Araştırma makalesi

Aconitum sarkaçından alınan biyoaktif bileşen, PI3K/AKT Yol Düzenlemesi Yoluyla Farelerde Romatoid Artrit Kaynaklı İltihabı Azaltıyor

DOI:

10.3791/70473

⸱

21 Nisan 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, Qinghai MinZu University, 2Qinghai Modern Plateau Biomedical Industry Institute, 3Qinghai Institute of Tibetan Medicine, 4Qinghai Provincial Key Laboratory of Plant Resource Chemistry on the Tibetan Plateau

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ağ farmakolojisi ve moleküler kenetlenme kullanılarak, A. sarkaçtan anti-romatoid artrit (RA) bileşenleri tanımlandı. In vivo çalışmalar, özellikle smirnotin A'nın PI3K/Akt yolu yoluyla sıçanlarda RA semptomlarını hafiflettiğini gösterdi.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Geleneksel Çin tıbbı ve çeşitli etnik tıp uygulamalarında, Aconitum sarkaçı N. Busch'un kökleri genellikle meridyenleri tarama, romatizmayı giderme, kan dolaşımını teşvik etme ve artraljiyi hafifletme yetenekleri nedeniyle kullanılır. Sonuç olarak, bu tıbbi bitki farklı etnik tıbbi sistemlerde burkulma ve romatizmal hastalıklar için iyi bilinen bir tedavi haline gelmiştir. Bu çalışma, daha önce izole edilen A. pendulum'dan altı bileşiğin hem in vitro hem de in vivo yaklaşımlarla romatoid artrit (RA) ile ilişkili iltihabı nasıl iyileştirdiğini inceledi. Ağ farmakolojisi, moleküler kenetlenme, enzimle bağlantılı immünosorbent testi (ELISA), hematoksilin ve eozin (H&E) boyama, nicel gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (q-PCR) ve western blot (WB) gibi tekniklerin kombinasyonu kullanıldı. Sonuçlar, altı bileşikten biri olan smirnotin A'nın PI3K/Akt sinyal yolunu hedefleyerek RA semptomlarını hafiflettiğini ve inflamatuar yanıtı bastırdığını gösterdi. Bu bulgular, RA'nın tedavisinde A. sarkaçının geleneksel kullanımının maddi temelini ve mekanik etkisini anlamak için bilimsel bir temel sağlar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Romatoid artrit (RA), sinovial iltihaplanma, sinovyal iç tabakasının hiperplazisi, bağışıklık hücrelerinin sızması, invaziv pannus dokusu oluşumu ve bunun sonucunda eklem hasarı ile işaret edilen kronik bir otoimmünhastalıktır 1,2,3. Küresel olarak %0,5–%1 oranında yaygınlık oranıyla RA, önemli bir halk sağlığı yükü oluşturur ve hastaların yaşam kalitesini ciddi şekilde etkiler 4,5,6,7. Metotreksat (MTX), glukokortikoidler, Janus kinaz (JAK) inhibitörleri ve steroid olmayan anti-enflamatuar ilaçlar (NSAID'ler) gibi geleneksel tedaviler genellikle yan etkiler ve değişken hasta yanıtı nedeniyle sınırlıdır; bu da yeni tedavilere olan ihtiyacıvurgular8.

Özellikle alkaloidler olmak üzere doğal ürünler, çoklu hedef mekanizmaları ve RA yönetiminde avantajlı güvenlik profilleriyle dikkat çekmiştir. Berberin, sinomenin ve matrine gibi alkaloidler, mitojen-aktive protein kinaz (MAPK), nükleer faktör kappa B (NF-κB), fosfatidilinozit 3-kinaz/protein kinaz B (PI3K/Akt) ve Janus kinaz/sinyal vericisi ve transkripsiyon aktivatörü (JAK/STAT) gibi temel inflamatuar yolları modüle eder ve tümör nekroz faktörü alfa (TNF-α), Interleukin (IL)-1β ve IL-6 gibi sitokinleri aşağı regüle eder ve terapötik potansiyel9 gösterir. 10.

