Name: Embriyonik Kök Hücre Tedavi Hindlimb İskemi Türetilmiş Endotel Hücreleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-01-23T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Keşfedin, embriyonik kök hücre kaynaklı endotel hücrelerini iskemik arka bacaklara enjekte etme yöntemini. Biyolüminesans görüntüleme ile hücrelerin davranışını izleyerek periferik arter hastalığı tedavisindeki potansiyellerini değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Jeff Velotta, MD, Hibe Hoyt, Robert C. Robbins, MD, Jin Yu, MD, Tim Doyle, Doktora ve teknik yardım için Stanford Küçük Hayvan Imaging Core teşekkür ederim. Yazarlar ayrıca veteriner ekipman desteği için teşekkür ederiz. AM Bickford, Inc. Bu araştırma, Ulusal Sağlık Enstitüleri araştırma hibeler (R01 HL-75.774, R01 CA098303, R21 HL085743 1K12 HL087746), California University of California (15IT-0257 ve 1514RT-0169) Tütün İlgili Hastalık Araştırma Programı tarafından desteklenen ve Rejeneratif Tıp California Institute (RS1-00.183). NH bir burs Amerikan Kalp Derneği tarafından desteklenmektedir. Kalp Derneği.

1. Endotel hücreleri içine fare EKH farklılaşma <ol><li> Endotel hücreleri EKH ayırt için protokol başka açıklanan ve bu protokol 2,3 odak değildir. Kısaca, hücrelerin ayırt etmek için izin verilir ve floresan aktif hücre sıralama (FACS), CD31 ya da vasküler endotelyal kaderin (VE-kaderin) gibi endotel işaretleri için pozitif hücreler daha sonra arıtılmış. </li></ol> 2. Double Fusion Reporter Gen ve lentiviral İletimi İnşaatı <ol><li> Biyoparlaklık ateşböceği lusiferaz (fluc) muhabiri genlerin ifade etmek için değiştirilmiş hücreler izlemek için kullanılabilir. Bu uygulama için, hücreleri bir iç ubikuitin organizatörü kontrol altında fluc ve gelişmiş hem de yeşil floresan protein (eGFP) füzyon gen içerir. Hücreleri değiştirmek için optimize önemli genetik unsurları içeren transgen lentiviral vektör yerine getirmek için biyo-güvenlik kriterleri artan transdüksiyon etkinliğinin yanı sıra, laboratuarda fluc eGFP füzyon muhabiri geni taşıyan geliştirilen PFU-FG vektör stabil bir şekilde kullanılabilir sonra hücrelerin farklılaşması transduce. Bu füzyon inşa nakledilen hücrelerin biyoparlaklık ve floresan izleme sağlar. Virüs parçacıkları, iletimi ve ifade muhabiri genlerin başka bir yerde 4 açıklanmıştır etiketli hücrelerinin üretimi üretmek için prosedür. </li></ol> 3. Iskemik hindlimb Transplantasyon ESC-endotel hücreleri <ol><li> Hücre nakli için hindlimb iskemi geçirdiği bir fare hazırlama prosedürü başlayın. Bunu yapmak için, anestezi indüksiyon odasına 1L/min bir akış hızında% 100 oksijen izofluran% 1-3 içeren fare yerleştirin. </li><li> Dış uyaranlara tepkisiz kadar indüksiyon odasında fare bırakın. Ardından indüksiyon odasından hayvan çıkarın. </li><li> Daha sonra, işletim masaya yatar pozisyonda hayvan yer ve 1L/min bir akış hızında% 100 oksijen içinde% 1-3 izofluran sürekli bir akış bağlamak. </li><li> Üç alternatif betadin ve alkol scrubs hindlimb cilt silin. </li><li> Cilt temizlendikten sonra fosfat 30 mcL bir milyon ESC edilen endotel hücreleri elde tamponlu salin (PBS). 