Method Article

Birincil İnsan Endometriyal Epitel Hücrelerinin İzolasyonu ve Uzun Vadeli Genişlemesi için Basitleştirilmiş ve Sağlam Bir Protokol

DOI:

10.3791/70429

⸱

April 10th, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The International Education College of Zhejiang Chinese Medical University, 2The First Clinical Medical College of Zhejiang Chinese Medical University, 3Department of Breast Surgery, The First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University (Zhejiang Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine), 4Quzhou TCM Hospital at the Junction of Four Provinces Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University, 5Bozhou District Hospital of Traditional Chinese Medicine, 6The Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital of Shihezi University

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İnsan endometriyal epitel hücrelerinin (HEEC) birincil kültürü teknik olarak zordur. Bu protokol, karışık enzim sindirimini ROCK inhibitörü (Y-27632) ile birleştirerek hücre hayatta kalma ve genişlemesini iyileştirerek epitel kimliğini korurken endometriyal araştırmalar ve rejeneratif uygulamalar için sağlam bir platform sağlar.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tamoksifen ile ilişkili endometriyal hiperplazi dahil endometriyal bozukluklar üzerine yapılan araştırmalar, sağlam in vitro epitel modellerinin eksikliği nedeniyle sınırlı olmuştur. İnsan endometriyal epitel hücrelerini (HEEC) izole etmek için geleneksel yöntemler genellikle verimsiz, teknik olarak zorlayıcı ve ölçeklenebilir değildir. Burada, karışık enzim sindirimi, eritrosit lizisi ve sürekli ROCK inhibitörü (Y-27632) tedavisini entegre ederek birincil HEEC'lerin verimli izolasyonu ve genişlemesini sağlayan basitleştirilmiş ve besleyicisiz bir protokol tanımlanmıştır. Y-27632'nin dahil edilmesi, dissosiyasyonla indüklenen apoptozu azaltmak ve erken evre hücre yapışmasını artırmak için kritiktir. Bu yaklaşım, en az 3 pasaj boyunca epitel kimliğini korurken seri geçişi destekler; morfoloji ise 10 pasajdan sonra korunur. Western blot ve immünoflüoresans ile karakterizasyon, Cytokeratin 18 ve E-cadherin'in yüksek ekspresyonunu doğrulamış ve seçici kültür koşullarında vimentin pozitif stromal kirleticilerin kademeli azalmasını sağlamaktadır. Temel teknik sınırlamaları ele alarak, bu yöntem mekanik çalışmalar, hastalık modellemesi, ilaç taraması ve endometriyal araştırmalarda rejeneratif uygulamalar için güvenilir ve ölçeklenebilir bir epitel hücre kaynağı sağlar. Standartlaştırılmış iş akışı, karmaşık ortak kültür sistemlerine alternatif sunarak yüksek kaliteli birincil hücre modellerine daha geniş erişim sağlar.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Güvenilir in vitro modeller, özellikle tamoksifen (TAM) ile ilişkili endometrium bozukluklarının incelenmesini ilerletmek için gereklidir. TAM meme kanseri için endokrin tedavi olarak yaygın olarak kullanılsa da, endometriumdaki kısmi östrojen-agonist aktivitesi endometrium hiperplazisi, polipler ve bazı durumlarda malign dönüşüm insidansını belirginşekilde artırır 2. Tamoksifen ile ilişkili endometriyal patolojinin mevcut klinik yönetimi esas olarak progesteron tedavisi veya cerrahi müdahaleye dayanmaktadır; her ikisinin de önemli sınırlamaları vardır. Progesteron tedavisi sıklıkla atılma kanaması ve kilo alımı gibi yan etkilerle ilişkilidir; cerrahi yaklaşımlar ise geri dönüşü olmayan endometriyal hasara ve doğurganlığızayıflatabilir 3. Bu sınırlamalar, mekanik çalışmaları destekleyebilecek ve geliştirilmiş terapötik stratejilerin geliştirilmesine yardımcı olabilecek sağlam epitel modellere olan ihtiyacı vurgulamaktadır. Ancak, bu alandaki ilerleme öncelikle yüksek saflıkta, genişletilebilir insan endometriyal epitel hücrelerinin (HEEC) elde edilmesindeki teknik zorluklarla sınırlı olmuştur.

