Yöntem makalesi

Doksorubisin kardiyotoksisitesi fare modelinden ventriküler kardiyosisitlerin izole edilmesi

DOI:

10.3791/70411

⸱

27 Şubat 2026

 ,  ,  , 
1Advanced Institute for Medical Sciences, Dalian Medical University, 2School of Basic Medical Sciences, Xi'an Jiaotong University, 3East China Normal University Health Science Center

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, doksorubisin kaynaklı kardiyotoksisite modelinden canlı yetişkin fare ventriküler kardiyomiyositlerini izole etmek için tekrarlanabilir, Langendorff'tan bağımsız bir yöntemi tanımlar. Doğrudan sol ventriküler antegrad perfüzyon ve ardından kontrollü enzimatik sindirim ile yapısal, moleküler ve fonksiyonel analizler için uygun kalsiyum toleranslı, çubuk şeklinde miyositler elde eder.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Doxorubisin (DOX), klinik uygulaması ilerleyici, doza bağlı kardiyotoksisiteyle sınırlı olan ve ağırlıklı olarak ventriküler miyokardı etkileyen etkili bir kemoterapîtik ilaçtır. Bu bağlamda hücresel hasar mekanizmalarını incelemek, hasta veya yapısal olarak kırılgan kalplerde teknik olarak zorlayıcı olan yetişkin kardiyomiyositlerin güvenilir izolasyonunu gerektirir. Burada, DOX kaynaklı kardiyotoksisiteye sahip farelerden fonksiyonel ventriküler kardiomiyositlerin izole edilmesi için basitleştirilmiş ve tekrarlanabilir Langendorff'suz bir protokolü tanımlıyoruz. C57BL/6 farelerinde DOX modeli kurulduktan sonra kalp hızla kesilir ve aorta ex vivo olarak sıkıştırılır. Geri dolaşımsız antegrad perfüzyon, kalsiyumsuz ve enzim içeren tamponlar kullanılarak doğrudan sol ventrikül üzerinden gerçekleştirilir. Sindirilmiş ventriküler dokunun nazik mekanik dissosiyasyonu, bireysel kardiyomiyositler elde eder ve ardından kontrollü kalsiyum yeniden girişi kalsiyum toleransını yeniden sağlar. Bu yöntem, immünoflüosans, sarkomer organizasyon analizi, apoptoz tespiti ve moleküler sinyal çalışmaları dahil olmak üzere aşağı akış testleriyle uyumlu yüksek kaliteli, uygulanabilir çubuk şeklinde kardiyomiyositler sağlar. Özel Langendorff perfüzyon ekipmanına olan ihtiyacı ortadan kaldırarak, bu protokol, DOX kaynaklı kalp yaralanmasının mekanizmalarını araştıran laboratuvarlar için erişilebilir ve yüksek verimli bir çözüm sunar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Doxorubisin (DOX) güçlü bir antrasiklin kemoterapi ajanıdır, ancak klinik faydası dilatasyona ulaşmış kardiyomiyopati ve kalp yetmezliğine ilerleyebilen kümülatif kardiyotoksisitenedeniyle sınırlıdır 1,2. Kardiyomiyosit apoptozu bu toksisitede önemli birpatojenik süreçtir 3,4,5 ve bu hücresel olayların incelenmesi, DOX hasarlı kalplerden türetilen fonksiyonel yetişkin kardiyomiyositlere güvenilir erişim gerektirir. Ancak DOX'a maruz kalma, kardiyomiyositleri yapısal olarak kırılgan ve metabolikolarak zayıf hale getirir; bu da izolasyon sırasında enzimatik ve mekanik strese karşı duyarlılıklarını büyük ölçüde artırır ve düşük canlılığa yol açar. Daha geniş literatürde, Langendorff perfüzyonu yetişkin kardiyomiyosit izolasyonu için baskın yöntemolarak kalmaktadır 7. Ancak, hasarlı miyokardyuma uygulandığında belirgin sınırlamaları vardır. Bu yöntem özel donanım, hassas aort kanülasyonu ve önemli teknik yeterlilik gerektirir; DOX ile tedavi edilen kalplerde, Langendorff perfüzyonu sırasında eklenen ek mekanik gerinti hücre hasarını daha da kötüleştirebilir ve tutarsız ve çoğu zaman optimal olmayan sonuçlarverebilir 8.

