Name: Amperometrik Elektrotlar imalatı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Keşfedin karbon fiber elektrot üretimini, tek hücrelerde katekolamin salınımını amperometri ile tespit etmek için. Bu yöntem nörokimyasal araştırmalarda düşük gürültülü kayıtlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu protokol başlangıçta tasarlanmış olan laboratuar, Chicago Üniversitesi&#39;nde Dr. Aaron P. Fox teşekkür eder, ve daha da geliştirilmesi için protokol William Roden (Saint Louis Üniversitesi). Biz Whitehall Vakfı, Ulusal Bilim Vakfı ve destek için teşekkür ederiz.

Bölüm 1: Karbon Elyaf Hazırlama <ol><li> Kapiller pipet ~ 1.25 X uzunluğu bir uzunlukta bir paket karbon elyaf (7μm çapı) kesin. </li><li> Kaynama boyutlandırma kaldırın ~ 100 mL ve bir kap içinde aseton, 30 dakika veya daha uzun bir süre için kaynar aseton lifler. </li><li> Sıcak aseton lifler çıkarın ve temiz bir behere 50-100 ml taze aseton transfer. </li><li> Kuru, açık bir 150 mm Petri kabında paket yerleştirerek ve airdry geceleme fiberler. </li></ol> Bölüm 2: Yangın parlatma Cam Kapiler Tüp <ol><li> Forseps ile tüp merkezi holding ve ilgili flame.Rotate tüp sonunda açığa (uzun mikro-hematokrit kapiller tüpler, dış çapı 1.5mm, 1.3mm iç çapı 7,5 cm) Her bir kapiller tüp Yangın lehçe 3 kez alev. </li><li> Tüpü ters çevirin ve 3 kez tekrar dönen, ateşe diğer ucunu yerleştirin. </li><li> Cilalı yangın tüpleri bir cam tabak koyun ve karbon elyaf ile dolu olmak için hazır olana kadar fırın transfer. </li></ol> Bölüm 3: Kılcal Tüp içine bir Karbon Fiber Threading <ol><li> Machado ve ark açıklamalara benzer. (2008) ve Mundroff ve Wightman (2002), bir filtre ile vakum bağlı plastik boru kullanarak cam tüp içine fiber emmek. </li><li> Lif lif dışında bir tüp scalpel.Leave ¼ inç kullanarak kesin. </li></ol> Bölüm 4: Bir Elektrot Çektirme Pipet-Fiber Çekme <ol><li> Kapiler tüp elektrot çektirmenin (Narishige Japonya Model PP-830) içine yerleştirin ve yerinde kılcal tüpü tutmak için düğmeleri sıkın. </li><li> Optimal çektirmenin ayarlarında iki set çeker yürütmek için anahtarları işleyin. </li><li> Pipet yarıya çekilir sonra, çıplak fiber kesme makası kullanarak merkezinde iki yarısı ayrı. </li><li> Her elektrot yarım çıkarın ve çıkıntılı lif lif lif sadece 1 / 8 inç tüp dışında kalmaması için makas ile cam seal.Trim kırmak için çekin. </li><li> Fiber elektrotlar çekti yaklaşık 16 kadar 1-4 adımları tekrarlayın. </li></ol> Bölüm 5: Epoxy-Cam Seal yapma <ol><li> Epoksi önceden yapılmış bir kısım sıcak bir plaka ile 55 ° C sıcaklığındaki bir davlumbaz 6 dakika. </li><li> Epoksi, sargı bandı kullanarak bir paket içine çekti elektrotlar ~ 16 ısıtma iken. </li><li> EPON Reçine, 6 dakika ısıtılır sonra, 0.7 gram XOF MPDA sıcak EPON Reçine (% 14 w / v) ekleyip karıştırın flakon dönen. </li><li> Epoksi yeterli miktarda kapiller eylem yoluyla cam ipuçları girecek elektrot paket, 20 saniye ile ilgili sıcak epoksi artı sertleştirici solution.After içine batırın. </li><li> Yuvaları ile karton üzerine paket, yer elektrotlar geri alma ve bir fırın tepsiye yerleştirin 100 ° F. </li><li> En az 48 saat sonra, epoksi ile doldurmak, parçalanmış bir ipucu var, birden fazla fiber, etc.After var, her elektrot teftiş karton sahibinin onları geri geri vermedi diseksiyon microscope.Discard elektrotlar altında incelemek her elektrot oven.Electrodes genellikle fabrikasyon sonra yaklaşık 1 ay için iyi içine. </li></ol> Bölüm 6: Karbon Fiber Kesme <ol><li> Yeri karbon fiber bir teflon bant ile cam slayt üzerine dikkatle elektrodudur. </li><li> Diseksiyon mikroskobu altında ucu gözünüzde canlandırın. </li><li> Bir hücre karşı karbon fiber yerleştirme için temiz düz bir yüzey bırakmak için karbon fiber boyunca dik kesmek için temiz bir neşter bıçak kullanın. </li></ol>