Bu alandaki temel çalışmalar Arnold ve ark. (2001) tarafından bildirilmiştir; kollagenaz sindirimi ve ardışık elek filtrasyonu yoluyla stromal ve epitel hücre popülasyonlarını izole etmiş ve immünboyama ile %98'den fazla saflığaulaşmışlardır 4. Başarısına rağmen, yöntem tek enzimli sindirime dayanıyordu, uzun süreli işlem gerektiriyordu ve stromal ile eritrosit kirleticilerini çıkarmak için kademeli filtreleme ile bu da iş akışını emek yoğun ve standartlaştırmayızorlaştırıyordu. Daha sonra, Yokomizo ve ark. (2002), histerektomi örneklerinden stromal besleyici hücreler 5 ile üç boyutlu bir ortak kültür kullanarak birincil HEEC kültür sistemikurmuştur. Besleyici tabanlı mikro ortam kısmen epitel büyümesini desteklerken, sistem genellikle beşten fazla olmayan sınırlı geçişe izin verirdi ve bu da büyük ölçekli, stabil epitel genişlemesi gerektiren uygulamalarda faydasınısınırlardı.

Bu sınırlamaların üstesinden gelmek için, HEEC izolasyonu ve uzun vadeli kültür için basitleştirilmiş ve yüksek derecede tekrarlanabilir bir protokol geliştirildi. ROCK inhibitörü Y-27632'nin insan keratinositleri, diş eti epitel hücreleri ve meme epitel hücreleri için birincil kültür verimliliğini belirgin şekilde artırdığını gösteren önceki çalışmalar rehberliğinde, aynı prensip endometriyal doku 6,7,8'e uygulanmıştır. Bu yaklaşım üç temel özelliği içerir: etkili doku ayrışmasını teşvik etmek için karma enzimli sindirim, erken kontaminasyonu azaltmak ve epitel bağlanmasını kolaylaştırmak için temel bir eritrosit lizi adımı ve apoptozu bastırmak, yapışmayı desteklemek ve proliferatif kapasiteyi artırmak için sürekli Y-27632 takviyesi. Bu strateji kullanılarak, HEEC'ler epitel morfolojisi ve CK18 ile E-kadherin 9,10'un yüksek ekspresyonunu korurken birden fazla geçiş boyunca genişletilebilir. Özellikle, en az 3 nesil boyunca seri geçiş fenotipik kaymaya yol açmamış ve kültür sisteminin kararlılığını ve ölçeklenebilirliğini göstermiştir.

Bu yöntem, yüksek doku girdi gereksinimleri, karmaşık iş akışları, düşük tekrarlanabilirlik ve sınırlı genleşme potansiyeli gibi birincil HEEC kültüründeki uzun süredir devam eden teknik zorlukları doğrudan ele alır. Epitel kimliğini ve fonksiyonel özellikleri geçiş boyunca koruyarak, protokol endometriyal rejenerasyon, patofizyoloji, yüksek verimli ilaç taraması ve hücre-biyomateryal etkileşimleri üzerine araştırmalar için güvenilir bir platform sağlar. Bu standart iş akışı, doku işlemeyi seri genişlemeyle entegre ederek, üreme biyolojisinde uzun süredir devam eden darboğazı giderir ve doku mühendisliği, rejeneratif tıp ve kişiselleştirilmiş terapide gelecekteki uygulamaları destekler.

Bu protokol, tercihen toplandıktan sonra 24 saat içinde işlenilen yeni doku örnekleri gerektirir. Hücre verimi ve büyüme özellikleri, endometriyal polipler ile normal endometrium gibi doku kaynağına bağlı olarak değişebilir. Yaygın başarısızlık kaynakları arasında eksik doku sindirimi, aşırı eritrosit kontaminasyonu veya yetersiz Y-27632 takviyesi yer alır. Sistem birden fazla geçişte genleşmeyi desteklese de, genişletilmiş kültür sırasında fenotipik stabiliteyi korumak için daha fazla optimizasyon gerekebilir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zhejiang Çin Tıp Üniversitesi İlk Bağlı Hastanesi'nde hastalardan cerrahi olarak rezek edilen rahim polip örneklerinden taze endometriyal doku örnekleri alındı. Tüm işlemler, Zhejiang Çin Tıp Üniversitesi Birinci Bağlı Hastanesi Tıbbi Etik Komitesi tarafından onaylanan yönergeler doğrultusunda gerçekleştirildi (Protokol No. 2025-KLS-569-01; 14 Eylül 2025'te onaylandı). Birincil insan örneklerinin işlenmesi, laboratuvar önlükleri, eldivenler ve göz koruma gibi uygun kişisel koruyucu ekipmanlarla Sınıf II biyolojik güvenlik kabininde gerçekleştirildi. Tüm enzimatik reaktifler, kurumsal güvenlik düzenlemeleri ve Malzeme Güvenlik Veri Formları (MSDS) yönergelerine uygun olarak işlendi.