28 iğne bu hücrelerin yükleyin. </li><li> Hücrelerin hazır olduğunuzda, hafifçe kaldırın ve gastroknemius kas yerini daha iyi görselleştirmek için hindlimb uzatmak. Bacak uzatılmış olmakla birlikte, altta yatan kas içine deri yoluyla iğne takın. Kemik yaklaşım değil dikkat edin. Ve yavaşça gastroknemius 30 mcL hücre karışımı enjekte edilir. Intramüsküler enjeksiyon için, 30 mcL hacim enjekte edilebilir sınırı yakın. Deneyimlerimiz, şırınga iğneleri kaybı hacmi yok, çünkü nedenle, 28-gauge insülin şırıngaları tercih edilmektedir. </li><li> Enjeksiyon işlemi tamamlandıktan sonra, kurtarma kafesine fare dönmek ve uyanık kadar sürekli izlemek. Hayvan kurtarmak ve birkaç saat sonra nakledilen hücrelerin in vivo biyoparlaklık görüntüleme ile devam etmek için izin verin. </li></ol> 4. ESC edilen endotel hücreleri in vivo görüntüleme Biyoparlaklık <ol><li> Nakledilen ESC-türetilmiş endothelials hücreleri, bir iç ubikuitin organizatörü kontrol altında fluc ve eGFP füzyon gen ifade etmek için modifiye edilmiştir. Bu nedenle, biyoparlaklık iskemik hindlimb içinde hücreler izlemek için kullanılabilir. </li><li> Bu adımı başlamak için, biyoparlaklık görüntüleme sistemi ve Yaşam Görüntü toplama yazılımı açın. Sonra toplama sistemi başlatmak ve görüş alanının boyutlarını belirtmek. </li><li> Arka plan emisyon emmek için görüntüleme kutusu üzerine, yer siyah, mat kağıt. </li><li> Görüntüleme kutusu hazır olduğunda fare 1L/min çıkış izofluran% 1-3 olarak oksijen içeren anestezi indüksiyon odasına koyun. Dış uyaranlara tepkisiz kadar indüksiyon odasında fare bırakın. Ardından indüksiyon odasından hayvan çıkarın. </li><li> Gerektiği gibi bir elektrikli tıraş makinesi ile her iki arka ayaklarında saç çıkarın. </li><li> D-luciferase vücut ağırlığının gram başına 10 mcL periton içine enjekte edilir. D-luciferase 15 mg / mL PBS filtre stok çözelti içine önceden hazırlanmış. </li><li> Luciferase enjekte edildikten sonra, hayvan izofluran, sürekli bir akış bağlı yatar pozisyonda siyah kağıt üzerinde görüntüleme kutuya koyun. </li><li> Hayvan görüntü kutunun içine yerleştirilmesi ve izofluran için bağlanma. </li><li> Görüntü doymuş olduğu bir optimum pozlama süresini belirlemek için 10-60 saniye görüntüleri elde etmek için Başlat. Görüntü doymuş hale gelirse, pozlama süresini azaltmak. Biyoparlaklık sinyal çok zayıfsa, pozlama süresi artar. </li><li> Istimalsinyal maksimum ve sonra kaybolur ulaşıncaya kadar g en uygun pozlama süresi, resimlerin her 1-3 dakikada edinmeye devam. Satın alma işlemi tamamlandığında, dosyayı kaydedin. </li><li> Verileri analiz etmek, enjeksiyon yerinde kapak ilgi alanları (ROI) seçin. Negatif kontrol olarak, benzer bir yatırım getirisi olmayan çalışan bacak için seçilebilir. Yazılımını kullanarak, her timepoint ROI&#39;ler fotonlar / saniye / cm 2 / steradian (p / s / cm 2 / sr) birimleri cinsinden ifade edilir toplam parlaklığı, ölçer. Maksimum değeri son verileri kullanılmalıdır. Veriler de ileride kullanmak üzere, Excel elektronik tablo ihraç edilebilir. </li><li> Bir kez tüm veriler elde edilir, hayvan kurtarma kafes ve hayvan uyanır kadar sürekli izlemek. </li><li> Hücreler zaman içinde izlemek için bu prosedürü tekrarlayın. </li><li> Istenilen bir zaman noktasında, hayvan doku fonksiyon değerlendirilmesi için ötenazi olabilir. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar <img src="/files/ftp_upload/old/1034_2009_1_22_4/figure 1.png" alt="Şekil 1" width="600" height="600" /> Sol iskemik hindlimb nakledilen hücrelerin bir temsilcisi biyoparlaklık görüntü Şekil 1&#39;de gösterilmiştir. Biyoparlaklık satın alınması sırasında, şiddeti zamanla artacak ve zaman seyri sırasında elde edilen maksimum değeri son değer olarak rapor edilmelidir.