Tibet tıbbında RA, üç humorun dengesizliği ve 11,12 eklemlerinde olgunlaşmamış sarı suyun birikmesine bağlanan brum bu (nemli artralji) olarak sınıflandırılır (Şekil 1). Aconitum sarkaçı N. Busch, nemi uzaklaştırmak, dolaşımı teşvik etmek ve ağrıyı hafifletmek için geleneksel olarak kullanılan birbitkidir 13,14. Bu bitkiyi içeren 50'den fazla klasik Tibet formülasyonu belgelenmiş olup, klinik kullanım geçmişi 300 yılı aşkın bir süredir (15,16). Ancak, biyoaktif bileşenleri ve mekanizmaları hâlâ kötü tanımlanmıştır.

Burada, ağ farmakolojisi ve moleküler kenetlenmeyi birleştirerek Aconitum sarkaçı N. Busch'un anti-RA bileşenlerini ve potansiyel hedeflerini ve yollarını tahmin ediyoruz. Bu tahminler daha sonra deneysel olarak doğrulanır (Şekil 2). Bu entegre yaklaşım, Aconitum sarkacı N. Busch'un RA tedavisindeki maddi temelini ve mekanistik temellerini aydınlatmayı amaçlamakta ve gelecekteki ilaç geliştirme için bir temel sağlamayı amaçlamaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hubei İl Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezi (Hubei Eyalet Önleyici Tıp Akademisi) tarafından (Wuhan, Çin; Hayvan Lisans Sertifikası No. SCXK(JB) 2023-0005). Hayvanlarla ilgili tüm deneysel prosedürler, Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüleri Rehberi'ne (8. baskı, 2011) sıkı bir şekilde uygulamıştır. Çalışma protokolü, Tianjin Genink Biyolojik Teknoloji Şirketi, Ltd.'nin Deneysel Hayvan Etik Komitesi tarafından incelenip onaylandı (Onay No. GENINK-20250074). Bu çalışmada kullanılan temel reaktifler ve ekipmanlar, eşlik eden Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

Hücre kültürü
İnsan romatoid artrit (RA) hücre hattı MH7A, Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamı (DMEM) ortamında kültürlenmiş, %10 (v/v) fetal sığır serumu (FBS) ile takviye edilmiş ve %5 CO₂17 ile nemlendirilmiş bir kuluçka içinde 37 °C'de tutulmuştur.

Hayvanlar ve tedaviler
Hayvanlar, standart özel patojensiz (SPF) tesiste, bireysel havalandırmalı kafes (IVC) sistemiyle sıkı kontrol edilen çevresel koşullar altında tutuldu: 21,0–25,0 °C iklim kontrollü sıcaklık, %40–70 bilgili nem %40–70, 12 saat fotoperiyot ve saatte 15 kez tam hava yenilenmesi. 7 günlük bir aklimatlaşma döneminden sonra, fareler rastgele altı deneysel gruba ayrıldı ve beklenmedik durumlar için yedek olarak ek fareler ayrıldı. Akut inflamatuar adjuvan artrit (AA) modeli, sağ arka patiye 100 μL tam Freund adjuvantı (CFA; 10 mg·mL-1) deri altı enjeksiyonuylaindüklenmiştir 18. Deneysel gruplar şu şekilde tasarlandı: bir boş kontrol grubu, bir AA model grubu, bir pozitif kontrol grubu (metotreksat, 0.9 mg·kg-1)19 ve IC₅₀ değerine göre düşük (0.962 mg·kg-1), orta (1.923 mg·kg-1) ve yüksek dozlu (3.846 mg·kg-1) seviyelerde uygulanan üç smirnotin A tedavi grubu.

Hastalık ve bileşik hedeflerin tahmini
Araştırma grubumuz tarafından yapılan ön aktivite taramasına dayanarak, biyoaktiviteye uygun olan altı bileşik seçildi: beş diterpenoid alkaloid (Şekil 3), benzoylakonin (1), 14-benzoil-8-O-metilakonin (2), (−)-(A-b)-14α-benzoyloksi-N-etil-13β, 15α-dihidroksi-1α,6α,8β,16β,18-pentametoksiakonitan (3), smirnotin A (4) ve akonitin (5), ayrıca bir kumarin türevi olan skopoletin (6)20. Bu bileşiklerin basitleştirilmiş moleküler giriş satır giriş sistemi (SMILES) gösterimleri PubChem veritabanından (https://pubchem.ncbi.nlm. nih.gov/) alınmış veya ChemDraw 18.0 kullanılarak oluşturulmuştur. Bu notasyonlar daha sonra SwissTargetPrediction veritabanına (https://swisstargetprediction.ch/) aktarıldı ve türler "Homo sapiens" olarak belirtildi. Potansiyel hedefler, olasılık değeri 0 olan genler seçilerek > belirlendi ve karşılık gelen Hedef Adları ile UniProtID'leri 21,22 toplandı.