1. Doku edinimi

  1. Yetişkin kadınlardan alınan cerrahi örneklerden taze endometriyal doku toplayın. Doku, %3 penisilin/streptomisin (P/S) takviyesi olan 10 mL fosfat-tamponlu salin (PBS) içeren steril tüplere aktarılır.
    NOT: Tüm dokular ameliyattan sonra 24 saat içinde işlenmelidir.

2. Doku ön tedavisi

  1. Dokuyu yıkama solüsyonunda (Tablo 1) iki ardışık yıkama boyunca her biri 2 dakikalık iki yıkama boyunca karıştırarak mukus ve kan pıhtılarını çıkarın.
  2. Yüzeyi dezenfekte etmek için dokuyu 5 mL %75 etanol ile 5 saniye boyunca kısa bir süreliğine durulayın.
  3. Dokuyu hemen 20 mL yıkama solüsyonuna aktarın ve kalan etanol gidermek için her biri 5 dakika olan iki yıkama boyunca yıkayın.
    NOT: Etanol yanıcı olduğundan, bu adımı açık alevlerden uzaklaştırın ve etanol içeren atıkları kurumsal kimyasal güvenlik yönergelerine uygun olarak bertaraf edin.

3. Doku sindirimi ve hücre hasatı.

  1. Doku doğraması
    1. Endometriyal dokuyu iki steril bıçakla doğrayın, yaklaşık 1 mL'lik pipet ucu (~2 mm3) parçaları (yaklaşık 10 dakika) bir pipet ucuyla aspirasyon yapılana kadar doğranın.
    2. Kıyılmış dokuyu 50 mL'lik santrifüj tüpüne aktarın.
  2. Enzimatik sindirim
    1. Doku parçalarını içeren tüpe 10 mL sindirim çözeltisi (Tablo 1) ekleyin.
    2. Tüpü 37 °C'lik su banyosunda 30 dakika kuluçka yapın. Sindirimi kolaylaştırmak için tüpü her 15 dakikada bir nazikçe sallayın.
    3. Kuluçka sürecine dokunun parçaları gözle görülür şekilde ayrılana ve çözültünün salınan hücreler nedeniyle bulanık görünmesine kadar devam edin.
  3. Sindirimin sonlandırılması
    1. Enzimatik sindirimi sonlandırmak için 10 mL nötralize edici çözelti ekleyin.
    2. 800 μL'ye ayarlanmış P1000 pipeti ile yaklaşık 15 kez yukarı ve aşağı pipetle iyice karıştırın.
  4. Filtreleme ve santrifüjleme
    1. Sindirilmiş süspansiyonu 100 μm mesh filtreyle filtreleyin.
    2. Santrifüj 156 × g'de 25 °C'de 5 dakika boyunca koyun.
  5. Kırmızı kan hücresi (RBC) lizisi
    1. Süpernatantı dikkatlice üfleyin, pelleti rahatsız etmeden.
    2. Hücre pelletini 2 mL önceden soğutmuş RBC liz tamponunda yeniden askıya alın.
    3. Yaklaşık 4 °C buzun üzerinde hafif çalkalama ile 3–5 dakika kuluçka yapın.
  6. Lizisin sonlandırılması
    1. Liz reaksiyonunu durdurmak için ≥10 mL PBS veya tam ortam ekleyin.
    2. Santrifüj 156 × g'de 25 °C'de 5 dakika sürdür.

