Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Sıçan Modelinde Derin Servikal Lenfovenöz Anastomoz için Cerrahi Protokoller: Lenf Nodu ve Lenfatik Damar Anastomozları

1.4K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/69201

⸱

14 Kasım 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurosurgery, The Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, 2Institute of Medical Technology, Peking University Health Science Center, 3Department of MR Diagnosis, The Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, 4Department of Neurology, The Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, 5Department of Clinical Nutrition, Harbin 242 Hospital

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Burada, diğer değişkenlerin etkisini en aza indirmek ve cerrahiye dayalı araştırmaların yürütülmesini standartlaştırmak için derin servikal lenf nodunun veya afferent lenfatik damarının sıçanda posterior fasiyal ven ile anastomoz adımlarını açıkça tanımlamak için bir protokol sunuyoruz.

Özet

Derin servikal lenfovenöz anastomoz (dcLVA), Alzheimer hastalığı (AH) için umut verici bir tedavi stratejisi haline gelmiştir ve mevcut sınırlı tedavi seçeneklerine kıyasla önemli gelişmeler sunmaktadır. Bununla birlikte, dcLVA'nın altında yatan mekanizma belirsizliğini korumaktadır. Klinik deneyler devam etmesine rağmen, dcLVA'yı simüle eden hayvan modelleri, mekanizmasını keşfetmek için değerli bir araç sağlar. Bu çalışma, temel araştırmaları kolaylaştırmak ve klinik zorlukları ele almak için hayvanlarda dcLVA modelleri oluşturmak için standartlaştırılmış bir protokol geliştirmeyi amaçlamaktadır. Derin servikal lenf nodu (dcLN) ve afferent lenfatik damarının (ALV) posterior fasiyal ven (PFV) ile anastomoz edilmesi için cerrahi prosedürleri ve temel adımları açıklıyoruz ve bu iki farklı cerrahi yöntemi detaylandırıyoruz: derin servikal lenf nodu-ven anastomozu (dcLnVA) ve derin servikal lenfatik damar-ven anastomozu (dcLaVA). Lenfatik drenajı teşvik etmenin ötesinde, bu iki cerrahi yöntemin karşılaştırılması, AD patogenezinde derin servikal lenf nodu ve derin servikal lenfatik sistemin rolünü anlamamıza ve keşfetmemize de yardımcı olur. Genel olarak, sıçanlarda cerrahi prosedürün ve önemli anatomik işaretlerin eksiksiz ve net bir şekilde sunulması, cerrahi protokolün standartlaştırılmasına yardımcı olur. Bu, kafa karıştırıcı faktörleri en aza indirebilir ve deneyler arası değişkenliği azaltabilir, böylece ilgili mekanizmaların daha derinlemesine anlaşılması için sağlam bir metodolojik temel oluşturabilir.

Giriş

Alzheimer hastalığı (AD), genellikle bilişsel gerileme ile sonuçlanan, yavaş yavaş ilerleyen bir nörodejeneratif hastalıktır. AD'nin ayırt edici patolojik özellikleri, anormal fosforile tau proteinleri tarafından oluşturulan amiloid-beta (Aβ) plakları ve nörofibriler yumaklardır. Beyin lenfatik sistemi üzerine yapılan son araştırmalar, AD tedavisi için yeni terapötik yollar açmıştır. Bu sistem, Aβ'nın interstisyel sıvıdan (ISF) beyin omurilik sıvısına (BOS) ve ardından meningeal lenfatik damarlar (mLV'ler) yoluyla derin servikal lenf düğümlerine drenajını kolaylaştırır1. 2024 yılında Profesör Xie'nin ekibi, derin servikal lenfovenöz anastomoz (dcLVA) sonrasında bir AD hastasında ilk bilişsel iyileşme vakasını bildirdi ve ardından bir klinik araştırma başlattı (NCT06530732)2.

AD için yeni bir terapötik yaklaşım olarak dcLVA, hastalar için umut verici beklentiler sunsa da, terapötik etkilerinin altında yatan kesin mekanizmalar daha fazla açıklama gerektirmektedir3. Hayvan modelleri bu mekanizmaların araştırılması için vazgeçilmez bir platform sağlar. dcLVA'nın terapötik mekanizmalarının kapsamlı bir şekilde anlaşılması, yalnızca AD patogenezi hakkındaki anlayışımızı geliştirmekle kalmayacak, aynı zamanda cerrahi teknikleri optimize edecek, tedavi endikasyonlarını netleştirecek ve sonuçta hastalara daha fazla klinik fayda sağlayacaktır.

