Bu retrospektif çalışma, kurumsal etik komitesi 2024YX070 tarafından onaylanmış ve Helsinki Bildirgesi'ne uygun olarak yürütülmüştür. Veri setinin müdahaleci olmayan, kimliği yokmuş ve minimum risk nedeniyle, kurumsal politika gereği bilgilendirilmiş onayı muaf tutuldu. Veriler güvenli, erişim kontrollü sunucularda depolanıyordu ve analizler, denetlenebilir bir iz ve önceden belirlenmiş veri dondurma tarihi olan anonim, kilitli bir veri seti kullanıyordu.
Çalışma tasarımı ve ortamı
İkinci primer akciğer kanseri (pLC) geliştiren (BC-pLC) meme kanseri (BC) hastalarını ve sadece BC olan çağdaş hastaları içeren tek merkezli retrospektif bir kohort çalışması gerçekleştirdik. Tüm hastalar Ocak 2012 ile Ocak 2017 arasında tedavi amaçlı ameliyat geçirdi ve 30 Haziran 2023'e kadar takip edildi. BC-pLC kohortu hem primer BC hem de primer akciğer kanserinin patolojik doğrulamasını gerektiriyordu; BC kohortu sadece birincil BC olan hastalardan oluşuyordu. Eğilim puanı eşleşmesi yapılmadı ve bir sınırlama olarak kabul ediliyor; Seçim yanlılığını azaltmak için, kovaryatlar çok değişkenli ayarlama için önceden belirlenmiş ve şeffaf şekilde rapor edilmiştir. Senkron BC-pLC, primerler arasında ≤6 aylık bir tanı aralığı ile metakron BC-pLC >6 ay olarak tanımlanmıştır. Tarama, hariç tutmalar, dahil edilme ve analizleri özetleyen bir akış diyagramı Şekil 1'de sunulmaktadır.
Uygunluk kriterleri ve dava kararı
Uygun katılımcılar ≥18 yaşında, patolojik olarak doğrulanmış erken evre primer BC, mevcut çekirdek klinikopatolojik değişkenler, inceleme için görüntüleme ve belirtilmede merkezi patoloji incelemesi için bloklar/slaytlar bulunuyordu. Hastalar, başka bir bölgede eşzamanlı maşın, BC'den akciğer metastazının radyolojik veya patolojik kanıtı, indeks tanısında metastatik veya tekrarlayan BC veya eksik takip verileri varsa hariç tutuldu. Akciğer lezyonlarının metastatik BC yerine birincil akciğer kanseri olarak sınıflandırılması, histomorfolojiye ve mevcut olduğunda akciğer kökeniyle uyumlu bir immünofenotipik profile (örneğin, adenokarsinom için TTF-1/Napsin A ve skuamöz farklılaşma için p40) dayanıyordu. Uyumsuz veya belirsiz vakalar çok disiplinli uzlaşmayla (meme cerrahisi, torakal cerrahi, radyoloji, patoloji) çözüldü.
Görüntüleme protokolü ve gözetim
BC bakımı sırasında, göğüs görüntülemesi kurumsal yollar izlendi; bunlar arasında tanı sırasında başlangıç aşamalı BT ve gözetim BT genellikle ilk 2-3 yıl boyunca her 6-12 ayda bir, ardından veya semptomlar veya anormal bulgular görüntülemeyi tetiklerse daha erken yapılırdı. Alım parametreleri radyoloji protokollerine göre standartlaştırıldı. Gözetim yoğunluğu tespit ve aşama dağılımını etkileyebildiğinden, potansiyel tespit/teslim süresi yanlılığı hassasiyet analizlerinde görüntüleme yoğunluğu ve takvim süresi dikkate alınarak ele alınmıştır.