Bu zorlukların üstesinden gelmek için, akut DOX kaynaklı kardiyotoksisite 9 fare modelinden kalsiyum-tolerans yetişkin ventriküler kardiyositleri izole etmek için basitleştirilmiş ve erişilebilir bir protokololuşturduk. Geleneksel Langendorff perfüzyon ihtiyacını ortadan kaldırarak ve bunun yerine doğrudan sol ventrikül üzerinden kontrollü ex vivo antegrad perfüzyon uygulayarak, bu yöntem iskemik maruziyeti en aza indirir ve miyokard mekanik manipülasyonunu azaltır. Bu özelliklerin, prosedürel tutarlılığı iyileştirmesi ve zayıf kalplerden türetilen hassas kardiyomiyositlerin hayatta kalmasınıartırması beklenmektedir 7,10.

Mevcut yaklaşım, Langendorff-serbest kardiyomiyosit izolasyonunda ortaya çıkan gelişmeler üzerine inşa edilir ve bu kavramları, olgun kasılma mimarisi ve kalsiyum işleme özelliklerinin korunmasını gerektiren yetişkin ventriküler hücrelere genişletilir; bu özellikler, öncelikle yenidoğan kalpler için geliştirilen basitleştirilmiş sindirim yöntemleriyle yeterince desteklenmemektedir11,12. Bu protokol, özel perfüzyon sistemleri olmayan laboratuvarlar için pratik ve tekrarlanabilir bir alternatif sunar. İzole kardiyomiyositler yapısal bütünlüklerini korur ve sarkomer analizi, immünofluoresans görüntüleme ve apoptoz sinyal çalışmaları gibi çeşitli sonraki uygulamalar için uygundur; böylece DOX kaynaklı kalp yaralanmasının fizyolojik olarak ilgili doğrudan mekanik incelemesini mümkün kılar. Bu protokol, DOX yaralı kalplerden canlı kardiyomiyositlerin izole edilmesi için kritik ve karşılanmamış bir ihtiyacı karşılar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvan prosedürleri, laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için kurumsal ve ulusal yönergelere uygun olarak yürütüldü ve Xi'an Jiaotong Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi tarafından incelenip onaylandı (Onay No. XJTUAE2022-1441). Kullanılan tüketim malzemeleri, reaktifler ve ekipmanlar Malzeme Tablosu'nda listelenmiştir.

1. C57BL/6 farelerinde DOX kaynaklı akut kardiyotoksisite modelinin oluşturulması

  1. Hayvan hazırlığı: 8-12 haftalık erkek C57BL/6 faresi (24-28 g) kullanın. Standart koşullarda, 12 saat ışık/karanlık döngü ve doğaçlı olarak yiyecek ile suya erişim sağlayan hayvanlar. Fareleri rastgele DOX ile tedavi edilmiş veya tuzlu su kontrol gruplarına (n = grup başına 3) atanır.
  2. DOX yönetimi
    1. Steril salinte 1.5 mg/mL ile yeni DOX çözeltisi hazırlayın. Kabı alüminyum folyo ile sararak çözeltiyi ışıktan koruyun.
    2. Her fareyi tartın ve tek intraperitoneal (i.p.) doz için enjeksiyon hacmini hesaplayın: 15 mg/kg 13,14.
    3. Fareyi nazikçe tutun ve DOX solüsyesini intraperitoneal enjeksiyonla uygulayın. Fareyi kafesine geri götürün ve deneysel programa göre ilerleyin.
      DIKKAT: DOX sitotoksik bir ajandır. Uygun kişisel koruyucu ekipman (laboratuvar önlüğü, eldiven, göz koruma) giyin ve reaktifi belirlenmiş bir kimyasal güvenlik alanında kullanın.
  3. Zaman çizelgesi ve izleme: Fareleri genel sağlık ve davranış açısından günlük olarak izleyin. Her iki günde bir vücut ağırlığını kaydet. DOX enjeksiyonundan 7 gün sonra kardiyosit izolasyonu yapın.