Profesör Xie'nin ekibi kısa süre önce, dış juguler venin kollarını derin servikal lenf nodu4 ile bağlamanın fizibilitesini gösteren bir dcLVA modeli bildirdi. Ancak modelin açıklaması hala yeterli değil. İlk olarak, derin servikal lenf nodu (dcLN) ve çevresindeki anatominin tanımı yetersizdir. İkinci olarak, postoperatif açıklığın objektif, nicel bir değerlendirmesi yoktur. Daha da önemlisi, dcLN ve damarların anastomozu adımlarının ayrıntılı açıklamalarının yanı sıra öğretim için uygun olan net ve sezgisel resim ve videoların eksikliği vardır.

Bu tekniğin karmaşık cerrahi manipülasyon içerdiği ve sıçanlar ile insanlar arasındaki anatomik farklılıklar göz önüne alındığında, sıçan modellerindeki cerrahi prosedürlerdeki ve teknik ayrıntılardaki farklılıklar deneysel sonuçlarda önemli farklılıklara yol açabilir. Bu nedenle, sıçanlarda ilgili anatomik işaretleri net bir şekilde göstermek ve anastomoz prosedürünün ayrıntılı teknik açıklamalarını sağlamak hem kritik hem de acildir. Bu tür çabalar, cerrahi protokolün tekrarlanabilirliğini ve standardizasyonunu arttırmak, böylece araştırmacılar tarafından daha geniş uygulamayı desteklemek ve ilgili bilimsel araştırmaları ilerletmek için gereklidir. Ayrıca, lenf nodundan vene anastomoz ve lenfatikovenöz anastomoz gibi klinik cerrahi tekniklerin çeşitliliği ve cerrahi yaklaşıma bağlı olarak değişen sonuçların potansiyeli göz önüne alındığında, bunların göreceli etkinliğini değerlendirmek için karşılaştırmalı çalışmalara ihtiyaç vardır. Bu zorluklara yanıt olarak, yüksek oranda tekrarlanabilir iki dcLVA yöntemi sunuyoruz: derin servikal lenf nodundan vene anastomoz (dcLnVA) ve derin servikal lenfatik damar-ven anastomozu (dcLaVA). Bu yöntemler, model oluşturma sürecini standartlaştırmayı ve sonraki temel araştırmaları kolaylaştırmayı amaçlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışma, Harbin Tıp Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi'nin (IACUC) onayı ile gerçekleştirilmiştir (Onay No. SYDW2025-037). Denekler, üniversitenin hayvan merkezi tarafından sağlanan 400-500 g ağırlığında ve 12-14 haftalık erkek Sprague-Dawley (SD) sıçanlarıydı. Merkez, Spesifik Patojen İçermeyen (SPF) bir tesise sahiptir ve ulusal yetiştirme standartlarına uygundur.

NOT: Bu çalışma öncelikle derin servikal lenf ve venler arasındaki iki anastomoz yöntemini araştırmaktadır. dcLN ile posterior fasiyal ven (PFV) arasında cerrahi bağlantı kurulması; bu tekniğe dcLnVA denir. Derin servikal lenfatik damar (dcLaV) ile PFV arasında anatomik bir bağlantı oluşturulması; bu tekniğe dcLaVA denir. Her iki mikrocerrahi prosedürü, ameliyat metodolojileri ve anastomoz sonrası değerlendirme dahil olmak üzere ayrıntılı olarak açıklıyoruz.

1. Ameliyat öncesi hazırlık

  1. Sıçanı intraperitoneal sodyum pentobarbital enjeksiyonu (50 mg / kg) ile uyuşturun. Sıçanın tepkilerini yakından izleyin. Yalnızca pedal refleksi tamamen olmadığında devam edin.
  2. Künt uçlu bir iğne kullanarak, Evans mavisi (EB) solüsyonunu (yaklaşık 60-100 μL/kg, %5)5 tek taraflı burun boşluğunun burun mukozasına yavaşça uygulayın. Sıçanı, karın yukarı bakacak ve EB enjekte edilen burun deliği aşağı bakacak şekilde yarı yanal yatar pozisyonda konumlandırın. EB'nin karşı burun deliğine veya solunum yoluna girmesini önlemek için kafayı sabitleyin.
  3. Açık bir cerrahi alan sağlamak için farenin boynundaki tüyleri tıraş edin. Ameliyat sırasında kuruluğu veya kornea yaralanmasını önlemek için her iki göze de Vazelin uygulayın.

