Bu deneysel bir yaklaşım için tam metin protokolü mevcuttur <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0101/current/abstract" target="_blank">Hücre Biyolojisi Şu Protokolleri</a> .

Yazarların beyan edeceği herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

doku ve hücre sayım ve canlılık belirlenmesi

Counting and Determining the Viability of Cultured Cells

Kültür hücre sayısını belirleyen kültür koşullarının standardizasyonu ve doğru kantitatif deneyler önemlidir. Hemasitometre sayma odası olarak tasarlanmış merkezi bir alana sahip kalın bir cam slayt. Hücre süspansiyon belirli bir bölgeye uygulanır ve böylece hücre yoğunluğu hesaplanabilir sayılır.

Kültür hücre sayısını belirleyen kültür koşullarının standardizasyonu ve doğru kantitatif deneyler önemlidir. Bu video, hücreleri bir hemasitometre kullanarak nasıl sayılır göstermektedir.

Doku ve Hücre Sayım ve Canlılık Belirlenmesi

Kültürdeki hücre sayısının belirlenmesi, kültür koşullarının standartlaştırılmasında ve doğru nicelleştirme deneylerinin gerçekleştirilmesinde önemlidir. A...

Hücre sayısının belirlenmesi ve kültürü, kültür koşullarının standartlaştırılmasında ve kesin hücre sayılarının gerektiği deneylerin gerçekleştirilmesinde önemlidir. Burada size bir hemositometre kullanarak hücrelerin nasıl sayılacağını ve süspansiyonda bulunan hücre konsantrasyonunun nasıl hesaplanacağını göstereceğiz. Ayrıca, Trypan Blue Canlılık Testi ile kültürünüzde bulunan canlı hücre sayısını nasıl belirleyeceğinizi de göstereceğiz.Merhaba, ben Ricky; Doğu Tennessee'deki Moleküler Patoloji Laboratuvarları Ağında bulunan Dr.LAN'ın Laboratuvarı'ndayım. Bugün size süspansiyondaki hücrelerin nasıl sayılacağını ve canlılıklarının nasıl belirleneceğini göstereceğim. Hücre sayımı için hemositometreyi hazırlamak amacıyla, öncelikle yüzeyini ve beraberindeki lamel camı %70 etanol ile temizlemeniz gerekir.Lamel ve lam temiz, kuru; hav, parmak izi ve su lekelerinden arındırılmış olmalıdır. Ardından, hemositometrenin kenarlarını musluk suyu ile hafifçe ıslatın ve lamelini üzerine bastırarak yerleştirin. Lamel, gümüş renkli sayım alanının üzerine düzgünce oturmalıdır.Şimdi sayım için hücre süspansiyonunu hazırlamaya hazırız. Öncelikle, hücreler monolayer kültürlerde büyütülmüşse, yapışkan hücreler için videoda gösterildiği gibi tripsin kullanarak hücreleri plaka yüzeyinden ayırın. Hücreler plakadan ayrıldıktan sonra, homojen bir süspansiyon elde etmek için gerektiği şekilde seyreltin.Hemositometre kullanırken süspansiyondaki topaklanmaları dağıttığınızdan emin olun. Milimetrekare başına maksimum 20 ila 50 hücre sayılması önerilir. Hücre örneğinizi hemositometreye yüklemeye hazır olduğunuzda, hücre süspansiyonunu hemositometre sayım odasının kenarına aktarmak için bir mikropipet kullanın.Pipet ucunu lamelin altına tutun ve süspansiyondan bir damla bırakın. Süspansiyon, kılcal hareketle lamelin altına çekilecektir. İlk sayım hücresini doldurduktan sonra ikinci sayım hücresini doldurun; böylece hücreleri saymaya başlamadan önce hazırlığınız tamamlanmış olacaktır.Hücrelerin birkaç dakika boyunca çökelmesine izin verin. Hücreler çökeldiğinde, fazla sıvının kurutulması da faydalı olacaktır. Lamı, mikroskop altında 100x büyütme ile görüntüleyebilirsiniz.Üç paralel çizgiden oluşan bir setle çevrili olan ızgaranın geniş merkezi alanını görmelisiniz. Geniş merkezi alan içindeki alt bölmeler de üç paralel çizgiyle çevrilidir ve her bir alt bölme, tekli çizgilerle 16 daha küçük kareye bölünmüştür. Bu alan içindeki hücreler, kümelenme olmadan eşit şekilde dağılmış olmalıdır.Hücreler eşit dağılmamışsa, yıkayıp tekrar yükleyin. Hemositometrede, dört köşe ve merkez karedeki hücreleri saymak için el tipi bir sayıcı kullanın. Karelerin üst ve sol kısmındaki üçlü çizginin orta çizgisine temas eden hücreleri saymayın; karelerin alt veya sağ tarafındaki üçlü çizgilerin orta çizgisine temas eden hücreleri sayın.Diğer sayım odası için sayımları tekrarlayın. Hücreleri saydıktan sonra, mililitredeki hücre sayısını belirleyebilirsiniz. Bunun için, kare başına düşen ortalama hücre sayısını alın ve örnekteki hücre sayısını elde etmek için bunu seyreltme faktörü ve 10.000 ile çarpın.Mililitredeki hücre sayısını, örneğin alındığı hücre süspansiyonunun toplam hacmiyle çarpın. Artık süspansiyonumuzun canlılığını belirlemeye hazırız. Örneğinizdeki canlı hücre sayısını belirlemek için Trypan mavisi kullanacağız; önce 0,5 mililitre %4'lük Trypan mavisi, 0,03 ml HBSS ve 0,1 ml hücre süspansiyonunu küçük bir tüpte birleştirip iyice karıştırın ve hemositometreye yüklemeden önce tüpü beş dakika bekletin.Canlı hücreler boyanmamış olmalı, ancak ölü hücreler hemositometre altında mavi görünecektir. Toplam hücre sayısını ve boyanmamış hücreler olan toplam canlı hücre sayısını sayın ve örneğinizdeki yüzde canlı hücre oranını hesaplayın. İşleminiz bittiğinde, hemositometredeki lameli %70 ethanol ve ardından deiyonize su ile durulayarak dekontamine edin.Hava ile kurumasını bekleyin ve gelecekteki kullanımlar için saklayın. Böylece kültürlenmiş hücrelerinizin sayısını ve canlılığını nasıl belirleyeceğinizi göstermiş olduk. Hepsi bu kadar.İzlediğiniz için teşekkürler, tüm deneylerinizde başarılar dileriz.

counting-and-determining-the-viability-of-cultured-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Molecular Pathology Laboratory Network, Inc.  Kültür hücre sayısını belirleyen kültür koşullarının standardizasyonu ve doğru kantitatif deneyler önemlidir. Bu video, hücreleri bir hemasitometre kullanarak nasıl sayılır göstermektedir.

Doku ve Hücre Sayım ve Canlılık Belirlenmesi

Bu makalede

Özet

Özet

Protokol

Açıklamalar

Yeniden basım ve izinler

Etiketler