2. Kardiyomiyosit izolasyonu için çözeltiler ve cerrahi aletlerin hazırlanması

  1. Tampon hazırlığı: Bu çözeltilerin ayrıntılı hazırlanma yöntemleri için Ek Tablo 1'e bakınız.
    1. Perfüzyon tamponu ve EDTA tamponu hazırlanın. Tüm çözeltilerin pH'ını NaOH ile 7.4'e ayarlayın.
    2. Perfüzyon tamponu ile kollagenaz tip II, kollajenaz tip IV ve proteaz XIV içeren enzim sindirim çözeltisi hazırlayın.
    3. Perfüzyon tamponuna %5 fetal sığır serumu (FBS) ekleyerek durdurma tamponu hazırlayın.
    4. M199 ortamına %0,1 sığır serum albümini (BSA), insülin-transferrin-selenyum (ITS), 10 mM 2,3-Butanedion monoksimi (BDM), lipid konsantre ve penisilin/streptomisin (P/S) ekleyerek tam bir kültür ortamı hazırlayın.
    5. Kalsiyum yeniden giriş tamponları, sırasıyla 0,34 mM, 0,68 mM ve 1,02 mM nihai kalsiyum konsantrasyonlarında perfüzyon tamponu eklenerek kalsiyum yeniden giriş tamponları hazırlanır.
      NOT: Tüm çözeltileri steril koşullarda 0.22 μm filtrasyon ile hazırlayın. Çözümleri 4 °C'de, ışıktan korunarak iki haftaya kadar saklayın. Bir fare kalbinin izolyasyonu için 50 mL EDTA tamponu, 100 mL perfüzyon tamponu (60 mL kollagenaz çözeltisi için, 10 mL stoplayıcı tampon için, kalan perfüzyon ve yerçekimi çökeltmesi için), 60 mL kollagenaz tamponu ve 10 mL durdurma tamponu hazırlanır.
  2. Cerrahi alet hazırlığı: İşlemden önce tüm cerrahi aletleri otoklavlama ile sterilize edin. Cerrahi alanda aşağıdaki aletleri sıralı olarak düzenleyin: ince makas, kavisli makas, forseps, kavisli hemostatik forseps (Şekil 1A) ve şırınga pompası (Şekil 1B).

3. DOX ile tedavi edilen kalplerden kardiyomiyositlerin izolasyonu

NOT: Kardiyomiyosit izolasyon prosedürünün şematik bir genel görünümü Şekil 2'de gösterilmiştir. Tüm cerrahi aletlerin, ekipmanların ve çözümlerin hazır olduğu doğrulandıktan sonra izolasyona başlayın.