2. Cerrahi kesi

  1. Steril bir cerrahi alan sağlamak için sıçanın boynunun orta hattını iyot tentürü ile üç kez dezenfekte edin.
  2. Cerrahi makas kullanarak yaklaşık 3 cm uzunluğunda orta hat kesisi yapın.
    NOT: Diseksiyon sırasında submaksiller beze (SMG) ve kan damarlarına zarar vermemeye dikkat edin.
  3. Sternotiroid kası (STM), sternokleidomastoid kası (SCM) ve omohyoid kası (OHM) ortaya çıkarmak için cerrahi kesiyi geri çekin.

3. PFV'nin Hazırlanması

  1. SCM'nin lateral kenarı boyunca dış juguler venin (EJV) bir kolu olan PFV'yi tanımlayın.
  2. PFV ve EJV arasındaki çatallanmada, bir mikrovasküler klips kullanarak PFV'yi kapatın.
  3. Yeterli uzunluk elde etmek için PFV'yi künt bir şekilde diseke etmeye devam edin ve distal uçta klempleyin. dcLN ile anastomoz sırasında müteakip traksiyona izin vermek için PFV segmentinin mümkün olduğunca gevşek kaldığından emin olun.
  4. Mikrovasküler makas kullanarak damar eksenine paralel uzunlamasına bir kesi oluşturun.
    NOT: PFV insizyonunun uzunlamasına olduğundan emin olun, çünkü enine insizyon traksiyon ile genişletilebilir ve yırtılabilir.
  5. İntravasküler eritrositler tamamen temizlenene kadar izole edilmiş vasküler segmenti heparinize salin (% 0.9 NaCl içinde% 0.1 sodyum heparin) ile iyice yıkayın.

4. Lenf nodu-ven anastomozu

  1. STM ve SCM4'ün ortasındaki dcLN'yi ve afferent lenfatik damarını (ALV) keşfedin ve tamamen ortaya çıkarın.
  2. DcLN'yi künt bir teknik kullanarak yavaş yavaş inceleyin. Hem dcLN'ye hem de ALV'sine zarar vermekten kaçınarak dcLN ve çevresindeki dokular arasındaki fasyayı dikkatlice kesin.
    NOT: Anastomoz sonrası gerginliği en aza indirmek için PFV ve dcLN'nin birbirine yakın olduğundan emin olun.
  3. dcLN'nin distal ucunda bir kesi yapın. PFV kan akışının önemli ölçüde etkilenmemesi için kesi genişliğinin PFV'nin çapından daha küçük veya buna benzer olduğundan emin olun.
  4. 12-0 naylon sütür kullanarak, PFV insizyonunun proksimal ucunu dcLN insizyonunun proksimal ucuna anastomoz yapın.
  5. PFV'nin insizyon uzunluğunu, dcLN insizyonunun uzunluğundan biraz daha büyük olacak şekilde distal uca kadar genişletmeye devam edin.
  6. İğneyi sırayla dcLN transeksiyonunun dış kenarından ve PFV insizyonunun iç kenarından geçirin, böylece dcLN transeksiyonunu PFV lümenine çekin.
  7. dcLN transeksiyonunun alt kenarından üst kenarına doğru sürekli bir dikiş atın. PFV lümeninde trombüs oluşumunu önlemek için son dikişi tamamlamadan hemen önce bir kez daha heparin sodyum uygulayın. Güvenli bir kapanma sağlamak ve müteakip sızıntıyı önlemek için sürekli kapatma sırasında dikiş üzerinde uygun gerilimi koruyun.
  8. Sürekli anastomozun gevşek olduğu her yere kesintili dikişler yerleştirin.

5. Lenfatik damar-ven anastomozu

  1. ALV'yi kesin ve bir dikiş bağlantı noktası olarak hizmet etmek için çevreleyen dokuyu koruyun.
  2. 12-0'lık bir dikiş iğnesi kullanarak, PFV insizyonunun yaklaşık 2 mm proksimalinden yerleştirin ve PFV insizyonunun açıklığından çıkmak için ilerletin.
  3. ALV'yi yakalamak için dikiş iğnesi ile ALV kütüğünün yakınındaki dokuya girin.
  4. İğneyi PFV insizyonuna ve proksimal kenarından dışarı geçirin, ardından ALV kütüğünü PFV lümeni içinde sabitlemek için dikişi bağlayın.
    NOT: ALV kütüğünü PFV lümenine tamamen yerleştirin ve fizyolojik drenajı korumak için proksimal yöne doğru yönlendirin.
  5. Dış fiksasyon sağlamak için ALV kütüğünün yakınındaki çevre dokuyu PFV insizyonunun iç kenarına dikin. PFV lümenini pıhtıdan uzak tutmak için son dikişten önce heparin sodyum verin.