<ol><li>Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Murine model of hindlimb ischemia.</a> JoVE. , (2008).</li>
<li>Levenberg, S., Golub, J. S., Amit, M., Itsakovitz-Eldor, J., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells+derived+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells derived from human embryonic stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 4391-4396 (2002).</li>
<li>Yamashita, J., Itoh, H., Hirashima, M., Ogawa, M., Nishikawa, S., Yurugi, T., Naito, M., Nakao, K., Nishikawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flk1-positive+cells+derived+from+embryonic+stem+cells+serve+as+vascular+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Flk1-positive cells derived from embryonic stem cells serve as vascular progenitors.</a> Nature. 408, 926-926 (2000).</li>
<li>De, A., Yaghoubi, S. S., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+lentiviral+vectors+in+noninvasive+molecular+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Applications of lentiviral vectors in noninvasive molecular imaging.</a> Methods Mol Biol. 433, 177-202 (2008).</li>
<li>Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+endogenous+monocyte+chemoattractant+protein-1+in+ischemia-induced+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).</li>
<li>Cook, M. J. The anatomy of the laboratory mouse. , Academic Press. New York. (1976).</li>
<li>Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K., Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+indicators+in+living+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Med%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent indicators in living mammals.</a> Nature Med. 4, 245-247 (1998).</li>
<li>Ray, P., De, A., Min, J. J., Tsien, R. Y., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+tri-fusion+multimodality+reporter+gene+expression+in+living+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging tri-fusion multimodality reporter gene expression in living subjects.</a> Cancer Res. 64, 1323-1330 (2004).</li>
<li>Huang, N. F., Lee, R. J., Li, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+physical+regulation+of+stem+cells+and+progenitor+cells%3A+potential+for+cardiovascular+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Chemical and physical regulation of stem cells and progenitor cells: potential for cardiovascular tissue engineering.</a> Tissue Eng. 13, 1809-1823 (2007).</li>
<li>Cao, F., Lin, S., Xie, X., Ray, P., Patel, M., Zhang, X., Drukker, M., Dylla, S. J., Connolly, A. J., Chen, X., Weissman, I. L., Gambhir, S. S., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+visualization+of+embryonic+stem+cell+survival%2C+proliferation%2C+and+migration+after+cardiac+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">In vivo visualization of embryonic stem cell survival, proliferation, and migration after cardiac delivery.</a> Circulation. 113, 1005-1114 (2006).</li>
<li>Wilson, K., Yu, J., Lee, A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+in+vivo+bioluminescence+reporter+gene+imaging+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vitro and in vivo bioluminescence reporter gene imaging of human embryonic stem cells.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
</ol>

EKH farklılaşma ve endotel hücreleri de dahil olmak üzere her üç germ tabakasından oluşan hücre soylarının ortaya çıkmasına neden yeteneklerini plastisite nedeniyle doku iskemi tedavisi için umut vaat eden bir hücre kaynağı. EKH ile ilgili etik kaygıları aşmak için, bağlı pluripotent kök hücreleri (iPSCs) etik kaygılar üstesinden alternatif pluripotent kök hücre kaynağı olabilir. EKH yanı sıra, yetişkin kök hücreleri, endotel progenitör hücrelerin (EPC) ve hematopoetik kök hücreleri (HKH&#39;lerin) gibi de kullanılabilir, ancak bu hücre tip...

<table><tbody><tr><td>Cerrahi aletler</td><td>Alet</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Şırınga iğnesi</td><td>Alet</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>28G insülin şırıngası tercih edilir</td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>D-luciferin</td><td>Reaktif</td><td>Biosynth International, Inc</td><td></td><td>D-luciferin'i önceden PBS içinde 15 mg/mL'lik filtrelenmiş stok çözeltiler halinde hazırlayın</td></tr><tr><td>IVIS 200 Biyolüminesans görüntüleme sistemi ve veri toplama yazılımı</td><td>Ekipman</td><td><a href="http://www.perkinelmer.com/Catalog/Category/ID/IVIS%20Series" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Xenogen Corporation</a></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

