Canlı İmmobilize Maya Hücreleri Görselleştirme Hızlı Tekniği

Özet

Burada sessiz çiftleşme lokusların HML ve HMR floresan gazetecilere uygulanan büyüyen immobilize maya hücreleri görünüm için hızlı bir tekniği,

Özet

Biz burada Epifloresans mikroskobu ile büyüyen maya hücreleri immobilizasyon ve görselleştirme için basit, hızlı ve son derece esnek bir teknik de mevcut. Teknik eşit uzunlukta on saat kadar statik maya nüfus, ya da zaman içerisinde deneyler görünüm için uygundur. Benim mikroskopi S. cerevisiae sessiz çiftleşme lokusların epigenetik miras inceler. Heterokromatin paketlenmiş olarak normal ifade edilmeyen iki sessiz çiftleşme lokusların HML ve HMR vardır. Sir1 mutant arka plan susturulmasında her lokus ya açık ya da susturulmuş epigenetik devlet olabilir zayıflar, bu nedenle bir bütün olarak nüfus HML ve HMR için farklı epigenetik devletlerin hücrelerinin bir karışımı var. Benim mikroskopi ayrı bir hücrede HML ve HMR epigenetik devlet arasında herhangi bir ilişki olduğunu gösterdi. sir1 hücreleri modelin önceden ifade lokustaki susturulması kurulması ya da önceden susturuldu lokus ifade, epigenetik devletler geçin. Benim zaman ders mikroskopi sıklığı, her dört olası epigenetik anahtarlar ve böylece her sir1 hücrelerinde epigenetik devletlerin istikrarını puan paletli bireysel sir1 hücreler ve onların çocukları. Ayrıca Xu ve ark. Mol. Hücre 2006.

Protokol

1. Zaman ders Epifloresans mikroskopi için immobilize hücreler. Mikroskop objektif lensleri aşağıda mikroskop aşamasında, bu protokolü sadece yararlı olduğunu lütfen unutmayınız.
   
   
2. Uzun bir lamel sıvı ortamda istenilen konsantrasyonda Yeri hücreleri (yaklaşık 24x50mm)
   
   
3. Sentetik bir medya plaka (bu düşük otofloresans) ve hücreleri üzerinde yer istenilen büyüklükte bir agar bloğu kesin. Hücreler ile temas halinde cımbız tarafından ele agar bloğu yan yerleştirin.
   
   
4. Daha kısa sürede ders (3 saate kadar), bu set yeterlidir. Mikroskop görüntülendi zaman hücreleri hareket, hücre veya agar bloğu artış alanı hacmi azalır.
   
   
5. Uzun süre dersler için, agar bloğu üstüne bir damla sıvı taze medya yerleştirin ve agar bloğunun üstüne bir bardak slayt yerde. Bu slayt agar bloğu üst yoluyla buharlaşma azaltır. İstenirse, kapak kayma ile temas agar bloğu kenarları nem daha da azaltmak için vazelin ile kapatılmalıdır. Vahşi tip fiyatla bölen hücreleri, uzun 9 saate kadar film bu seti kadar kullandık.

Tartışma

Bu, hala büyüme izin verirken, maya hücreleri durağanlaştırır hızlı bir tekniktir. Biz, on saat kadar maya maya deney boyunca vahşi tip bölünme oranları gösteren büyüme izlemiştir. Bu kurulum, mikroskop aşamasında altında objektif lens gerektirdiğini unutmayın.