4. İlköğretim kültürünün başlatılması

  1. Yıkama ve santrifüjleme
    1. Süpernatantı dikkatlice üfleyin, pelleti rahatsız etmeden.
    2. Pelleti 20 mL nötralize edici çözeltiye ile yeniden askıya alın.
    3. Yaklaşık 15 kez pipetle karıştırın.
    4. Santrifüj 156 × g'de 25 °C'de 5 dakika boyunca koyun.
  2. Yeniden süspansiyon ve tohumlama
    1. Üst natantı aspire edin.
    2. Hücre pelletini, 10 μM Y-27632 içeren 10 mL başlangıç kültür ortamında yavaşça 8–10 kez pipetle 1 mL pipet ile yavaşça yeniden süzülerek yeniden süzülür.
    3. Hücre süspansiyonunu 100 mm'lik bir kültür kabına yerleştirin.
      NOT: Optimal ilk tohumlama yoğunluğu için, tahmini hücre verimine göre kültür kapını seçin. Beklenen verim 10 ×6 hücre >1 ise, 100 mm çanağı kullanın, daha düşük verim için ise 60 mm çanağı kullanın. Orta hacmi buna göre ayarlayın (örneğin, 100 mm çanak için 10 mL; 60 mm çanlık için 4 mL).
  3. Kültür koşulları
    1. Çanak, %5CO2 içeren nemli bir atmosferde 37 °C'de kuluçka yapın.
    2. Ortamı, Y-27632 içermeyen taze epitel kültür ortamı ile her 3 günde bir değiştirin.
      NOT: Hücre bağlanmasını ve morfolojisini izle; Hücreler çoğalmaya başladığında her 2 günde bir malzemeyi yenileyin.

5. Hücre geçişi

  1. Tripsinasyon için hazırlık
    1. Kültürler %80–%90 birleşmeye ulaştığında, 100 mm tabak kuluçka makinesinden çıkarılır.
    2. Harcanmış aracı at.
    3. Hücreleri 2 mL PBS ile iki kez durulayın.
    4. Kalan PBS'yi dikkatlice aspire edin ve çıkarın.
  2. Tripsizasyon
    1. Yemeğe 2 ml %0,05 tripsin ekleyin.
    2. Hücre tabakasının eşit kapsaymasını sağlamak için nazikçe döndürün.
    3. 37 °C'de 7 dakika kuluçka yapın.
    4. Hücreleri mikroskop altında (40x objektif) inceleyerek ayrılmayı doğrulayın.
  3. Nötrasyonasyon ve toplama
    1. Tripsin sindirimini durdurmak için 8 ml nötralize edici çözelti ekleyin.
    2. Hücre süspansiyonunu 15 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarın.
    3. Tek hücreli süspansiyon elde etmek için yaklaşık 15 kez pipet yapın.
    4. Santrifüj 156 × g'de 25 °C'de 5 dakika boyunca koyun.
  4. Yeniden süspansiyon ve yeniden tohumlama
    1. Süpernatantı pelleti rahatsız etmeden aspire edin.
    2. Hücre pelletini 10 mL epitel hücre ortamında yaklaşık 10 kez yukarı aşağı pipet ile 1 mL pipet ile nazikçe yeniden süskü tutar.
    3. Tohum 1× 10 mL epitel hücre ortamında 106 hücre yeni bir 100 mm tabağa yerleştirir.
    4. Tohumlama yoğunluğunu ertesi gün izole ve iyi yayılmış tek hücreler veya küçük kümeler için ayarlayın, böylece aşırı kalabalık oluşmasını önleyin.
  5. Geçiş sonrası bakım
    1. Standart kültür koşullarında (37 °C, %5CO2) kuluçka yapın.
    2. Kültürü düzenli olarak gözlemleyin ve epitel hücre ortamını her 2 günde bir değiştirin.
      NOT: Hücreler genellikle ilk veya ikinci geçişten sonra, ≥80% birleşimli sağlıklı, yapışkan bir monokatman elde edildikten sonra aşağı akış uygulamalarına hazır olur.
      DIKKAT: Birincil insan hücreleriyle temas eden tüm materyaller potansiyel biyolojik tehlike olarak değerlendirildi. Bertaraf edilmeden veya daha fazla işlemeden önce, bu malzemeler kurumsal biyogüvenlik yönergelerine uygun olarak %10 çamaşır suyu ile dezenfekte edilmiştir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Birincil HEEC kültür sisteminin başarılı bir şekilde kurulması, Şekil 1'de belirtildiği gibi morfolojik, proliferatif ve moleküler değerlendirmelerle doğrulandı. Karma enzim sindirimi, eritrosit lizisi ve bir ROCK inhibitörü birleştirerek, bu protokol insan endometriyal dokusundan epitel hücrelerinin verimli izolasyonu ve stabil genişlemesini sağladı.