<ol><li>Mundorf, M. L., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amperometry+and+cyclic+voltammetry+with+carbon+fiber+microelectrodes+at+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protocols+in+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Amperometry and cyclic voltammetry with carbon fiber microelectrodes at single cells.</a> Curr Protocols in Neurosci. 6 (14), 1-6 (2002).</li>
<li>Machado, D. J., Montesinos, M. S., Borges, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Good+practices+in+single-cell+amperometry%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molec.+Biol%22%5BJournal%5D)">Good practices in single-cell amperometry.</a> Methods in Molec. Biol. 440, 297-313 (2008).</li>
</ol>

Bu protokol amperometrik elektrotlar oluşturmak ve nasıl kesileceği açıklanmıştır. Amperometrik kayıtları sırasında, karbon fiber bir elektrot bir salgı hücre yüzeyine karşı yerleştirilir. Exocytotic faaliyet katekolamin oksidasyonu sonra elektron transferi ile oluşan elektrokimyasal akım gösterir amperometrik ani olarak görülmektedir. Pratik yapma ve kesme amperometrik elektrotlar sayesinde, piyasada bulunan elektrotlar pek çok üzerinde gürültü seviyeleri büyük ölçüde geliştirilmiş olabilir.

<table><tbody><tr><td>Epoksi Sertleştirici 1,3-fenilen-diamin pulları</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P23954-100G04 716AJ</td><td>Alikotlar bir desikatörde saklanır ve ışığa maruz bırakılmamalıdır.</td></tr><tr><td>Karbon Fiberler</td><td>Materyal</td><td>Goodfellow</td><td>C005725</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-Hematokrit Kılcal Tüpler</td><td>Materyal</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9836768</td><td></td></tr><tr><td>Epoksi Reçine</td><td>Reaktif</td><td>Miller-Stephenson</td><td>Epon Resin 828</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Mikroskobu</td><td>Enstrüman</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elektrot Çekici</td><td>Enstrüman</td><td>Narishige International</td><td>PP-830</td><td>1. çekiş = 24.8 degrees C; 2. çekiş = 62.7 degrees C</td></tr><tr><td>Fırın</td><td>Enstrüman</td><td></td><td></td><td>100 degrees F'ye ayarlanmıştır.</td></tr><tr><td>Isıtıcı tabla</td><td>Enstrüman</td><td></td><td></td><td>55 degrees C'ye ayarlanmıştır</td></tr></tbody></table>

