaştırma ajanı için kafatası yüzeyi astarlama | |
| Toplama şişeleri için silikon itmeli kapağı | BASi (Joanneum) | MF-5283 | Fraksiyonlu örnek depolama |
| Sterotaktik çerçeve | Stoelting | 51725 |
Kaynaklar
- Shetty, A. K., Zanirati, G. The interstitial system of the brain in health and disease. Aging Dis. 11 (1), 200-211 (2020).
- Taoka, T., et al. Interstitial fluidopathy of the central nervous system: An umbrella term for disorde....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