PPI ağları
Örtüşen hedef genler, STRING veritabanı (https://string-db.org/)23 kullanılarak protein-protein etkileşim (PPI) ağı ile analiz edildi. Ortaya çıkan TSV formatlı veriler daha sonra Cytoscape 3.9.1'e daha fazla görselleştirme ve analiz için aktarıldı. Ağın topolojik parametreleri, yerleşik Network Analyzer eklentisi kullanılarak hesaplandı. Görselleştirilmiş ağda, düğüm boyutu ve renk yoğunluğu derece değerine eşlenmiş, kenar kalınlığı ise hedefler arasındaki etkileşim gücünü yansıtmıştır. Temel hedefler, ilişkidereceleri 24'e göre belirlendi ve sıralandı.

Gen Ontolojisi (GO) ve Kyoto Genler ve Genomlar Ansiklopedisi (KEGG) yol zenginleştirme analizi
Ortak hedefler, GO ve KEGG yol zenginleştirme analizleri için Metascape veritabanına (https://metascape.org)gönderildi 25. Fonksiyonel sonuçlar WeiShengXin biyoinformatik platformu (https://www.bioinformatics.com.cn) kullanılarak görselleştirildi.

"İlaç-aktif bileşenler-hastalık-hedefler-yolları" ağ inşası
Aktif bileşenler ve ilgili hedefler sistematik olarak tarandı, ardından fonksiyonel zenginleştirme analizi yapılarak ana sinyal yolları ve ilgili hedefler belirlendi. Bu unsurlar daha sonra Cytoscape 3.9.1 kullanılarak entegre edilerek kapsamlı bir "ilaç–aktif bileşenler–hastalık–hedefler–yollar" ağı oluşturuldu. Daha sonra topolojik analiz Network Analyzer aracı ile yapıldı; düğümler, Derece ve Aralık gibi temel parametrelere göre sıralanarak ağ içindeki merkezi öğeleri belirledi.

Ana bileşiklerin çekirdek hedeflere moleküler kenetlenmesi
ESR1 (9BQE), PTGS2 (5F19), EGFR (2XKN), GSK3B (5HLN), SRC (5MTJ) ve ERBB2 (8U8X) dahil olmak üzere çekirdek hedef proteinlerin üç boyutlu yapıları, RCSB Protein Veri Bankası'ndan (http://www.rcsb.org/; 7 Mayıs 2025'te erişildi) alındı. Bileşik yapılar ChemDraw (sürüm 18.0) ile oluşturuldu ve ardından entegre Chem3D modülü kullanılarak üç boyutlu SDF formatına dönüştürüldü. Moleküler kenetleme sonuçları PyMOL ile görselleştirildi ve bağlanma eğilimleri etkileşim enerjisi (kcal·mol-1)26 göre değerlendirildi.

Hücre canlılık testi
Logaritmik büyüme fazındaki MH7A hücreleri, kuyu başına 5 ×10-3 hücre yoğunluğunda 96 kuyruklu plakalara tohumlanmıştır. %80 birleşime ulaştıktan sonra, hücreler önce 6 saat boyunca lipopolisakkarit (LPS) (1 μg·mL-1) ile muamele edildi ve ardından farklı konsantrasyonlarda smirnotin A (5, 25, 50, 75 ve 100 μg·mL-1) maruz bırakıldı. Her tedavi grubu dörtlü çiftlikte kuruldu ve %5 CO₂ altında 37 °C'de 24 saat kuluçka edildi. İnkubasyon sonrası, her kuyuya 100 μL %10 CCK8 çözeltisi eklendi ve ardından 37 °C'de 2 saat boyunca ek kuluçka yapıldı. 450 nm'de absorbans mikroplaka okuyucu kullanılarak ölçüldü.