amperometrik elektrotlar imalatı

Fabrication of Amperometric Electrodes

Karbon fiber elektrotlar amperometri ölçümler için tek hücre veziküller katekolamin salınımının tespiti için çok önemlidir. Burada, düşük gürültü (&lt;0,5 pA) elektrotlar üretmek için gerekli teknikler açıklanmaktadır. Teknikleri önceki araştırmacıların (1,2) tarafından yayınlanan açıklamaları modifiye edilmiştir. Elektrotlar karbon elyaf hazırlama ve lif aspire bir filtre ile vakum kullanarak her kapiller tüpe ayrı ayrı iş parçacığı tarafından yapılır. Sonra, fiber ile kılcal tüpü ince sivri ucu ile iki yarısı, her bir elektrot çektirmenin tarafından çekilir. Elektrotlar sıcak, sıvı epoksi, epoksi-cam bir mühür oluşturmak için sertleştirici ile karışık batırılmış. Son olarak, epoksi kür için bir fırın elektrotlar yerleştirilir. Elektrotlar dikkatli kullanımı, tutarlı bir şekilde ve zarar vermeden yapılır sağlamak için kritik öneme sahiptir. Bu protokol tek hücre kayıt için amperometrik elektrotlar imal ve nasıl kesileceğini gösterir.

Bu protokol, karbon fiber elektrotlar oluşturmak anlatılmaktadır. Bu elektrotlar daha sonra, karbon fiber amperometri ile veziküller katekolamin sürüm algılamak için kullanılır.

Amperometrik Elektrotlar imalatı

Karbon fiber elektrotlar, tek hücrelerdeki veziküllerden katekolamin salınımının amperometrik ölçümlerle saptanması için kritik öneme sahiptir. Burada, biz ...