embriyonik kök hücre tedavi hindlimb İskemi türetilmiş endotel hücreleri

Embryonic Stem Cell-Derived Endothelial Cells for Treatment of Hindlimb Ischemia

Bacaklar ve ayaklar, oksijenli kan ve besin kaynağı periferik arterlerin daralması periferik arter hastalığı (PAH), Bu patoloji aralıklı topallama (yürüme ağrısı), ağrılı iskemik ülserasyonlar, hatta ekstremite tehdit eden bir kangren gibi semptomlara neden olur. Genellikle, tüm kan ve lenf damarlarının luminal yüzeyi yatırım endotel hücreleri bir tek tabaka, damar endotel, vasküler homeostazı ve vasküler rejenerasyon baskın bir rol oynadığı düşünülmektedir. Sonuç olarak, endotel hücre tabanlı rejenerasyon kök PAD tedavi için umut verici bir yaklaşım olabilir. Bu video, embriyonik kök hücre nakli (ESC) göstermektedir elde edilen biyoparlaklık görüntüleme homing hücre ve hayatta kalma non-invaziv izleme takip PAD bir model olarak endotel hücreleri, tek taraflı hindimb iskemi tedavisi için. Hücre teslimat ve görüntüleme için özel malzemeler ve usulleri açıklanan olacaktır. Bu protokol Niiyama ark hindlimb iskemi indüksiyon açıklayan başka bir yayın izler. 1

Teslimi için cerrahi işlem embriyonik kök hücre elde edilen endotel hücreleri iskemik hindlimb biyoparlaklık görüntüleme ile non-invaziv takibi ile gösterilmiştir.

Embriyonik Kök Hücre Tedavi Hindlimb İskemi Türetilmiş Endotel Hücreleri

Periferik arter hastalığı (PAH), bacaklara ve ayaklara oksijenlenmiş kan ve besin sağlayan periferik arterlerin daralması sonucu ortaya çıkar. Bu...

Periferik arter hastalığı. PAH, bacaklara ve ayaklara kan ve oksijen sağlayan periferik arterlerin daralması sonucu ortaya çıkan vasküler disfonksiyondan kaynaklanır. Kök hücrelerin PAH tedavisinde kullanılıp kullanılamayacağını belirlemek için, iskemi indüksiyonunun ardından arka ekstremiteye embriyonik kök hücre kaynaklı endotel hücreleri enjekte ediyoruz.Bu hücreler ateş böceği lusiferazı eksprese edecek şekilde modifiye edildikleri için, yaralanma bölgesine yönelip yönelmediklerini ve terapötik etki gösterip göstermediklerini belirlemek amacıyla biyolüminesans görüntüleme ile takip edilebilirler. Merhaba, ben John Cook. Stanford Üniversitesi Kardiyovasküler Tıp bölümünde tıp profesörüyüm.Laboratuvarımız anjiyogenez ve vasküler rejenerasyon üzerine çalışmaktadır. Bu videoda, doktora sonrası araştırmacılarım Dr. Nan Wong ve Hir Niyama, arka ekstremite iskemisinde terapötik hücre transplantasyonu ve hücre sağkalımının non-invaziv görüntülemesine yönelik prosedürleri tanıtacaklar. Bu prosedürler; tek taraflı arka ekstremite iskemisinin tedavisi için embriyonik kök hücrelerin ve stereo hücrelerin iletimini ve biyolüminesans görüntüleme ile hücrelerin yerleşimi ve sağkalımının non-in

embryonic-stem-cell-derived-endothelial-cells-for-treatment-hindlimb

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Lazer Doppler perfüzyon sintigrafisi ile iskemi onayı ile tek taraflı hindlimb iskemi indüksiyonu için cerrahi işlem olduğunu göstermiştir.

Murin Model Hindlimb İskemi

Kan ile temas eden otolog hücre ve test biyouyumluluk biyomalzemeler tohumlama titanyum için bir yöntem açıklanmıştır. Bu yöntem, cerrahi implantasyon dakika içinde domuz venae kava numaralı seribaşı endotel progenitör hücrelerin ve titanyum tüpler, kullanır. Bu teknik, diğer birçok implante biyomedikal cihazlar için uyarlanabilir.

Otolog Endotelyal progenitör Hücre-Yayımlama Teknoloji ve Büyük Hayvan Modeli Kardiyovasküler Cihazlar için Biyouyumluluk Testleri

Endotel koloni oluşturan hücreleri (ECFCs) intrensek göstermeyen sağlam klonal bir proliferatif potansiyeli olan endotel hücreleri...