6. Dikiş ve ameliyat sonrası bakım

  1. Deri altı fasya için sürekli dikiş ve epidermis için kesintili dikiş atın.
  2. Cerrahi bölgeyi iyot tentürü ile dezenfekte edin. Daha sonra enfeksiyonu önlemek için eritromisin merhemini kesiğin etrafına eşit şekilde uygulayın.
  3. Ameliyat sonrası, enfeksiyon riskini azaltmak için art arda beş gün boyunca günde bir kez intraperitoneal enjeksiyon yoluyla penisilin sodyum (800.000 ünite/kg) uygulayın.

7. Anastomozun doğrulanması

  1. PFV'nin lateralinde, EJV'nin bir kolu olan ön fasiyal veni (AFV) tanımlayın ve inceleyin.
  2. Komşu AFV'ye kıyasla PFV'de önemli ölçüde daha yoğun boyanma gözlemleyerek anastomozun başarısını doğrulayın.
  3. Standartlaştırılmış CIE LAB renk uzayını kullanarak renk değişikliklerini objektif olarak ölçün. Ortalama CIE L*a*b* değerlerini elde etmek için Fiji'deki İlgi Alanlarını (ROI'ler) tanımlayın ve çıkarın, ardından aşağıdaki formülü kullanarak renk tonu açısını (h°) derece cinsinden hesaplayın:
    h° = atan2(b, a) × (180/π)6,7.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

dcLnVA ve dcLaVA'nın cerrahi prosedürleri ve postoperatif sonuçları, her biri temsili bir vaka ile gösterilmiştir. dcLnVA olgusunda PFV (2 mm çapında) tanımlandı ve SCM'nin lateral sınırından ayrıldı (Şekil 1A, Şekil S1A). SCM ile STM arasındaki boşlukta, PFDS'nin yaklaşık 4 mm medialinde, uzun oval bir dcLN (5 mm × 4 mm × 2 mm) bulundu ve ince bir şekilde ayrıldı (Şekil 1B,C, Şekil S1B-E

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

2012 yılında ILif ve ark. ilk olarak glifatik sistemitanımlamıştır 8. 2015 yılında Louveau ve ark. lenfatik damarların lümeninde T hücresi agregatlarını tanımladılar ve bu yapıları meningeal lenfatikler olarak adlandırdılar. Ayrıca meningeal lenfatiklerin hem glifatik sisteme hem de dcLN'ye bağlı olduğunu gösterdiler. Özetle, hem glifatik sistem hem de meningeal lenfatikler dahil olmak üzere beyin lenfatik sisteminin düzenlenmesi altında, interstisyel sıvıdaki Aβ ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82173384 ve 81773161), Heilongjiang Eyaleti Temel Araştırma ve Geliştirme Programı (2023ZX06C11) ve Genertec Tıbbi Bilimsel Araştırma Fonu Projesi (TYYLKYJJ-2024-043) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
%0,9 Steril Salin Çözeltisi   Shandong Qidu İlaç A., Ltd.   R9824041307   
Eritromisin MerhemiSanqi İlaç A.Ş., Ltd.H34020307
Evans Blue Boyage 5% (50mL)LEAGENEDK0053
Heparin Sodyum Çözeltisi %0,1BIOSCOBAC006
Mikro forsepsANLIXINAT-15
Mikrovasküler kelepçeTigergeneTG-AC-18-Z
Penisilin SodyumHebei Yuanzheng Hemu İlaç Şirketi, LtdJFT230602
Beyaz VazelinTiancheng   20250202

