Name: Bir In Vitro Cilt tahriş Testi (SIT) İnsan Epidermal (RHE) Model yeniden inşa (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-13T21:00:00.000+00:00
Duration: 21 min 16 s
Description: Öğrenin, EpiDerm cilt tahriş testi ile kimyasalların cilt tahriş potansiyelini değerlendirmeyi. Bu yöntem, yeniden yapılandırılmış insan epidermisi kullanarak hayvan testlerinin yerini alır ve kozmetik ürün güvenliği değerlendirmelerinde güvenilir sonuçlar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Modifiye Epiderm SIT (5 Çok merkezli Uluslararası Doğrulama Çalışması katılımı için BfR (Almanya), BASF SE (Almanya), IIVS A.Ş. (ABD), Zet-LSL (Avusturya) ZEBET teşekkür etmek istiyorum .)

I. Doku Klima - Gün 0 <ol><li> Epiderm EPI-200-SİT kiti aldıktan sonra, bütünlüğü için tüm kit bileşenleri (kit ayrıntılı bilgi için özel reaktifler ve ekipman Tablo bakınız) kontrol edin. </li><li> Her üç Epiderm dokular için, bir tahlil orta 0.9 ml steril 6 plaka önceden doldurulmuş hazırlar. </li><li> Epiderm dokular içeren 24 plaka içeren plastik torba steril koşullar altında, açık ve steril bir gazlı bez çıkarın. </li><li> Epiderm doku içeren her eklemek kaldırmak ve 24 boş plaka ekleme yerleştirmek için steril forseps kullanın. Bu adım sırasında, steril filtre kağıdı blot nazik eklemek dış kenarlarına yapışır kalan nakliye agaroz çıkarın. </li><li> Sonraki 5 dakika içinde, dokular görsel olarak kontrol edin. Tamamen sıvı ile kaplıdır kusurlu doku ya da doku kullanmayın. </li><li> Steril pamuk uçlu çubuk yardımıyla, dokuların yüzey dikkatlice kurutun. Doğrudan doku dokunmamaya çalışın - kılcal etkileri doku yüzeyinin nemi çıkarmak için yeterli. </li><li> Doku yüzeyinin kurutulduktan sonra, 6-kuyucuğu 0.9 mL tahlil orta önceden doldurulmuş üst satırındaki üç doku transferi. Ekler altında sıkışmış olan herhangi bir hava kabarcıkları serbest bırakın. </li><li> 60 kuvöz içine ekler içeren 6-kuyucuğu yerleştirin ± 5 dakika ön-inkübasyon 37 ° ± 1 ° C, 5 ±% 1 CO 2,% 95 RH (Bağıl Nem). </li><li> 60 ± 5 dk ön kuluçka dönemi sonunda, 6-plaka alt kuyulara üst kuyulardan ekler aktarın. Inkübatör geri tabak koyun (37 ± 1 ° C, 5 ±% 1 CO 2,% 95 RH) bir gece için ön-inkübasyon (18 ± 3 saat). </li><li> Buzdolabında (5 ± 3 ° C). Tahlil orta geri kalanını yerleştirin. Gecelik ön inkübasyon sonrasında, test kimyasalları Epiderm dokulara uygulanabilir. Not: ön inkübasyon prosedürü (dokular Salı Çarşamba günü yerine gelirse gibi) geç doku teslim durumunda kısaltılabilir. </li></ol> II. Kimyasal maruz kalma - 1. Gün <ol><li> Sadece 0.9 ml başına iyi tahlil orta üst sıra dolum testi kimyasal başına bir adet 6-plaka hazırlayın. </li><li> Yaklaşık 5 dakika planlanan kimyasallara maruz kalmadan önce, inkübatör öncesi klimalı dokular içeren 6 kuyucuğu çıkarın. </li><li> Dokuların yüzey değerlendirin ve steril pamuk ipuçlarını kullanarak herhangi bir nem kaldırmak. </li><li> Tüm 6 plaka kapakları test malzeme kodları veya isimleri ile etiketleyin. </li><li> Doz 1 dakikalık aralıklarla test kimyasallar ile dokuların maruz kaldıktan sonra test kimyasalları durulama kolaylaştırmak için. Son doku dozlanarak kadar, steril