  1. Aort klepçesi ve kalp eksizyonu
    1. Fareyi %3 izofluran ile anestezi yapın ve anestezi uygulanmasını parmaksıkıştırma 15'e yanıt vermediğini kontrol ederek doğrulayın.
    2. Fareyi diseksiyon tahtası üzerinde sırtüstü pozisyonda sabitleyin.
    3. Kalp ortaya çıkacak şekilde deri ve göğüs duvarından orta hat kesimi yapın ve inen aortayı kesin.
    4. 7 mL EDTA tamponunu kontrollü ve sabit bir hızda sağ ventrikülün tabanına yaklaşık 1 dakika boyunca perüze ederek ventriküllerden kanı hızla uzaklaştırırken, iskemik maruziyeti en aza indirir ve özellikle hassas DOX yaralı kalplerde kalp yapısal bütünlüğünü korur (Şekil 2A).
    5. Yükselen aortu hızlıca kelepçe yapın (Şekil 2B), kalbi kesin ve hemen buz gibi soğuk EDTA tamponu içeren 100 mm'lik bir kaba aktarın.
      NOT: Torakotomiden kalp transferine kadar olan toplam süre, işemiyi en aza indirmek için ideal olarak 2 dakikanın altında tutulur.
  2. Perfüzyon kurulumu
    1. Çevredeki dokuyu dikkatlice kesin.
    2. Kalbi, buz gibi perfüzyon tamponu içeren bir diseksiyon kabına yerleştirin.
    3. 10 mL EDTA tamponu, iç iğneyle sol ventrikülün zirvesinden 6 dakika boyunca düzenli olarak perfüz ile ekstrahücre bağlantılarını destabilize eder.
    4. Kalbi başka bir 100 mm tabağa aktarın ve kalıntı EDTA'yı kalp odalarından 3 mL perfüzyon tamponunu aynı kateterden 2 dakika boyunca perfüzye ederek çıkarın.
      NOT: Perfüzyon sırasında kalp şişliğini gözlemleyin ve aortu kavisli hemostatik forsepsle sabitleyerek kapalı bir perfüzyon sistemi oluşturun. Perfüzyon oranını ve basıncı dikkatlice kontrol ederek aşırı hidrostatik kuvveti önleyin ve sol atriyal yırtma riskini en aza indirin.
  3. Enzimatik sindirim
    1. Kesilen kalbi, içinde 5 mL enzim sindirim çözeltisi içeren 100 mm bir kaba aktarın.
    2. Yerleşik iğneyi, enzim sindirim solüsyonuyla doldurulmuş 20 mL'lik bir şırıngaya bağlayın ve iğneyi sterilizasyon gösterge bandı ile biyogüvenlik dolabı çalışma yüzeyine güvenli bir şekilde sabitleyin.
    3. Şırıngayı mikroenjeksiyon pompasına yerleştirin ve kontrollü 3 dakika/mL hızda perfüzyonu başlatın (Şekil 2C).
    4. Kalbi, sol ventrikül üzerinden enzim çözeltisi ile 60-90 dakika boyunca perfüze edilir; tam sindirim sağlanana kadar; bu, doku elastikiyetinin tamamen kaybı ve ventriküler yüzeyin soluk renklenmesi ile gösterilir (Şekil 2D). İlk perfüzyondan sonra eksik sindirim gözlemlenirse, sindirimin devam etmesi için ek 15-20 ml enzim çözeltisi verilmelidir.
      NOT: Şırınga değişimi sırasında iğnenin yerinden çıkmasını önleyin; Eğer yerinden çıkarılırsa, perfüzyon yolunu korumak için orijinal sol ventrikül yerine yeniden yerleştirin.
  4. Doku ayrışması
    1. Sindirilmiş kalbi, içinde 5 mL durdurma tamponu içeren 60 mm'lik bir kaba aktarın.
    2. İnce forseps kullanarak ventriküler dokuyu küçük parçalara ayırın (Şekil 2E).
    3. Ventriküler doku süspansiyonunu 5 mL pipetle nazikçe tritüre ederek bireysel kardiyomiyositleri ayırın (Şekil 2F).
    4. Hücre süspansiyonunu 100 μm hücre süzgeciyle filtreleyerek büyük doku parçalarını çıkarın.
    5. Hücre verimini maksimize etmek için süzgeçi ek 5 mL durdurma tamponu ile durulayın.
      NOT: Tüm triturasyon adımlarını nazikçe yapın ve kardiyomiyositlere mekanik zarar vermemek için pipetlemeyi 50 tekrardan fazla tutmayarak sınırlayın.
  5. Kalsiyumun yeniden girişi
    NOT: Kardiyomiyositlerin 15 mL santrifüj tüplerinde 3-4 ardışık 15 dakikalık yerçekimi sedimentasyonu geçirmesine izin verin (Şekil 2G). Her tortulmadan sonra, süpernatantın %80'ini dikkatlice çıkarın ve peleti sonraki kalsiyum yeniden giriş tamponunun 3 mL'sinde yeniden süspana ekleyin. Her adımda hazırlanan gradyan çözeltileriyle kalsiyum konsantrasyonunu kademeliolarak artırın 16.
  6. Hücre sayımı ve kaplama
    1. Hücre yoğunluğunu hemositometre kullanarak nicelikle ölçer ve çubuk şeklindeki ile yuvarlak kardiyomiyositlerinoranını hesaplayın 1,9 (Şekil 2H).
    2. Plaka 1-5, kaplama ortamında 105 hücre × laminin (10 μg/mL) ile önceden kaplanmış 6 delikli plakalara 37 °C'de 1 saat boyunca ve fosfatla tamponlanmış tuzlu (PBS) yıkanmaya devam eder. Tabakları bir gün önceden hazırlayın ve gerekirse 4 °C'de saklayın. Medyayı 1 saat sonra ve ardından her 48 saatte bir taze, önceden ısıtılmış kültür ortamına dönüştürün.
      NOT: Protokol, 3.6. adımdan sonra duraklatılabilir. Hücreler, kısa süreli kültürde 6 saate kadar tutulabilir ve hemen deneyler yapılabilir.