Kaynaklar

  1. Formolo, D. A., et al. Leveraging the glymphatic and meningeal lymphatic systems as therapeutic strategies in Alzheimer's disease: an updated overview of nonpharmacological therapies. Mol Neurodegener. 18 (1), 26(2023).
  2. Li, X., et al. Promising outcomes 5 weeks after a surgical cervical shunting procedure to unclog cerebral lymphatic systems in a patient with Alzheimer's disease. Gen Psychiatr. 37 (3), e101641(2024).
  3. Chen, J. Y., et al. Deep cervical lymphovenous anastomosis (LVA) for Alzheimer's disease: microsurgical procedure in a prospective cohort study. Int J Surg. 111 (7), 4211-4221 (2025).
  4. Fang, R., et al. A novel microsurgical model of cervical lymph node-to-vein anastomosis (LNVA) for studying brain lymphatic outflow. J Craniofac Surg. 36 (6), 2160-2163 (2025).
  5. Maloveska, M., et al. Dynamics of Evans blue clearance from cerebrospinal fluid into meningeal lymphatic vessels and deep cervical lymph nodes. Neurol Res. 40 (5), 372-380 (2018).
  6. Mazur, F., Han, Z., Tjandra, A. D., Chandrawati, R. Digitalization of colorimetric sensor technologies for food safety. Adv Mater. 36 (42), e2404274(2024).
  7. Karamucki, T., Rybarczyk, A., Jakubowska, M., Sulerzycka, A. A comparison of two methods of determining colour change in the assessment of the quality of pork. Acta Sci Pol Technol Aliment. 16 (3), 321-329 (2017).
  8. Iliff, J. J., et al. A paravascular pathway facilitates CSF flow through the brain parenchyma and the clearance of interstitial solutes, including amyloid β. Sci Transl Med. 4 (147), 147ra111(2012).
  9. Louveau, A., et al. Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels. Nature. 523 (7560), 337-341 (2015).
  10. Da Mesquita, S., et al. Functional aspects of meningeal lymphatics in ageing and Alzheimer's disease. Nature. 560 (7717), 185-191 (2018).
  11. Wang, M., et al. Non-invasive modulation of meningeal lymphatics ameliorates ageing and Alzheimer's disease-associated pathology and cognition in mice. Nat Commun. 15 (1), 1453(2024).
  12. Proulx, S. T. Cerebrospinal fluid outflow: a review of the historical and contemporary evidence for arachnoid villi, perineural routes, and dural lymphatics. Cell Mol Life Sci. 78 (6), 2429-2457 (2021).
  13. Yoon, J. H., et al. Nasopharyngeal lymphatic plexus is a hub for cerebrospinal fluid drainage. Nature. 625 (7996), 768-777 (2024).
  14. Zhou, Y., et al. Impaired peri-olfactory cerebrospinal fluid clearance is associated with ageing, cognitive decline and dyssomnia. EBioMedicine. 86, 104381(2022).
  15. Papadopoulos, Z., et al. Differential impact of lymphatic outflow pathways on cerebrospinal fluid homeostasis. J Exp Med. 222 (2), e20241752(2025).
  16. Mehta, N. H., et al. The brain-nose interface: a potential cerebrospinal fluid clearance site in humans. Front Physiol. 12, 769948(2021).
  17. Norwood, J. N., et al. Anatomical basis and physiological role of cerebrospinal fluid transport through the murine cribriform plate. Elife. 8, e44278(2019).
  18. Fan, F., Zhao, N., Guo, M. Lymphatic-venous anastomosis: cracking the code of Alzheimer's disease treatment. Neural Regen Res. , (2025).
  19. Hong, J. P., Chen, W. F., Nguyen, D. H., Xie, Q. A proposed role for lymphatic supermicrosurgery in the management of Alzheimer's disease: a primer for reconstructive microsurgeons. Arch Plast Surg. 52 (2), 96-103 (2025).
  20. Nguyen, L., et al. Role of sigma-1 receptors in neurodegenerative diseases. J Pharmacol Sci. 127 (1), 17-29 (2015).
  21. Pierre, K., et al. Chronic traumatic encephalopathy: diagnostic updates and advances. AIMS Neurosci. 9 (4), 519-535 (2022).
  22. Chen, J. Y., et al. Deep cervical lymphovenous anastomosis (LVA) for Alzheimer's disease: microsurgical procedure in a prospective cohort study. Int J Surg. 111 (7), 4211-4221 (2025).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Lenf D m AnastomozuLenfatik Damar AnastomozuS an Model CerrahisiAlzheimer Hastal ModeliLenfatik DrenajCerrahi aretlerMikrovask ler S turAfferent Lenfatik DamarPosterior Fasiyal Ven
Sıçan Modelinde Derin Servikal Lenfovenöz Anastomoz için Cerrahi Protokoller: Lenf Nodu ve Lenfatik Damar Anastomozları
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.