Morfolojik gözlemler, erken kültür sırasında Y-27632'nin temel rolünü göstermişt...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İnsan endometriyal epitel hücrelerinin (HEEC) güvenilir bir in vitro modeli oluşturmak, endometriyal biyolojisi ve patolojinin incelenmesi için gereklidir11. HEEC izolasyonu için birkaç yöntem geliştirilmiş olsa da, çoğu teknik karmaşıklık, düşük verimlilik ve sınırlı genleşmepotansiyeli 4,5 nedeniyle sınırlıdır. Birçok protokol ayrıca değişkenlik getiren ve ölçeklenebilirliği engelleyen besleyici...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, bu makalenin yayımlanmasıyla ilgili çıkar çatışması olmadığını belirtmektedir.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Quzhou Bilim ve Teknoloji Programı (No.2024ZD046), Guizhou Eyalet Bilim ve Teknoloji İşbirliği Vakfı ZK (2025) General 023, Bingtuan Bilim ve Teknoloji Programı (No.2024ZD059; No.2026YD026).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Dispase SolarbioCAS:42613-33-2HEEC'lerin izolasyonu için
Kollagenaz Tip IMerckSKU:SCR103HEEC'lerin izolasyonu için
100 & mikro; m mesh filtresiSolarbio431752HEEC filtreleme için
tavşan anti CK18abcamAB133263İmmünoflüoresans boyama için HEEC'lerin farklılaşma belirteçini kontrol etmek için
tavşan anti CDH1abcamAB40772İmmünoflüoresans boyama için HEEC'lerin farklılaşma belirteçini kontrol etmek için
tavşan anti VIMabcamAB16700İmmünoflüoresans boyama için HEEC'lerin farklılaşma belirteçini kontrol etmek için
%4 paraformaldehitsolarbioP0099İmmünoflüoresans boyama için HEEC'lerin farklılaşma belirteçini kontrol etmek için
CO2 Kuluçka MakinesiTermo Bilimsel42820906Hücre kuluçka için
SantrifüjEppendorf5404HN133048Hücre santrifüj
100mm Hücre Kültürü ÇanakıCorning430167Hücre kültürü için
50 ml Santrifüj TüpüCorning430829Hücre santrifüjasyonu için
1,5 ml mikrosantrifüj tüpleriNEST081722CK01Hücre sindirimi için
Hücre SüzgeçSolarbio431752Hücre filtrasyonu
Fosfat tamponlu çözeltiTecono20201033Yıkama çözeltisi
DMEMGibco8122622Nötralizasyon ortamının bileşeni
Penisilin/StreptomisinTermo Bilimsel15140-122Antibiyotikler
Fetal Sığır SerumuGibco2556132PNötralizasyon ortamının bileşeni
%0,05 TripsinBasalmediaK431010HEECs  için; Ayrışma
Y-27632SolarbioIY0040ROCK inhibitörü
Kırmızı Kan Hücresi Lizis TamponuSolarbioR1010Kırmızı kan hücresi lizisi
%1 Triton X-100 Termo BilimselHFH10Membran geçirimliliği
Eşek karşıtı Tavşan IgGTermo BilimselA32790TRİkincil antikor
DAPITermo Bilimsel62248DNA boyama
1 x PBSTSolarbioP1031Yıkama tamponu
Birincil HEEC'ler için özel ortamiCelliCell-f004-002hHEEC'in kültürü için
Ters Konfokal MikroskopZeiss LSM880İmmünofluoresans görüntüleri elde etmek için kullanılır; 40x ile donatılmış
MRC-5 hücre hattıiCelliCell-h146 İnsan endometriyal adenokarsinom hücre hattı; STR profili oluşturuldu.
Ishikawa hücre hattıiCelliCell-h113 İnsan endometriyal adenokarsinom hücre hattı; STR profili oluşturuldu.