Endotel Colony Forming Hücrelerinin Fenotipik ve Fonksiyonel Karakterizasyonu İnsan Göbek Kordonu Kanı türetilen

Bu biyolojik olarak parçalanabilir bir polimerik nano-tanecikleri kullanılarak anjiyojenez için tedavi edici faktörler aşırı ifade programlama kök hücrelerin bir yöntem tarif eder. Tarif edilen işlemler in vitro yağ elde edilen kök hücreleri transfekte etmek ve bir murin arka bacak anjiyojenezi, iskemi modelinde desteklemek için programlanmış kök hücrelerin etkinliğini doğrulamak, polimer sentezi içerir.

Biyobozunur polimerik nano partiküllerin kullanılması Tedavi Angiogenezis Programlama Kök Hücreler

Burada, biz çift tohumlama kısmen uyarılmış pluripotent kök hücre ile farelere aşılama için fonksiyonel doku mühendisliği gemi greft oluşturmak için bir protokol mevcut (PiPSC) - Bir decellularized damar iskele biyoreaktör üzerinde elde edilen endotel hücreleri - düz kas hücreleri ve PiPSC türetilmiş.

Bir Fare Modeli Doku mühendisliği Kapların Üretimi ve Tırnak

Biz kardiyomiyositlerde, endotel hücreleri ve düz kas hücreleri ve yama-aracılı sitokin teslimat hücre enjeksiyon birleştirerek nakledilen hücrelerin bütünleşmesini geliştiren bir dağıtım yöntemi, insan uyarılmış pluripotent kök hücrelerin ayırt etmek için, üç yeni ve daha etkin protokollere sunuyoruz.

Pluripotent Kök Hücre Miyokard Onarım Kardiyak Hücreleri Türetilmiş

Bu iletişim kuralının amacı göbek kordon kanı endotelyal progenitor hücrelerini izole etmektir. Bazı uygulamalar bu hücreler bir biyomarker hastaların kardiyovasküler riski ile iskemik hastalıklar, tedavi tanımlamak için kullanmayı içerir ve oluşturma doku Mühendisliği vasküler ve kalp kapak oluşturur.

Yalıtım endotelyal Progenitor Hücre insan göbek kordon kanı

Biz hiperlipidemi ve diyabet ile tavşanlar periferik iskemi ikna etmek için kullanılan bir cerrahi prosedür açıklanmaktadır. Bu cerrahi hastalarda periferik arter hastalığında deneyimli koşullar için preklinik bir model olarak davranır. Anjiyografi, tanıtılan iskemi ve perfüzyon iyileşmesi kapsamını ölçmek için bir araç olarak da tanımlanır.

Diyabetik tavşanların arka ekstremite Iskemi preklinik modeli

Burada, anjiogenik tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için fonksiyonel, histolojik ve moleküler testlerin bir pil tarafından izlenen kritik bir hindekstremite iskemi deneysel modeli sunulmuştur.

Hindekstremite Iskemi bir Murine modelinde terapötik anjiyogenezi değerlendirilmesi

Burada hemojenik endotel hücrelerinin insan pluripotent kök hücrelerinden yaklaşık 1 hafta içinde yönlendirilmiş farklılaşması için basit bir protokol sunulmaktadır.

Hemojenik Endotel Hücrelerinin İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden Yönlendirilmiş Farklılaşması

Bu protokol, kronik diyabetik ayak ülserlerinin tedavisi için bir insan göbek kordonu mezenkimal kök hücre enjeksiyonunu değerlendiren prospektif, randomize, kontrollü bir klinik çalışmayı tanımlamaktadır.

Diyabetik Ayak Ülserlerinin Tedavisi için İnsan Göbek Kordonu Mezenkimal Kök Hücre Enjeksiyonunun Prospektif, Randomize ve Kontrollü Çalışması

Keşfedin, embriyonik kök hücre kaynaklı endotel hücrelerini iskemik arka bacaklara enjekte etme yöntemini. Biyolüminesans görüntüleme ile hücrelerin davranışını izleyerek periferik arter hastalığı tedavisindeki potansiyellerini değerlendirin.

Embriyonik Kök Hücre Tedavi Hindlimb İskemi Türetilmiş Endotel Hücreleri

Daha fazla video keşfet