4. Kardiyomiyositlerin yapısal bütünlüğünün immünboyama ile değerlendirilmesi

  1. Hücreleri oda sıcaklığında 15 dakika boyunca %4 paraformaldehit ile sabitleyin.
  2. Hücreleri PBS ile üç kez yıkayın, her biri 5 dakika.
  3. Hücreleri %0,1 Triton X-100 ile PBS'de 10 dakika geçirin ve PBS ile üç kez, her biri 5 dakika yıkayın.
  4. PBS'de %1 BSA ile spesifik olmayan bağlanmayı 1 saat bloklayın.
  5. Sarkomerik α-aktinine karşı birincil antikorla hücreleri gece boyunca 4 °C'de inkübe edin.
  6. PBS ile nazikçe üç kez yıkayın, ardından uygun floresan ikincil antikorla oda sıcaklığında 1 saat kuluçka yapın.
  7. PBS ile nazikçe üç kez yıkayın, ardından çekirdekleri DAPI ile 5 dakika boyunca karşı boyaya geçirin.
  8. Örtü kaymalarını antifade montaj ortamı kullanılarak cam slaytlara monte edin.
  9. Lekelenme desenlerini görselleştirmek için floresans mikroskobu kullanarak görüntüler alın.

5. İzole kardiyomiyositlerde apoptotik sinyal analizi

  1. Protein ekstraksiyonu ve nicelik
    1. RIPA bazlı tampon içinde proteaz ve fosfataz inhibitörleriyle takviye edilen kardiyomiyositler.
    2. Homojenleri 12.000 × g'de 4 ° C'de 15 dakika boyunca santrifüj yapın. Üst yüzeyi sonraki analiz için toplayın.
    3. Protein konsantrasyonunu bicinchoninic asit kolorimetrik testle belirleyin.
  2. Western Blot analizi
    1. SDS-poliakrilamid jellerinde 30 μg protein ayırın ve çözülen proteinleri PVDF membranlarına aktarın.
    2. Zarları %5 yağsız sütle bloke edin, TBS'de %1 Tween-20 içerir, ardından 4 °C'de gece boyunca Bax, Bcl-2 ve kesilmiş kaspaz-3'e karşı birincil antikorlarla inkubasyon yapın; bunlar DOX-kardiyotoksisite çalışmalarında sıkça değerlendirilen ana protein belirteçleri17.
    3. Uygun yaban turpu peroksidaz ile konjuge ikincil antikorlarla kuluçka yapın. Gelişmiş kemimilüminesans reaktifiyle sinyalleri tespit edin ve dijital görüntüleme sistemiyle görüntüler alın18.
  3. Veri analizi
    1. Üç bağımsız biyolojik kopyadan ortalama ± SEM olarak nicel verileri sunun.
    2. GraphPad Prism kullanarak istatistiksel analizler yap, birden fazla grup ve zaman noktası arasında karşılaştırmalar için iki yönlü ANOVA veya iki grup arasındaki karşılaştırmalar için eşleşmemiş iki kuyruklu t-testi uygulayın. P < değeri 0.05 istatistiksel olarak anlamlı olarak kabul edildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücre verimi ve yaşamlılığının değerlendirilmesi