MH7A hücrelerinde ELISA testi
Süpernatant, 20 dakika boyunca 4 °C'de 20 dakika boyunca 2000 × g santrifüjle toplandı. IL-6, IL-1β, TNF-α ve IL-10 dahil olmak üzere inflamatuar sitokinlerin seviyeleri, üreticinin talimatlarına uygun olarak karşılık gelen ELISA kitleri kullanılarak süpernatantta nicelendirildi.

Parmak şişliği derecesi ölçümü
Sağ arka patideki şişlik derecesi, modelleme sonrası her 3 günde bir pati hacmi ölçülerek değerlendirildi. Ölçümler her sıçan başına iki kez alındı ve ortalamaları alındı. İltihabi yanıt, başlangıç seviyesine göre pati hacmindeki yüzde artışı olarak nicelendirildi.

figure-protocol-1

Organ indeks ölçümü
Tüm fareler son uygulamadan 24 saat sonra anestezi edilip ötenazi edildi. Uluslararası veterinerlik topluluğu tarafından kabul edilen insancıl yöntem benimsenmiştir. İlk olarak, hayvanı derinlemesine anestezi etmek için yüksek konsantrasyon (%5) izofluran kullanılır. Bilinç ve tüm refleksleri kaybedildiğinde göğüs açılır ve kalp kesilir, böylece hayvan acısız ve his etmeden ölür. Dalak ve timus derhal kesilip tartıldı. Normal salinle durulama yaptıktan sonra, doku yüzeylerindeki fazla nem filtre kağıdıyla bulaşarak giderildi ve organların ıslak ağırlıkları27,28 olarak kaydedildi.

figure-protocol-2

Hematoksilin ve eozin (HE)
Pati dokusu örneklerinin bütünlüğünü korumak için, her sıçanının sağ ayak bileği eklemine karşı distal olan tüm kısmı toplanıp depolandı. Kesitleme için şişmiş pati dokusu kullanıldı. Örnekleme işlemi şöyleydi: Sağ ayak bileği ekleminin yaklaşık 1 cm üzerindeki doku tamamen disekiye edildi, kürk çıkarıldı ve kemik şaftı proksimal ucundan kesildi. Numune hemen %10 paraformaldehit çözeltisine sabitlendi. Fiksasyondan sonra doku %15 EDTA kalsifikasyon çözeltisine yerleştirildi. Dekalsifikasyon her 3 günde bir izlendi ve çözme gerektiğinde doku yumuşana kadar yenilendi; bu da kalsifikasyonun tamamlandığını gösteriyordu. Daha sonra doku, dereceli etanol serisi ile kurutuldu (%75 4 saat, %85 2 saat, %90 1,5 saat, %95 1 saat ve %100 etanol değişimi 0,5 saat için). Bölümler deparafinize edildi, etanol ile yeniden nemlendirildi, 10 dakika boyunca hematoksilin ile boyandı, musluk suyla durulandı, hidroklorik asit-etanol ile 10 saniye farklılaştırıldı, musluk suyu ile durulandı, mavilendirildi, tekrar durulandı, %85 etanolde 5 dakika batırıldı, 5 dakika eosin ile boyandı, 3 saniye musluk suyu ile durulandı, kurutuldu, temizlendi ve gözlemiçin monte edildi 29.

Fare serumu ELISA testi
Kan örnekleri 2000 × g sıcaklığında 4 °C'de 20 dakika boyunca santrifüj edildi ve ortaya çıkan süpernatant sitokin analizi için toplandı. IL-1β, IL-6 ve TNF-α konsantrasyonları, üreticinin protokollerine uygun olarak ticari ELISA kitleri kullanılarak belirlendi. Standart bir eğri cvxpt32 yazılımı kullanılarak oluşturulup uyarlandı; her sitokinin ifade seviyeleri, absorbans değerleri ilgili standart eğri denklemine interpolasyon yoluyla hesaplandı. Nihai protein konsantrasyonları gerçek deneysel ölçümlerden hesaplandı.