kaput dozajlanarak dokuların plakaları tutun. </li><li> Sıvı kimyasallar test etmek için doku tepesinde, doğrudan çözüm 30 mcL dağıtmak ve naylon mesh dokuların yüzey üzerine yerleştirin. Gerekirse, cam Pasteur pipeti başkanlığındaki ampul kullanarak mesh yavaşça yerleştirin. Doku yüzey üzerine basmayın. </li><li> Test yarı katı için, doğrudan doku tepesinde 30 mcL dağıtmak için olumlu bir deplasman pipet kullanın. Pasteur pipeti ile gerekli yayılmasını kimyasal doku yüzeyinin mümkün olduğunca karşılamak için ise </li><li> Katı maddeler için, test maddesi, uygulama kısa bir süre önce, doku yüzeyinin steril DPBS 25 mcL ile nemlendirin. Bu test kimyasal doku yüzeyine temas artıracaktır. Ince öğütülmüş test materyali yaklaşık 25 mg ile 25 mg kalibre keskin uygulama kaşığı (veya başka uygun bir araç) doldurun. Katı test doku yüzeyine kimyasal uygulayın. Gerekirse kaşık, tamamen boşaltmak için Pasteur Pipet başkanlığında bir ampul kullanın. Katı yüzey üzerinde yayılmasını geliştirmek için ekler yavaşça sallayın. </li><li> Mum kıvamında test maddeler için, 8 mm çapında parçası düz "gibi çerez form ve doku, daha önce steril DPBS ile ıslatılmış tepesinde yer deneyin. Test maddesi ve doku arasındaki iletişim artırmak için "çerez", paslanmaz çelik veya plastik yardımı ile tartın. </li><li> Negatif kontrol ve kontrol dokulara pozitif kontrol olarak% 5 SDS olarak DPBS uygulayın. </li><li> Son doku dozaj sonra 35 için tüm plakaları ± 1 dakika transfer, nemlendirilmiş inkübatör (37 ± 1 ° C, 5 ±% 1 CO 2,% 95 RH). </li><li> 35 sonra 37 ° ± 1 dakika inkübasyon ° C inkübatör tüm plakaları çıkarın. Plakalar steril kaput içine koyun ve 60 dakika kimyasal maddelere maruz kalma süresi, ilk dozajlanarak doku tamamlanana kadar bekleyin. </li><li> Daha sonra (sigorta şirketlerini olumsuz bir dakikalık zaman aralığı başına eklemek kullanarak yıkama prosedürü başlatmake her ekleme için toplam maruz kalma süresi) 60 dakika olduğunu. </li><li> Dokuların steril DPBS ile durulama için bir yıkama şişesi kullanın. Daha sonra, geri kalan ile devam 15 kez eklemek doku DPBS sürekli kullanarak doldurun ve (Not boş naylon örgü dokular için, doku yüzeyinin 5 kez yıkayın ve örgü, keskin sivri forseps ile dikkatli bir şekilde kaldırmak 10 yıkama). </li><li> 15. 150 ml DPBS tamamen daldırın, insert 3 kez yıkama şişesi kullanarak yıkayın ve test malzemesi kalan kaldırmak için sallamak sonra. </li><li> Son olarak, içeriden bir doku eklemek yıkayın ve bir kez steril DPBS ile dışarıdan. </li><li> Ekleme hafifçe sallayarak ve steril kurutma kağıdı blot doku DPBS herhangi bir aşırı çıkarın. </li><li> Daha önce tahlil orta önceden dolu yeni 6-plaka, lekelenen doku ekler aktarın. (14-18) Tüm bu adımları her ekleme için 1 dakika içinde yapılmalıdır. </li><li> Son doku durulanır sonra, steril bir pamuk ile her doku yüzeyine dikkatlice kurulayın çubukla uçlu. </li><li> Inkübatör dokuların sonraki 24 ± 2 saat inkübe (37 ± 1 ° C, 5 ±% 1 CO 2,% 95 RH). Not: Her tahlil teknisyen aşağıda açıklandığı gibi, protokolü takip edebilmek için, tek bir test run (set) negatif ve pozitif kontroller de dahil olmak üzere fazla 6 testi maddelerin