Name: Fare Adrenal Kromafin Hücre İzolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-01-05T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 30 s
Description: Öğrenin, fare adrenal medullasından kromafin hücre izolasyonu için enzimatik sindirim ve disseksiyon tekniklerini. Bu yöntem, uyarı-salınım mekanizmalarını in vitro ortamda çalışmalar için güvenilir hücre kültürleri sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Kısaltmalar: TKK - Adrenal Kromafin Hücreler, E. Soln - Enzim Çözüm, E. DMEM - Zenginleştirilmiş Dulbecco&#39;nun Modifiye Kartal Orta <ol><li> Hazırlık <ol><li> E. Soln (40 adet papain / 1 ml E. Soln.) Istenilen miktar papain ekleyin. </li><li> Carbogen ile yaklaşık 15 dakika boyunca buz üzerinde papain etkinleştirin. Oxygenate Locke buz tampon olarak. </li></ol></li><li> Diseksiyon <ol><li> 8-10 hafta fareyi kullanın. </li><li> Kaldırmak sindirim önce Locke&#39;un tampon ve buz üzerinde yer oksijenli. </li><li> Diseksiyon işlemi için video bakın. </li><li> Eksize sonra, yer bezleri Locke&#39;un tampon oksijenli. </li></ol></li><li> Bezinin hazırlanması <ol><li> Yağ bezi çıkarın. </li><li> Bezinin korteks Şeridi&#39;nde. </li></ol></li><li> Enzimatik Sindirim <ol><li> Steril filtre papain oksijenli. </li><li> Petri oksijenli papain dört havuzları olun. <ol><li> 3 havuzları 100uls ilgili olmalıdır. </li><li> Havuzlarının 1 400uls ile ilgili olmalıdır. </li></ol></li><li> Medullae havuzları ile yıkayın <ol><li> 1. 3 100ul havuzları ile. </li><li> Bundan sonra 400ul havuzu ile </li><li> Mikrofuge&#39;de tüpe 400ul havuzu Pippette 300ul E. Soln ve medulla adet. </li><li> Mikrofuge&#39;de tüp ve yer Qrap parafilm 37 ° C su banyosunda 20 dk. </li><li> Papain içeren oksijen kalan E. Soln devam etmeyi unutmayın. </li><li> 20 dakika sonra steril filtre E. Soln. </li><li> Yeni süzülmüş E. Soln eski E. Soln banyo medullae değiştirin. </li></ol></li></ol></li><li> Triturations <ol><li> E. Soln aspire edin ve atın. </li><li> 1ml E. DMEM medullae yıkayın. </li><li> E. DMEM aspire edin ve atın. </li><li> 1ml ucu 300ul E. DMEM ve çiğnemek 20X ekleyin. </li><li> 200ul ucu steril bir jiletle kesin. </li><li> Kesme 200ul ucu ile 5-10X Karışım. </li><li> E. DMEM banyo medullae parçaları atın. Orta enkaz içerecektir. </li><li> Adet medullae 300uls taze E. DMEM ekleyin. </li><li> 200ul ucu 20x ile Karışım </li><li> Pippette E. DMEM tüp withough medullae adet mikrofuge&#39;de. Orta ücretsiz TKK içerecektir. </li><li> Adet medullae 300uls taze E. DMEM ekleyin. </li><li> 23.5 göstergesi şırınga iğnesi 20x medullae Karışım. </li><li> E. hem triturations DMEM birleştirin. Medullae parçaları olmamalı ve şimdi bir kuş tüyü bir görünüme sahip olmalıdır. </li></ol></li><li> Kaplama <ol><li> 3.7g s 2.5 dakika için son iki öğütme adımları mikrofuge&#39;de E. DMEM </li><li> 50uls-200 E. DMEM sonraki deneyler bağlı olarak yeniden süspanse pelet. </li><li> Plaka, bir cam lamel 10-30uls. </li><li> Uymaları hücreleri için 15 dakika bekleyin. </li><li> E. DMEM 750uls ekleyin. </li></ol></li></ol>

Yazarların beyan edeceği herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

fare adrenal kromafin hücre İzolasyonu

Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation

Adrenal medüller kromafin hücre kültürü sistemleri, in vitro ortamda bir uyarım-salgılanması kaplin çalışması için son derece yararlı. Bu protokol adrenaller incelemek ve sonra Adrenal korteks uzak sıyırma medüller bölgede izole etmek için kullanılan yöntemi göstermektedir. Tek kromafin hücrelerine medulla sindirim sonra gösterilmiştir.

Fare Adrenal Kromafin Hücre İzolasyonu

Adrenal medüller kromafin hücre kültürü sistemleri, uyarılma-sekresyon eşleşmesinin in vitro ortamda incelenmesi için son derece kullanışlıdır. Bu...

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu videoda, mekanik bir ayrıştırma tekniği kullanarak fare dorsal kök ganglionundan (DRG) makrofajları izole etmek için enzim içermeyen bir protokol gösterilmektedir. Yeni toplanan DRG dokusunun homojenizasyonu üzerine, makrofajlar üzerindeki hücre yüzeyi reseptörlerine karşı antikorlar, hücreleri floresan olarak etiketlemek için kullanılır, ardından numunedeki makrofajların varlığını doğrulamak için akış sitometrisi yapılır.