Nicel polimeraz zincir reaksiyon analizi (qPCR)
Total RNA, TRIzol reaktüsü kullanılarak sinovyal hücrelerden izole edildi ve kloroformeklemesi 30 ile faz ayrımı sağlandı. Daha sonra, üreticinin talimatlarına sıkı sıkıya uyarak izole RNA'dan cDNA sentezlemek için ticari bir ters transkripsiyon kiti kullanıldı. qRT-PCR, SYBR Premix reaktifiyle gerçekleştirildi. Gliseraldehit-3-fosfat dehidrojenaz (GAPDH) endojen referans gen olarak kullanıldı ve göreli gen ifade seviyeleri 2-ΔΔCt yöntemiyle hesaplandı. Aşağıdaki primer diziler kullanıldı: GAPDH İleri: ACAGCAACAGGGTGGTGGAC ve GAPDH Geri Dönüş: TTTGAGGGTGCAGCGAACTT; IL-17A İleri: CTGATGCTGTTGCTGCTACTGA, IL-17A Geri Hattı: TGGAACGGTTGAGGTCTGA; TRAF6 İleri: ACATTTCCCTTTGTCCACAC ve TRAF6 Geri Dön: TTAGCATCCATGACCTCTTCGT; IL-10 İleri: CTGCAGGACTTTAAGGGTTACTT, IL-10 Geri Dön: CTTGCTTTTATTCTCACAGGGGA; IL-1β İleri: CCTGTGTGATGAAAGACGGC, ve IL-1β Geri Dön: TATGTCCCGACCATTGCTGT; IL-6 İleri: GTTGCCTTCTTGGACTGATG, IL-6 Geri Dön: TACTGGTCTGTTGTGGGTGGT.

Protein ekstraksiyonu ve western blotting
Sinovial doku, fosfataz/proteaz inhibitörü takviyeli radyoimmünopresipitasyon testi (RIPA) tamponu ile liziz edildi ve protein konsantrasyonları bisinkonik asit (BCA) test setiyle ölçüldü. Western blotting için, eşit miktarda protein içeren lizatlar sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezine (SDS-PAGE) maruz bırakıldı ve ardından poliviniliden florür (PVDF) membranlarına aktarıldı. Tren tamponlu tuzlu sıvıda %5 yağsız sütle %0,1 Tween (TBST) ile 2 saat boyunca 25 °C'de bloke edildikten sonra, membranlar gece boyunca 4 °C'de primer antikorlarla kuluçka edildi (GAPDH 1:50000; P-PI3K 1:1000; PI3K 1:1000; P-AKT 1:3000; AKT 1:6000). TBST ile kapsamlı yıkamanın ardından, zarlar yaban turpu peroksidaz (HRP) ile konjuge ikincil antikorlarla (Anti-Fare IgG 1:10000; Anti-tavşan IgG 1:1000) oda sıcaklığında 2 saat boyunca. Bir başka TBST yıkama serisinin ardından, protein bantları geliştirilmiş kemilyüminsans (ECL) alt alt yüzeyi kullanılarak görselleştirildi. Bant yoğunlukları ImageJ yazılımıyla nicele edildi ve yükleme kontrolü olarak GAPDH'ye normalleştirildi.

İstatistiksel analiz
Tüm veriler Graphpad Prism 9.5 yazılımı kullanılarak analiz edilmiş ve ortalama ±± standart sapma olarak sunulmaktadır. İstatistiksel karşılaştırmalar uygun olduğunda tek yönlü ANOVA kullanılarak yapıldı. 0,05'in altında olan p-değeri istatistiksel olarak anlamlı olarak kabul edildi. Kontrol grubuyla karşılaştırıldığında: *p < 0,05, **p < 0,01, p < 0,001 ve p < 0,0001; Model/LPS grubuna kıyasla ise: #p < 0.05, ##p < 0.01, ###p < 0.001 ve ####p < 0.0001.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

A. sarkaç türevlerinin anti-RA hedefi üzerindeki etkileri
Altı bileşiğin 3D yapıları SDF formatında alındı ve SMILES sayıları hedef tahmini için SwissTargetPrediction veritabanına yüklendi. 0'dan büyük olasılıklı hedefler tutuldu ve sonuçlar CSV dosyası olarak dışa aktarıldı. Kopyalar çıkarıldıktan sonra toplamda 97 potansiyel bileşik ilişkili hedef tespit edildi.