DOX alan farelerde, salin ile tedavi edilen gruba göre vücut ağırlığında belirgin bir düşüş görüldü (Ek Şekil 1A). Akut DOX kaynaklı kardiyotoksisite modelinin başarılı kurulması, kalp kesitlerinin terminal deoksinükleotidil transferaz dUTP nick end etiketleme (TUNEL) boyama ile görülen belirgin artışlarla (Ek Şekil 1B,C) serum kalp hasarı belirteçlerinde belirg...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yüksek kaliteli, kalsiyuma dayanıklı yetişkin kardiyomiyositlerin başarılı izolasyonu, kalp patofizyolojisinin hücresel düzeyde çalışmaları için gereklidir. Bu protokol, hem sağlıklı hem de patolojik fare kalplerinden fonksiyonel kardiyomiyositler elde eder; iki adım hücre canlılığını korumak için özellikle kritik öneme sahiptir. Öncelikle, enzimatik perfüzyonun süresini dikkatlice optimize edin ve izleyin. Yetersiz sindirim zayıf doku ayrışmasına ve düşük verime yol açarken, aşırı sindi...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Çin Doğa Bilimleri Vakfı tarafından desteklendi (N. Wang'a 82230012 ve 81830015, L. Xiao'ya 82570478 hibe verildi).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
100 mm hücreli cluture kaplarJet Biyo-Filtrasyonu TCD000100
100 μ M hücre süzgeciCorning431752
15 mL santrifüj tüpleriJet Biyo-Filtrasyonu CFT011150
50 mL santrifüj tüpleriJet Biyo-Filtrasyonu CFT011500
60 mm hücre kültürü çanaklarıJet Biyo-Filtrasyonu TCD100060
Sığır Serum Albümini (BSA)Sigma-AldrichA1470 
Kollagenaz IISigma-AldrichC6885
Kollagenaz IVSigma-AldrichC5138
Eğimli hemostatik forsepslerRWD Yaşam BilimleriF22003-10
Kavisli uçlu makasRWD Yaşam BilimleriS12001-09
İnce makasRWD Yaşam BilimleriS12000-09
ForsepsRWD Yaşam BilimleriF13014-12
Yerleşik kanül (26G)Becton, Dickinson ve Şirketi381312
İnsülin-Transferrin-Selenyum (ITS)MedChemExpressHY-150287
İzofluran   RWD Yaşam BilimleriR510-22-10
Laminin (sürün)Termo Bilimsel23017015
Lipid Konsantre (Kimyasal olarak tanımlanmış)MedChemExpressHY-K3019
M199 OrtaSigma-AldrichM4530
Penisillin-StreptomisinMedChemExpress  HY-K1006
Proteaz XIVSigma-AldrichP5147
Sterilizasyon Gösterge BandıMinnesota Madencilik ve Üretim (3M)CT060934701
Şırınga Pompası (ISPLab01)Baoding Shenchen Hassas PompasıSC-49464A