Bu protokol, karbon fiber elektrotların nasıl üretileceğini açıklamaktadır. İlk olarak, cam kılcal tüpleri, sizing tabakası uzaklaştırılmış karbon fiberlerle dolduracağız. Ardından, fiber-kılcal tüp düzeneğini iki elektrot oluşturacak şekilde çekeceğiz ve fiberi keseceğiz.Ardından elektrotları epoksiye daldıracak şekilde düzenleyeceğiz. Fiberi elektroda sabitlemek için fiber elektrotları sıcak bir fırındaki rafa yerleştireceğiz. Bu elektrotlar daha sonra, karbon fiber ve barometri kullanılarak tek hücrelerdeki veziküllerden katekolamin salınımını tespit etmek için kullanılır.Başarılı kayıtlar, kayıt izi üzerinde düşük gürültü ve belirgin yukarı yönlü spike'lar gösterir. Merhaba, ben St. Louis Üniversitesi Tıp Fakültesi Farmakolojik ve Fizyolojik Bilimler Bölümü'ndeki Dr. Amy Harkins laboratuvarından Carrie Pike. Size, tek hücrelerden katekolamin salınımını ölçmek için pirometriyle kullanılacak düşük gürültülü karbon fiber elektrotların üretimine yönelik bir prosedür göstereceğim.Elektrotların yapımı için karbon fiberleri hazırlamaya başlayalım. İlk olarak, çeker ocak içerisinde bir demet karbon fiberi, kılcal pipetin uzunluğunun yaklaşık 1,25 katı olacak şekilde kesin. Bir kapta yaklaşık 100 mililitre asetonu kaynatıp fiberleri 30 dakika veya daha uzun süre sıcak kaynayan asetona ekleyerek boyutlandırma maddesini (sizing) uzaklaştırın.Kaynatma işleminden sonra, fiberleri ısıtılmış asetonun içinden çıkarın ve 50 ila 100 mL taze aseton içeren temiz bir behere aktarın. Fiberleri, çeker ocak dışına çıkarılabilecek olan alüminyum folyoya tekrar aktarın. Fiber demetini açık bir 150 mm Petri kabına yerleştirerek karbon fiberlerin gece boyunca havada kurumasını sağlayın.Karbon fiberler hazırlandığına göre, cam kılcal boruların ateşle cilalanması (fire polish) için boruları hazırlama aşamasına geçin. 7,5 santimetre uzunluğunda, 1,5 milimetre dış çapta ve 1,3 milimetre iç çapta olan mikro hematokrit cam kılcal borularını kullanın. Boruyu merkezinden tutun ve bir ucunu alevle temas ettirin.Tüp alevdeyken yaklaşık üç kez döndürün. Tüpü ters çevirin, karşı ucunu aleve yerleştirin ve tekrar üç kez döndürün. Kılcal tüpün her iki tarafı şu an ateşle cilalanmış durumdadır.Ateş cilalı tüpleri cam bir kaba yerleştirin ve karbon fiberlerle doldurulmaya hazır hale gelene kadar fırına aktarın. Kapiler tüpe bir karbon fiber yerleştirmeye başlamadan önce koruyucu yüz maskesi taktığınızdan emin olun. Ardından, fiberi cam tüpün içine çekmek için filtreli bir vakum sistemine bağlı plastik tüpler kullanın.Ardından, fiberi bir bistüri kullanarak kesin. Tüpün her iki ucundan da yaklaşık 6,35 mm fiber bıraktığınızdan emin olun. Dişli karbon fiber, pipet fiber elektrodu çekmek için hazır hale getirilmiş olur.Kılcal tüpü elektrot kutbuna yerleştirin ve kılcal tüpü sabit tutmak için düğmeleri sıkın. Ardından, kutbu optimal ayarlara getirin ve iki kutup oluşturmak için anahtarları yönetin. Pipet yarıya kadar çekildiğinde, çıplak fiberi merkezden keserek iki yarıyı birbirinden ayırın.Makas kullanarak her bir elektrot yarısını çıkarın ve cam mühürlemesini kırmak için dışarı taşan fiberi çekin. Fiberin tüp dışında sadece bir sekiz inçlik kısmının kalması için fiberi makasla kesin.Bu adımları yaklaşık 16 kez tekrarlayın. Epoksi cam mühürleme işlemine geçmeden önce fiber elektrotlar çekilir. İlk olarak, önceden hazırlanmış bir epoksi alikotunu 55 °C'ye ayarlanmış bir ısıtıcı tabla üzerinde altı dakika boyunca ısıtın. Epoksi ısınırken, çekilen elektrotların yaklaşık 16 adedini bir çeker ocak içerisinde bir demet haline getirerek sarın.Epoksi altı dakika boyunca ısıtıldıktan sonra, bir bant yardımıyla sıcak epoksiye 0,7 gram sertleştirici ekleyin. Flakonu dairesel hareketlerle sallayarak karıştırın. Elektrot demetini, sıcak epoksi ve sertleştirici karışımına daldırın.Epoksinin kılcal hareket yoluyla cam uçlara yeterli miktarda girmesi için demeti her seferinde yaklaşık beş saniye süreyle iki kez daldırın. Demeti çözün ve elektrotları yuvalı bir karton tutucuya yerleştirin. Bu tepsiyi 100 Fahrenheit dereceye ayarlanmış bir fırına yerleştirin.En az 48 saat sonra, her bir elektrodu bir diseksiyon mikroskobu altında inceleyin. Epoksi ile dolmayan elektrotları atın. Bir kırma ucu bulundurun.Birden fazla fibere sahipse veya başka nedenlerle kullanılamıyorsa. Her bir elektrodu inceledikten sonra, elektrotları tekrar karton tutucuya ve ardından tekrar fırına yerleştirin. Elektrotlar genellikle üretimden sonra yaklaşık bir ay boyunca kullanılabilir durumdadır ve bir hücre üzerinde pirometri için kullanılmadan önce karbon fiberin kesilmesi gerekir.Karbon fiberi kesmek için, karbon fiber elektrodu Teflon bant ile birlikte bir lam üzerine dikkatlice yerleştirin. Uç kısmı bir diseksiyon mikroskobu altında görüntüleyin. Ardından, karbon fiberin bir hücreye yerleştirilmesi için düz ve temiz bir yüzey bırakacak şekilde, karbon fiberi diklemesine kesmek için temiz bir skalpel bıçağı kullanın.Kayıtlardan hemen önce. Kılcal boruyu, bir dolum şırıngası kullanarak üç molar potasyum klorür ile doldurun ve fiberin karşı ucunu kuruttuğunuzdan emin olun. Fazla tuzu uzaklaştırmak için.Elektrodu, elektrot tutucunun gümüş, gümüş klorür peletinin üzerine yerleştirin. Pirometri kafa aşamasına elektriksel olarak bağlayın. Elektrodun sabit kalması için elektrot tutucusunu sıkın.Elektrodu hücrenin yanına yerleştirin ve RO metrik olaylarının kaydına geçin. Bu protokol, tric elektrotların nasıl üretileceğini ve kesileceğini açıklamaktadır. Tric kayıtları sırasında, bir karbon fiber elektrot salgılayıcı bir hücrenin yüzeyine yerleştirilir.Ekzositoz aktivitesi, katekolaminlerin oksidasyonundan sonra elektronların transferinin neden olduğu elektrokimyasal akımı gösteren üçlü pikler olarak gözlemlenir. EmPro metrik elektrotların yapımı ve kesimi konusundaki pratikle, gürültü seviyeleri ticari olarak mevcut olan birçok elektroda göre önemli ölçüde iyileştirilebilir. Bu prosedürü gerçekleştirirken parametrik karbon fiber elektrotların nasıl üretileceğini size az önce gösterdim.Tutarlı ve düşük gürültülü elektrotlar elde etmek için protokol ayrıntılarına çok dikkat etmek önemlidir. Hepsi bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