Romatoid artrit (RA) ile ilişkili hastalık hedefleri GeneCards, OMID...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu entegre çalışma, Aconitum sarkaçı N. Busch'tan alınan C19-diterpenoid alkaloid smirnotin A'nın anti-romatoid artrit aktivitesine dair yeni mekanik bilgiler sunmaktadır. Bulgularımız, smirnotin A'nın PI3K/Akt sinyal yolunun hedefli inhibisyonu yoluyla RA iltihabını hafiflettiğini ve daha önce bildirilen diterpenoid alkaloidlerden farklı bir mekanizmayı temsil ettiğini göstermektedir.

Ağ farmakolojisi tahmini ve moleküler kenetlenme doğrulamasının bi...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, bu makalede bildirilen çalışmayı etkileyebilecek bilinen hiçbir rekabet eden finansal çıkarları veya kişisel ilişkileri olmadığını belirtmektedir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu araştırma, Qinghai Bilim ve Teknoloji Departmanı Doğa Bilimleri Fonu gençlik projesi (No. 2022-ZJ-950Q) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (NSFC) (No. 82460845) tarafından maddi olarak desteklendi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
AceQ qPCR SYBR Yeşil Ana KarışımıVazymeQ111
AKT (60 kDa) monoklonal fare antikoruWuhan Sanying Biyoteknolojisi60203-2-Ig
BCA Protein Test KitiGuangzhou Jiebeisi BiyoteknolojisiG3522
BSA StandardıGuangzhou Jiebeisi BiyoteknolojisiG8532
MH7A hücreleri için Tam OrtamŞanghay Fuheng BiyoteknolojisiFH-MH7A
IL-10 için ELISA KitiLunchangshuo BiyoteknolojisiED-13626
IL-17A için ELISA KitiLunchangshuo BiyoteknolojisiED-10344
IL-1 ve beta için ELISA Kiti;Lunchangshuo BiyoteknolojisiED-10351
IL-6 için ELISA KitiLunchangshuo BiyoteknolojisiED-10377
TNF-&alpha için ELISA Kiti;Lunchangshuo BiyoteknolojisiED-11776
Flüoresans Nicel PCR SistemiUygulamalı BiyosistemlerViiA-7
GAPDH monoklonal fare antikoruWuhan Sanying Biyoteknolojisi60004-1-Ig
Yüksek Hızlı Soğutmalı SantrifüjHunan Kecheng Enstrüman EkipmanıHI-16KR
HiScript II Q Q, qPCR için RT SuperMix'i seçVazymeR223
HRP etiketli keçi anti-fare ikincil antikorWuhan Sanying BiyoteknolojisiSA00001-1
HRP etiketli keçi anti-tavşan ikincil antikoruBeyotime BiyoteknolojisiA0208
İnsan romatoid artrit, fibroblast benzeri sinoviosit hattı MH7AQisai BiyoteknolojisiQS-H075
Microplate ReaderBioTekMQX200
MikroskopLeicaFLEXACAM C1
Çok Modlu Mikroplaka OkuyucuMoleküler CihazlarFlexStation 3
P-AKT (60 kDa) poliklonal tavşan antikoruWuhan Sanying Biyoteknolojisi28731-1-AP
Parafin MikrotomuLeicaRM 2016
PCR AmplifikatörüUygulamalı BiyosistemlerproFlex
Fosfat tamponlu tuzlu (1& kez; PBS)Qisai BiyoteknolojisiQS-S001
PI3K (85 kDa) poliklonal tavşan antikoruYakınlıkAF6241
P-PI3K (85 kDa) poliklonal tavşan antikoruYakınlıkAF3242
Smirnotine Aizole edildi ve laboratuvarımız tarafından tanımlandıC39H49NO11
Doku KurutucuWuhan Junjie ElektronikJT-12J
Doku Göme MakinesiWuhan Junjie ElektronikJB-L6
Doku Yayma ve Fırınlama MakinesiWuhan Junjie ElektronikJK-6
TrizolAmbion15596-026
Tripsin Hücre Sindirim Çözeltisi (%0,25 tripsin & nbsp; EDTA ile, fenol kırmızısı olmadan)Qisai BiyoteknolojisiQS-S401