Fare Dorsal Kök Ganglionundan Makrofajların Mekanik Dissosiyasyon Kullanılarak İzolasyonu

Bu video, yetişkin farelerin periton boşluğundan olgun bağ dokusu tipi mast hücrelerini izole etmek için bir periton lavaj yöntemini göstermektedir. Periton boşluğundan primer immün hücrelerin bir karışımı izole edildikten sonra, uygun kültür koşulları altında mast hücrelerinin seçici proliferasyonu gerçekleştirilir.

Primer Mast Hücrelerini Murin Periton Boşluğundan İzole Etme Tekniği

Polarizasyon tabanlı Toplam İç Yansıma Floresan Mikroskobu (pTIRFM) hücre zarı dinamiklerinin gerçek zamanlı algılama sağlar. Bu makalede, düzenlenmiş Ekzositoz sırasında zar yeniden çalışma için pTIRFM uygulanmasını tarif etmektedir. Teknik doğrudan veya dolaylı membran şekil değişiklikleri içeren hücre biyolojisi diğer işlemler için genellenebilir.

PTIRFM ile görüntüleme Plazma Membran deformasyonlar

Ekzositozdan sonra, kaynaşmış plazma zarı endositoz olarak bilinen bir işlemle elde edilir. Bu mekanizma, bir sonraki serbest bırakma turu için yeni sinaptik vezikülleri yeniden düzenler. Bireysel endositik olaylar, fare adrenal kromaffin hücrelerinde hücreye bağlı kapasitans kayıtlarının kullanılması yoluyla yakalanır ve analiz edilir.

Fare Adrenal Kromafin Cell Hücre bağlı Kapasitans Ölçümler Yöntemleri

Ozmotik stres ekzositozu ve bu işlem sırasında serbest nörotransmitter miktarını etkiler. Biz nasıl transmisyon elektron mikroskobu ile birlikte elektrokimyasal yöntemleri birleştirerek ekstraselüler ozmotik basınç etkisi ekzositozu etkinlik, vezikül quantal boyut ve serbest nörotransmitter miktarı incelemek için kullanılabileceğini göstermek ekzositozu sırasında.

Ozmotik stres etkisi salgı veziküller ve ekzositozu izleme

Burada adrenal bezlerin fareler üzerinden ayırma, dokuları düzeltmek, onları bölüm ve ayirt boyama gerçekleştirmek için bir yöntem mevcut.

Yalıtım, fiksasyon ve fare böbreküstü bezlerinin ayirt görüntüleme

Adrenal korteks tarafından salgılanan hormon stres ve hastalıklara karşı hayvanlar için hayati önem taşımaktadır. Burada, adrenal hücreler kültür birincil fare için bir iletişim kuralı mevcut. Adrenal steroidogenesis ve lipit sentezi ilgi reaktif mekanizmalarının araştırılması için iyi bir tüp bebek platform olabilir.

Sıçan Adrenokortikal hücreleri ve deneyleri Steroidogenic fonksiyonların birincil kültür

Burada, fenotitipleme ve fonksiyonel analiz için dorsal kök ganglion'undaki makrofajları hızla izole etmek için mekanik bir ayrışma protokolü salıyoruz.

Dorsal Kök Ganglion Makrofajlarının Hızlı İzolasyon

Bu protokol, sığır adrenal kromafin hücrelerinde üç füzyon modunu tespit etmek için konfokal bir görüntüleme tekniğini tanımlar. Bu füzyon modları arasında 1) füzyon gözenek açma ve kapama içeren yakın füzyon (öpüş ve koş olarak da adlandırılır), 2) füzyon gözenek açılmasını ve açılan gözenekin korunmasını içeren stay-füzyon ve 3) kaynaşmış vezikül büzülmesini içeren büzülme-füzyon bulunur.

Adrenal Kromafin Hücrelerinde Üç Füzyon Gözenek Dinamiği Modunu Ölçmek için Konfokal Mikroskopi

Bu çalışma, murin mezanjiyal hücrelerinin (MC'ler) ve bunların ex vivo hücre kültürlerinin izolasyonu için optimize edilmiş bir protokol geliştirmiştir. Bu hücreler, hücre büyümesinden veya protein ekspresyonundan ödün vermeden birden çok kez pasajlanabilir, dondurulabilir, canlandırılabilir ve kültürlenebilir.

Murin Glomerüler Mezanjiyal Hücrelerin İzolasyonunu ve Saflaştırılmasını Optimize Etmek

Fare adrenal korteks için zona glomerulosa ve zona fasciculata ile zenginleştirilmiş hücrelerin 2D birincil kültürlerini oluşturmak amacıyla sağlam ve tekrarlanabilir bir yaklaşım geliştirildi. Bu sistem, her bölgenin temel moleküler ve fonksiyonel özelliklerini koruyarak sinyal yolları, hormon üretimi ve adrenal kortikal hücre davranışının odaklanmış şekilde incelenmesini mümkün kılar.

Fare Adrenal Korteksinden Bölge Zenginleştirilmiş Birincil Kültürlerin Oluşumu

Öğrenin, fare adrenal medullasından kromafin hücre izolasyonu için enzimatik sindirim ve disseksiyon tekniklerini. Bu yöntem, uyarı-salınım mekanizmalarını in vitro ortamda çalışmalar için güvenilir hücre kültürleri sağlar.

Fare Adrenal Kromafin Hücre İzolasyonu

Daha fazla video keşfet