AC elektrik hareket gibi, mikro ve nano-ölçek daha bir gerçeklik haline geliyor sağlayan teknolojiler sıvıları ve asılı partiküller kurgulama geliştirmeye devam ediyoruz. Burada, bu cihazlar ve deneysel gözlemler nasıl yorumlamak için nasıl imal, AC elektrik hareket arkasındaki fizik tartışmak.

AC Elektrokinetik Olaylar Mikroelektrod Yapıları tarafından oluşturuldu

Bu makale ayrıntıları Multiplex microneedle tabanlı sensör yapımı. Aygıt bir hızlı ve seçici bir şekilde birden fazla analitlerin in situ numune alma ve elektrokimyasal analizi için geliştirilmektedir. Biz klinik tıp tasavvur ve biyomedikal araştırmalar, bu microneedle tabanlı sensörler için kullanır.

Multiplexed Transdermal Elektrokimyasal Algılama Hollow microneedle tabanlı Sensör

Bu makale, bir biofabrication yaklaşımı tarif: hücreleri ya da proteinler ile fonksiyonelleştirilmiş edilebilir biyouyumlu filmler oluşturmak üzere yanlı elektrotlar varlığında uyaran-tepkisel polisakaritler çökelmesi. Biz, laboratuar-on-a-çip etkileşimli uygulamalar için biofunctionalized yüzeyler oluşturmak için filmler gibi temel kullanımların üretimi için, bir tezgah üstü stratejisi göstermektedir.

Biofabrication ile Bio-Elektronik Arayüz Bridging

Çalışma desenli kağıt-akışkan platform iridyum oksit azaltılmış grafen oksit büyüme (IRO 2 -RGO) nanohibrit yeşil elektrokimyasal sentez yoluyla düzensiz ve kaba ekran baskılı karbon tabaka üzerinde ince filmler ve pH sensörü olarak uygulanmasını gösteriyor .

Tek Elektrokimyasal Kağıt mikroakışkan pH Sensörler olarak iridyum Oksit azaltılmış Grafen Oksit nanohibrit İnce Film Modifiye Ekran baskılı Elektrotlar

Bu protokol, tamamen gömülü, kalın metal örgülü, yüksek performanslı, esnek, şeffaf elektrotlar için çözüm bazlı bir üretim stratejisi tanımlamaktadır. Bu yöntemle üretilen esnek transparan elektrotlar, ultra düşük sac direnci, yüksek optik transmitans, eğilme sırasındaki mekanik stabilite, güçlü alt katman yapışması, yüzey pürüzlülüğü ve çevresel stabilite dahil olmak üzere en yüksek performansı gösteriyor.