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gompel, A. Progesterone, progestins and the endometrium in perimenopause and in menopausal hormone therapy. Climacteric. 21 (4), 321-325 (2018).
  2. Prat, A., et al. Clinical implications of the intrinsic molecular subtypes of breast cancer. Breast. 24 (Suppl 2), S26-S35 (2015).
  3. Chen, J., Cao, D. Fertility-sparing re-treatment for endometrial cancer and atypical endometrial hyperplasia patients with progestin-resistance: A retrospective analysis of 61 cases. World J Surg Oncol. 22 (1), 169(2024).
  4. Arnold, J. T., Kaufman, D. G., Seppälä, M., Lessey, B. A. Endometrial stromal cells regulate epithelial cell growth in vitro: A new co-culture model. Hum Reprod. 16 (5), 836-845 (2001).
  5. Yokomizo, R., et al. Endometrial regeneration with endometrial epithelium: Homologous orchestration with endometrial stroma as a feeder. Stem Cell Res Ther. 12 (1), 130(2021).
  6. Liu, Z., et al. A simplified and efficient method to isolate primary human keratinocytes from adult skin tissue. J Vis Exp. (138), e57784(2018).
  7. Xie, Z., et al. Isolation and culture of primary human gingival epithelial cells using Y-27632. J Vis Exp. (177), e62978(2021).
  8. Qian, L., et al. Isolation and culture of primary human mammary epithelial cells. J Vis Exp. (207), e66638(2024).
  9. Moll, R., et al. Cytokeratins of normal epithelia and some neoplasms of the female genital tract. Lab Invest. 49 (5), 599-610 (1983).
  10. Shimoyama, Y., et al. Cadherin cell-adhesion molecules in human epithelial tissues and carcinomas. Cancer Res. 49 (8), 2128-2133 (1989).
  11. Fitzgerald, H. C., Schust, D. J., Spencer, T. E. In vitro models of the human endometrium: Evolution and application for women's health. Biol Reprod. 104 (2), 282-293 (2021).
  12. Riaz, M. A., et al. Long-term maintenance of viable human endometrial epithelial cells to analyze estrogen and progestin effects. Cells. 13 (10), 811(2024).
  13. Wen, J., Zu, T., Zhou, Q., Leng, X., Wu, X. Y-27632 simplifies the isolation procedure of human primary epidermal cells by selectively blocking focal adhesion of dermal cells. J Tissue Eng Regen Med. 12 (2), e1251-e1255 (2018).
  14. Zhu, Y., et al. Therapeutic effect of Y-27632 on tumorigenesis and cisplatin-induced peripheral sensory loss through rhoa-nf-κb. Mol Cancer Res. 17 (9), 1910-1919 (2019).
  15. Brosens, I., Brosens, J. J., Benagiano, G. The eutopic endometrium in endometriosis: Are the changes of clinical significance. Reprod Biomed Online. 24 (5), 496-502 (2012).
  16. Najar, M., et al. Proliferative and phenotypical characteristics of human adipose tissue-derived stem cells: Comparison of ficoll gradient centrifugation and red blood cell lysis buffer treatment purification methods. Cytotherapy. 16 (9), 1220-1228 (2014).
  17. Tam, W. L., Weinberg, R. A. The epigenetics of epithelial-mesenchymal plasticity in cancer. Nat Med. 19 (11), 1438-1449 (2013).
  18. Loh, C. Y., et al. The e-cadherin and n-cadherin switch in epithelial-to-mesenchymal transition: Signaling, therapeutic implications, and challenges. Cells. 8 (10), 1118(2019).
  19. Rubio, S., Cazares, O., Macias, H., Hinck, L. Generation of mosaic mammary organoids by differential trypsinization. J Vis Exp. (157), e60742(2020).
  20. Chen, S. Y., Hayashida, Y., Chen, M. Y., Xie, H. T., Tseng, S. C. A new isolation method of human limbal progenitor cells by maintaining close association with their niche cells. Tissue Eng Part C Methods. 17 (5), 537-548 (2011).
  21. Li, X., et al. Prolonged treatment with Y-27632 promotes the senescence of primary human dermal fibroblasts by increasing the expression of IGFBP-5 and transforming them into a caf-like phenotype. Aging. 12 (16), 16621-16646 (2020).
  22. Hu, R., Hilakivi-Clarke, L., Clarke, R. Molecular mechanisms of tamoxifen-associated endometrial cancer (review). Oncol Lett. 9 (4), 1495-1501 (2015).
  23. Wu, X., et al. Conditional reprogramming: Next generation cell culture. Acta Pharm Sin B. 10 (8), 1360-1381 (2020).
  24. Turco, M. Y., et al. hormone-responsive organoid cultures of human endometrium in a chemically defined medium. Nat Cell Biol. 19 (5), 568-577 (2017).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Endometrial Epithelial CellsCell IsolationPrimary Cell ExpansionFeeder Free CultureMixed Enzyme DigestionROCK InhibitorErythrocyte LysisSerial PassagingWestern BlotImmunofluorescence

Related Articles