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Perera, J., Delrosso, C. A., Nerviani, A., Pitzalis, C. Clinical phenotypes, serological biomarkers, and synovial features defining seropositive and seronegative rheumatoid arthritis: a literature review. Cells. 13 (9), 743(2024).
  2. Jiang, N., Tian, X. P., Zeng, X. F. Interpretation on the 2024 Chinese for the diagnosis and treatment of rheumatoid arthritis. Med J PUMCH. 16 (1), 28-34 (2025).
  3. Nygaard, G., Firestein, G. S. Restoring synovial homeostasis in rheumatoid arthritis by targeting fibroblast-like synoviocytes. Nat Rev Rheumatol. 16 (6), 316-333 (2020).
  4. Dumoulin, Q. A., et al. Development of rheumatoid arthritis after methotrexate in anticitrullinated protein antibody-negative people with clinically suspect arthralgia at risk of rheumatoid arthritis: 4-year data from the TREAT EARLIER trial. Lancet Rheumatol. 6 (12), e827-e836 (2024).
  5. Zhang, R. Y., et al. Mechanisms of NLRP3 inflammasome in rheumatoid arthritis and osteoarthritis and the effects of traditional Chinese medicine. J Ethnopharmacol. 321, 117432(2024).
  6. Parveen, A., Wal, P., Kumar Rai, A., Wal, A. An outlook of substantial progress in nanotechnology emerged in treatment approaches for rheumatoid arthritis. Curr Drug Ther. 19 (3), 289-301 (2024).
  7. Shen, P., et al. Wutou decoction attenuates rheumatoid arthritis in rats through SIRT1-mediated deacetylation of the HMGB1/NF-κB pathway. J Ethnopharmacol. 337, 118921(2025).
  8. Wang, X. W., et al. Jingfang granules alleviates the lipid peroxidation induced ferroptosis in rheumatoid arthritis rats by regulating gut microbiota and metabolism of short chain fatty acids. J Ethnopharmacol. 339, 119160(2025).
  9. Wang, X. D., Mao, J. X. Systematic pharmacology-based strategy to investigate the mechanism of beta-sitosterol for the treatment of rheumatoid arthritis. Front Genet. 15, 1507606(2024).
  10. Liu, S., et al. Treatment of rheumatoid arthritis with alkaloids in natural medicines: a review. Mod Chin Med. 24 (4), 721-727 (2022).
  11. Tan, X. Y., et al. Rapid visual characterization of alkaloid changes in traditional processing of Tibetan medicine Aconitum pendulum by high-performance thin-layer chromatography coupled with desorption electrospray ionization mass spectrometry imaging. Front Pharmacol. 14, 1104473(2023).
  12. Yu, L. Q., et al. Traditional Tibetan medicine: therapeutic potential in rheumatoid arthritis. Front Pharmacol. 13, 938915(2022).
  13. Ai, C. Q. Sibu Yidian Sman Thang Detailed. , Qinghai Ethnic Publishing House. (2012).
  14. Zhang, X. R., et al. Medication regularity of Tibetan patent medicines for gZav-Grib disease based on data mining. Shanxi Med Periodical Press. 21 (16), 29923-29928 (2023).
  15. Liu, Y., et al. An integrated strategy of UPLC-Q-TOF/MS and HPTLC/PAD-DESI-MSI for the analysis of chemical variations: a case study of Tibetan medicine Tiebangchui. J Pharm Anal. 14 (4), 100907(2024).
  16. Li, C. Y., et al. Aconitum pendulum and Aconitum flavum: a narrative review on traditional uses, phytochemistry, bioactivities and processing methods. J Ethnopharmacol. 292, 115216(2022).
  17. Xie, C. M., et al. Triptolide suppresses human synoviocyte MH7A cells mobility and maintains redox balance by inhibiting autophagy. Biomed Pharmacother. 115, 108911(2019).
  18. Wang, X. W., et al. Exploration of protective effect and mechanism of Jingfang granules on rheumatoid arthritis based on network pharmacology and metabolomics. Chin Tradit Herb Drugs. 55 (23), 8067-8078 (2024).
  19. Yin, Q., et al. Anti-rheumatoid arthritis effects of traditional Chinese medicine Fufang Xiaohuoluo pill on collagen-induced arthritis rats and MH7A cells. Front Pharmacol. 15, 1374485(2024).
  20. Dong, D., et al. A new phenolic glycoside from roots of Aconitum pendulum. China J Chin Mater Med. 50 (22), 6380-6386 (2025).