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Singal, P. K., Iliskovic, N. Doxorubicin-induced cardiomyopathy. N Engl J Med. 339 (13), 900-905 (1998).
  2. Zamorano, J. L., et al. ESC Position paper on cancer treatments and cardiovascular toxicity developed under the auspices of the ESC Committee for practice guidelines: task force for cancer treatments and cardiovascular toxicity of the European Society of Cardiology (ESC). Eur Heart J. 37 (36), 2768-2801 (2016).
  3. Xu, C., et al. Usp38 promotes oxidative stress and inflammation and aggravates doxorubicin-induced cardiotoxicity by deubiquitinating and stabilizing pten. Int Immunopharmacol. 167, 115750(2025).
  4. Yue, M. Y., et al. Salviae miltiorrhizae radix et rhizoma protects against doxorubicin-induced cardiotoxicity: A systematic review. Phytomedicine. 148, 157244(2025).
  5. Kong, C. Y., et al. Underlying the mechanisms of doxorubicin-induced acute cardiotoxicity: Oxidative stress and cell death. Int J Biol Sci. 18 (2), 760-770 (2022).
  6. Domínguez Romero, Y., Ortiz Montoya, G., NovoaHerrán, S., Osorio Mendez, J., Gomez Grosso, L. A. Mirna expression profiles in isolated ventricular cardiomyocytes: Insights into doxorubicin-induced cardiotoxicity. Int J Mol Sci. 25 (10), 5272(2024).
  7. Li, H., et al. Optimized Langendorff perfusion system for cardiomyocyte isolation in adult mouse heart. J Cell Mol Med. 24 (24), 14619-14625 (2020).
  8. Gharanei, M., Hussain, A., Janneh, O., Maddock, H. L. Doxorubicin-induced myocardial injury is exacerbated following ischaemic stress via opening of the mitochondrial permeability transition pore. Toxicol Appl Pharmacol. 268 (2), 149-156 (2013).
  9. O'connell, T. D., Rodrigo, M. C., Simpson, P. C. Isolation and culture of adult mouse cardiac myocytes. Methods Mol Biol. 357, 271-296 (2007).
  10. Liu, Y., Dostal, D. E., Tong, C. W. Isolation of adult mouse cardiomyocytes using Langendorff perfusion apparatus. Methods Mol Biol. 2319, 143-152 (2021).
  11. Bongiovanni, C., et al. Protocol for isolating and culturing neonatal murine cardiomyocytes. STAR Protoc. 5 (4), 103461(2024).
  12. Vidyasekar, P., Shyamsunder, P., Santhakumar, R., Arun, R., Verma, R. S. A simplified protocol for the isolation and culture of cardiomyocytes and progenitor cells from neonatal mouse ventricles. Eur J Cell Biol. 94 (10), 444-452 (2015).
  13. Li, L., et al. Preventive effect of erythropoietin on cardiac dysfunction in doxorubicin-induced cardiomyopathy. Circulation. 113 (4), 535-543 (2006).
  14. Zhang, X., et al. Rosmarinic acid alleviates cardiomyocyte apoptosis via cardiac fibroblast in doxorubicin-induced cardiotoxicity. Int J Biol Sci. 15 (3), 556-567 (2019).
  15. Oh, S. S., Narver, H. L. Mouse and rat anesthesia and analgesia. Curr Protoc. 4 (2), e995(2024).
  16. Ackers-Johnson, M., et al. A simplified, Langendorff-free method for concomitant isolation of viable cardiac myocytes and nonmyocytes from the adult mouse heart. Circ Res. 119 (8), 909-920 (2016).
  17. Zhang, X., et al. Fndc5 alleviates oxidative stress and cardiomyocyte apoptosis in doxorubicin-induced cardiotoxicity via activating Akt. Cell Death Differ. 27 (2), 540-555 (2020).
  18. Mahmood, T., Yang, P. C. Western blot: Technique, theory, and troubleshooting. N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).
  19. Guo, G. R., et al. A modified method for isolation of human cardiomyocytes to model cardiac diseases. J Transl Med. 16 (1), 288(2018).
  20. Judd, J., Lovas, J., Huang, G. N. Isolation, culture, and transduction of adult mouse cardiomyocytes. J Vis Exp. (114), e54012(2016).
  21. Łoboda, A., Zieliński, T., Dulak, J. Cell-free strategies for cardiomyocyte proliferation and heart repair. Pharmacol Rep. , 00805-00807 (2025).
  22. Alam, P., et al. Cardiac remodeling and repair: Recent approaches, advancements, and future perspectives. Int J Mol Sci. 22 (23), 13104(2021).
  23. Seibertz, F., et al. A modern automated patch-clamp approach for high-throughput electrophysiology recordings in native cardiomyocytes. Commun Biol. 5 (1), 969(2022).
  24. Gorski, P. A., Kho, C., Oh, J. G. Measuring cardiomyocyte contractility and calcium handling in vitro. Methods Mol Biol. 1816, 93-104 (2018).
  25. Li, A., Gao, M., Jiang, W., Qin, Y., Gong, G. Mitochondrial dynamics in adult cardiomyocytes and heart diseases. Front Cell Dev Biol. 8, 584800(2020).
  26. Woodcock, E. A., Matkovich, S. J. Cardiomyocytes structure, function and associated pathologies. Int J Biochem Cell Biol. 37 (9), 1746-1751 (2005).
  27. Gan, P., et al. Rbpms is an RNA-binding protein that mediates cardiomyocyte binucleation and cardiovascular development. Dev Cell. 57 (8), 959-973.e7 (2022).
  28. Jia, K., et al. RNA helicase ddx5 maintains cardiac function by regulating camkiiδ alternative splicing. Circulation. 150 (14), 1121-1139 (2024).
  29. Zhuang, L., et al. Dyrk1b-stat3 drives cardiac hypertrophy and heart failure by impairing mitochondrial bioenergetics. Circulation. 145 (11), 829-846 (2022).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Kardiyomiyosit zolasyonuFare Kalp ModeliKalsiyumsuz TamponMekanik DisosyasyonKardiyak Yaralanma MekanizmalarApoptoz TespitiSarkomer Organizasyonumm nofloresan Analiz

İlgili makaleler