Patoloji iş akışı ve immünohistokimya
Tümör örnekleri nötr tamponlu formalin (%4) genellikle 6-24 dakika/mm doku kalınlığında (rutin örnekler için geleneksel olarak 6-24 saat), dehidratlanmış ve parafinle gömülü olarak sabitlendi. 3-4 μm kesitler kesilip şarjlı kaydıraklara monte edildi. Isı kaynaklı epitop alımı, 95-100 °C sıcaklıkta yaklaşık 20 dakika sitrat tamponu (pH 6.0) veya EDTA tamponu (pH 9.0) kullanılarak gerçekleştirildi, ardından oda sıcaklığında 10 dakika soğutma yapıldı. ER, PR, HER2 ve Ki-67 için birincil antikorlar, oda sıcaklığında tipik inkubasyon 30-60 dakika, polimer bazlı ikincil tespit ve 5-10 dakika DAB geliştirme ile doğrulanmış laboratuvar protokollerine göre uygulandı; Slaytlar 30-60 saniye boyunca hematoksilin ile karşı boyandı, kurutuldu, temizlendi ve monte edildi. ER ve PR pozitifliği %≥1 tümör hücre nükleer boyama olarak tanımlandı. HER2, ASCO/CAP 2018 kriterlerini takip etti (IHC ile 3+ veya 2+ ve belirsiz olduğunda yerinde hibritizasyon ile amplifikasyon). Ki-67, önceden belirlenmiş %14 kesim oranında ikilileştirildi. İki board sertifikalı patolog tüm slaytları bağımsız olarak inceledi ve tutarsızlıklar puanlamanın standartlaştırılması için uzlaşmayla çözüldü.
Biyonumune depolama koşulları
Formalin sabitli, parafinle gömülü (FFPE) bloklar, kontrollü oda sıcaklığında (18-25 °C), kuru ve karanlıkta saklanıyor, ortam nemi %60'ın altında tutulurken. Bloklar kurumsal politikaya göre ≥10 yıl boyunca korundu ve orijinal bloktan yeniden kesme, kesim yaşı önceden tanımlanmış kararlılık pencerelerini aştığında gerçekleştirildi. Lekelenmemiş bölümler (3-4 μm) ışıktan korunan sükantlı kapalı sürgü kutularında saklanıyordu. İmmünohistokimya için (ER, PR, Ki-67), lekelenmemiş slaytlar 2-8 °C'de buzdolabında saklandı ve kesitlenmeden sonraki 8 hafta içinde boyandı; Bu eşiğin üzerindeki slaytlar atıldı ve yeniden kesildi. Belirsiz HER2 sonuçlarının yerinde hibritleşme/FISH doğrulanması için, lekelenmemiş slaytlar 2-8 °C depolamada kesitlendikten sonraki 2-4 hafta içinde kullanıldı veya yaşlıysa yeniden kesildi. Depolama sıcaklığı ve kesitleme tarihleri laboratuvar bilgi sistemine kaydedildi ve herhangi bir sapma, boyamadan önce yeniden kesilmeyi tetikledi.
Veri toplama ve yönetim
Demografik ve klinikopatolojik değişkenler, önceden tanımlanmış bir veri sözlüğüne göre elektronik tıbbi kayıttan çıkarıldı. Değişkenler arasında tanı yaşı, menopoz durumu, hipertansiyon, aile öyküsü, primer tümör boyutu, histolojik alt tip ve derece, nodal durum ve incelenen düğüm sayısı, limfovasküler invaziya ve ER, PR, HER2 ve Ki-67 biyobelirteç durumu yer alıyordu. Histolojik alt tipler ve TNM aşamalaması, Tablo 1 ve Tablo 2'de betimleyici bir şekilde özetlenmiş, kısaltmalar ve alt grup tanımları için açıklayıcı dipnotlar yer almıştır. Veri kalitesi prosedürleri, menzil ve mantık kontrolleri ile ikinci bir gözden geçirici tarafından kaynak doğrulamasından oluşuyordu. Analizler, belgelenmiş bir kod kitabı ve manifestosuyla kilitlenmiş bir veri setinden yeniden üretildi.