  21. Wang, X., et al. Network pharmacology provides new insights into the mechanism of traditional Chinese medicine and natural products used to treat pulmonary hypertension. Phytomedicine. 135, 156062(2024).
  22. Nam, D. G., Kim, M., Choi, A. J., Choe, J. S. Health benefits of antioxidant bioactive compounds in ginger (Zingiber officinale) leaves by network pharmacology analysis combined with experimental validation. Antioxidants. 13 (6), 652(2024).
  23. Chen, G. Y., et al. Prediction of Rhizoma drynariae targets in the treatment of osteoarthritis based on network pharmacology and experimental verification. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5233462(2021).
  24. Guo, Z. W., et al. Mechanism of crocin in improving Alzheimer's disease based on network pharmacology, molecular docking and cellular validation. Chin Tradit Herb Drugs. 56 (13), 4712-4723 (2025).
  25. Chen, G. Y., et al. Network pharmacology-based strategy to investigate the mechanisms of Cibotium barometz in treating osteoarthritis. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 1826299(2022).
  26. Zheng, Y. T., Xia, L. J., Zhang, X. J., Jin, M. Exploration of potential anti-inflammatory targets and key ingredients of Arisaematis rhizoma in treatment of major depressive disorder based on machine learning and molecular dynamics simulation. Chin Tradit Herb Drugs. 55 (15), 5174-5188 (2024).
  27. Guo, M., et al. Levamisole ameliorates rheumatoid arthritis by downregulating the PI3K/Akt pathway in SD rats. Pharmaceuticals. 17 (11), 1504(2024).
  28. Zhang, B. L., et al. Mechanism of Yiqi Yangyin Tongluo decoction regulating miR-885-5p/PTEN signaling pathway to regulate autophagy-inflammation in collagen-induced arthritis model rats. Liaoning J Tradit Chin Med. 52 (3), 182-189 (2025).
  29. Chen, G. Y., et al. Integrating network pharmacology and experimental validation to explore the key mechanism of Gubitong recipe in the treatment of osteoarthritis. Comput Math Methods Med. 2022, 7858925(2022).
  30. Li, J. Y., et al. Effect of Danggui Niantongtang on key factors of extrinsic and intrinsic apoptotic pathway in synovial tissue of adjuvant arthritis rats. Chin J Exp Tradit Med Form. 27 (4), 1-7 (2021).
  31. Xia, Z. X., Li, Q., Tang, Z. Y. Network pharmacology, molecular docking, and experimental pharmacology explored Ermiao wan protected against periodontitis via the PI3K/AKT and NF-κB/MAPK signal pathways. J Ethnopharmacol. 303, 115900(2023).
  32. Sabbah, D. A., Hajjo, R., Sweidan, K. Review on epidermal growth factor receptor (EGFR) structure, signaling pathways, interactions, and recent updates of EGFR inhibitors. Curr Top Med Chem. 20 (10), 815-834 (2020).
  33. Guo, X., et al. The antiangiogenic effect of total saponins of Panax japonicus CA Meyer in rheumatoid arthritis is mediated by targeting the HIF-1α/VEGF/ANG-1 axis. J Ethnopharmacol. 333, 118422(2024).
  34. Jiang, L., et al. Elucidating the role of Rhodiola rosea L. in sepsis-induced acute lung injury via network pharmacology: emphasis on inflammatory response, oxidative stress, and the PI3K-AKT pathway. Pharm Biol. 62 (1), 272-284 (2024).
  35. Bai, Y. M., Liang, S., Zhou, B. Yangyinghuoxue decoction exerts a treatment effect on hepatic fibrosis by PI3K-AKT pathway in rat model: based on network pharmacology and molecular docking. Aging (Albany NY). 16 (4), 3773(2024).
  36. Ba, X., et al. WTD attenuating rheumatoid arthritis via suppressing angiogenesis and modulating the PI3K/AKT/mTOR/HIF-1α pathway. Front Pharmacol. 12, 696802(2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

nflamatuar Yan tA FarmakolojisiMolek ler KenetlemeEnzim Ba l mm nosorbent TestWestern BlotGer ek Zamanl PCRGeleneksel in T bb
Video yakında

İlgili makaleler