Gömülü Metal Örgülü Yüksek Performanslı, Esnek, Şeffaf Elektrotlar için Ölçeklenebilir Çözeltiyle İşlenmiş Üretim Stratejisi

Dökme materyal Fe 4.5 Ni 4.5 S 8'i kullanarak elektrotların kolay hazırlanma metodu sunulmuştur. Bu yöntem, geleneksel elektrot üretimine alternatif bir teknik sağlar ve basit bir elektrokatalitik test yöntemi de dahil olmak üzere alışılmamış elektrot malzemeleri için önkoşulları açıklar.

Elektrokatalitik Uygulamalar İçin Asal Olmayan Metal Dökme Elektrodların Hazırlanması İçin Basit Yöntemler

Otel bünyesindeki mikrobiyal zenginleştirme veya in situ yetiştirme teknikleri kültür zor mikrobiyal özellikleri, özellikle düşük-biyokütle veya geochemically aşırı ortamlar üzerinden Yalıtım kolaylaştırabilir. Burada, biz yeteneğine sahip hücre dışı elektron taşıma (EET) mikrobiyal suşları zenginleştirmek için bir harici güç kaynağı'nı kullanmadan bir elektrokimyasal set-up tanımlamak.

Anot respiring bakteri yerinde zenginleştirmek için kendini ayakta elektrokimyasal Set-up

Burada, bir Nafion kaplı, polyaniline functionalized, mamüllerinin azaltılmış grafen oksit chemiresistive mikro pH sensörü imalatı için protokol raporu. Bu chemiresistor tabanlı, katı hal mikro pH sensör pH değişiklikleri algılayabilir Lactococcus lactis Fermantasyon işlemi sırasında gerçek zamanlı.

Nafion kaplı imalatı, mikrobiyal fermantasyon sırasında gerçek zamanlı monitör pH grafen oksit/Polyaniline Chemiresistive sensör azaltılmış

Bu yazı, ince film gümüş elektrotlar üstüne belirlenmiş kapsama gümüş klorür (AgCl) pürüzsüz ve iyi kontrollü filmler oluşturmak için bir yöntem sunmayı amaçlamaktadır.

İnce Kontrollü Tek Katmanlı Gümüş Klorürlü İnce Film Gümüş/Gümüş Klorür Elektrotlarının İmalatı

Düşük moleküler ağırlıklı analitleri algılamak için kullanılan altın mikroelektrotların yüzeyinde ince tabakalar oluşturmak için poli(3,4-etilendioksitiyofen) elektropolimerizasyonu için sulu ve organik çözücü sistemlerini tanımlıyoruz.

Ürik Asit Algılama Uygulamaları için Altın Mikroelektrotlar Üzerine Poli(3,4-Etilendioksitiofen) Tabakalarının Elektrokimyasal Hazırlanması

Amacımız, epimisyal elektromiyografi elektrotlarının üretimi ve test edilmesi hakkında güncellenmiş, takip etmesi kolay bir kılavuz sağlamaktı. Bu amaçla, malzeme tedariki için talimatlar ve üretim ve test sürecinin ayrıntılı bir incelemesini sağlıyoruz.

Düşük Maliyetli Bir Epimisyal Elektromiyografi Elektrodunun Geliştirilmesi: Üretim ve Test için Basitleştirilmiş Bir İş Akışı

Keşfedin karbon fiber elektrot üretimini, tek hücrelerde katekolamin salınımını amperometri ile tespit etmek için. Bu yöntem nörokimyasal araştırmalarda düşük gürültülü kayıtlar sağlar.

Amperometrik Elektrotlar imalatı

Daha fazla video keşfet