Sonuçlar ve takip
Genel sağkalma (OS), kanser teşhisi tarihinden herhangi bir nedenle ölüme veya en son takipten sonra ölçüldü. İnvaziv hastalıksız sağkalım (iDFS), tedavi edici tedavinin sonundan invaziv bir nyölenme, yeni bir primer kanserin gelişimi veya alakasız nedenlerden kaynaklanan ölüme kadar hesaplandı. Olaysız yaşayan hastalar son temasta sansürleniyordu. Takip işlemleri 30 Haziran 2023'e kadar telefon bağlantıları, klinik ziyaretleri ve elektronik tıbbi kayıt incelemesi yoluyla gerçekleştirildi. Sebep spesifik ölüm oranı kararlaştırılmadı; Bu nedenle rekabet riskleri analizleri yapılmadı ve bu sınırlama Tartışma'da belirtilmiştir.
İstatistiksel analiz
Sürekli değişkenler normallik açısından Shapiro-Wilk testi kullanılarak değerlendirildi ve uygun ölçüde medyan (IQR) veya ortalama (SD) olarak, kategorik değişkenler ise n (%) olarak özetlendi. Grup karşılaştırmalarında t testi veya Wilcoxon sıralama toplamı testi ve uygun olduğunda ki-kare testi veya Fisher'ın tam testi kullanıldı. BC-pLC korelasyonları için, tek değişkenli lojistik regresyon, a priori değişkenler (tümör boyutu kategorisi, ER, PR, Ki-67) kullanılarak çok değişkenli lojistik regresyon takip edildi; değişken başına olaylar, kollineerlik için varyans şişirme faktörleri ve standart uygunluk tanıları değerlendirildi. Hayatta kalma, Kaplan-Meier tahminleri ve log-rank testleriyle ve yaş, tümör büyüklüğü, nodal durum, ER, PR, HER2, Ki-67 ve kohort (BC-pLC vs BC) orantılı risk modelleri ile değerlendirildi. Orantısal risk varsayımları Schoenfeld kalıntıları kullanılarak değerlendirildi. Eksik veriler tam vaka analiziyle ele alındı ve eksiklik boyutu paydalarda yansıtıldı. ER, PR, HER2 ve Ki-67 genelinde birden fazla biyobelirteç karşılaştırması yapıldıktan sonra, aile bazında hata kontrolü Bonferroni ayarını 0.0125 dengeli bir dereceyle kullanmış ve nominal iki taraflı P değerleri de rapor edilmiştir. Metin ve tablolardaki tüm P değerleri etki boyutları ve %95 güven aralıklarıyla eşleştirilir.
Duyarlılık ve dayanıklılık analizleri
Sağlamlık, aralıklı tabakalı hayatta kalma analizleriyle incelendi; eşzamanlı vakalar ≤12 ay, 13-36 ay ve >36 ay olarak kategorize edilen metakron vakalarla karşılaştırıldı; uyarlanmış risk oranları %95 güven aralıkları ve nominal P değerleri ile birlikte raporlandı. Postoperatif veya adjuvant tedavilerin olay öncesi tahminlerini çarpıtabileceği durumlarda, garanti süresi önyargısını azaltmak için 12 aylık bir dönüm noktası yaklaşımı kullanıldı. Mevcut tedavi sınıflarına göre ek modeller bulundu; akciğer cerrahisi türü, radyoterapi maruziyeti ve sistemik tedavi kategorileri (kemoterapi, hedefli tedavi, immünoterapi) dahil olmak üzere. Duyarlılık analizleri, görüntüleme gözetimi yoğunluğu ve takvim süresini de ele alarak potansiyel tespit ve seküler eğilim yanlılıklarını ele almıştır.
Tekrarlanabilirlik kontrol noktaları
Tekrarlanabilirliği etkileyen temel kontrol noktaları arasında birincil akciğer kanserini metastatik BC'den ayıran açık yargılama kriterleri, ER, PR, HER2 ve Ki-67 için önceden belirlenmiş eşikler, uzlaşma çözümüyle çift bağımsız patoloji okumaları, görüntüleme gözetim yoğunluğunun şeffaf raporlanması ve çokluk kontrolüyle önceden kovaryant spesifikasyon yer aldı. Protokolden sapmalar belgelendi; gerekçe ve sonuçlar üzerindeki potansiyel etkilerinin değerlendirilmesi de dahil edildi.