test olmamalıdır </li></ol> III. Orta tokuş - 2. Gün <ol><li> 24 saat sonra ± 2 saat sonrası inkübasyon, 6-plaka, 0.9 ml medya ile önceden doldurulmuş alt kısmında ekler transfer. Üst sıralarda yer alan medya, ek uç noktaları (sitokinler, kemokinler vb.) Analizi için toplanan olabilir. İkincil sonlanım noktaları Analizi isteğe bağlıdır. </li><li> Post-inkübasyon ile devam edin (37 ± 1 ° C, 5 ±% 1 CO 2,% 95 RH) başka bir 18 ± 3 saat. </li></ol> IV. MTT Canlılık Testi - 3. Gün <ol><li> Etiket iki kimyasal adları veya kodları ile 24 kuyucuğu. Bir plaka MTT ile doku inkübasyon hizmet ve çıkarma adım için. </li><li> MTT konsantre çözülme (5 mg / ml) ve MTT seyreltici ile seyreltilmesi MTT çözüm hazırlayın. MTT çözümün nihai konsantrasyonu 1 mg / ml. </li><li> Pipet 300 mcL 24 plaka her kuyuya MTT çözüm. </li><li> Inkübatör 6 kuyucuğu çıkarın blot kağıt üzerine ekler alt blot ve MTT ile önceden doldurulmuş 24 plaka içine aktarabilirsiniz. </li><li> Inkübatörde 24 plaka koyun (37 ± 1 ° C, 5 ±% 1 CO 2,% 95 RH) ve 3 saat inkübe ± 5 dk. Strictly 3 saat uymak ± 5 dakika inkübasyon süresi farklı MTT okumaları arasındaki sapma önlemek için. </li><li> MTT inkübasyon tamamlandığında, yavaşça tüm kuyulardan MTT orta aspire bir emme pompası kullanın. </li><li> Yedek DPBS kuyulardan ve tekrar aspire. Bu durulama iki kez daha tekrarlayın ve dokuların son aspirasyon sonra kuru olduğundan emin olun. </li><li> Yıkar, yeni bir 24-plaka ekler transferinden sonra. Her ekleme yavaşça içine 2 ml ekstrenin solüsyonu (Isopropanol) pipetleme ekler bırakın. Düzeyi, böylece tamamen dokuların daldırarak ucun üst kenarları üzerinde artacak. </li><li> Ekstrenin buharlaşma etkisizleştirmek için 24-iyi plaka Seal (örneğin Parafilm veya sızdırmazlık çanta kullanarak). Bir tabak çalkalayıcı (~ 120 rpm) hafif sallayarak ile oda sıcaklığında en az 2 saat boyunca dokular MTT ayıklayın. Gecelik çıkarma sallayarak olmadan da kullanılabilir. </li><li> Ekstraksiyon süresi tamamlandıktan sonra, delmek bir enjeksiyon iğnesi veya ampul Pasteur pipeti boncuklu ve özü eklemek alındığı kuyuya çalışmasına izin ekler. </li><li> Delinirse eklemek atın ve homojen kadar iyi ve aşağı üç kez çözüm pipetle. </li><li> Her doku için, 96 sıra düz bir alt mikrotiter plate mor formazan çözümün iki 200 mcL alikotları transfer. Bu video protokolü ile birlikte Çizelgede verilen sabit plaka tasarımı göre çoğaltır aktarın. Boşlukları, izopropanol kullanın. </li><li> Bir referans filtre olmadan bir dalga boyu 570 nm (540-580) kullanarak 96-plaka spektrofotometre MTT özler optik yoğunluk (OD) okuyun. </li><li> Otomatik hesaplama sonuçları (Şekil 1) Çizelgede sonuçları girin. </li><li> MTT testi ile belirlenen yüzde doku canlılığı negatif kontrol göre &lt;% 50 ise bir test kimyasal tahriş edici (R38 veya GHS kategori 2) olarak etiketlenir. Not: MTT toksik, böylece kullanırken koruyucu eldiven giymek emin olun. MTT ve onun kadar koruyunEtkin çözüm ışıktan, MTT beri ışığa karşı hassastır. Hazırlandıktan sonra bir kaç saat içinde zamanla düşürür çünkü MTT çözüm kullanın. </li></ol> V. Testi Kalite Denetimleri <ul><li> Epiderm EPI-200-SİT kit Kabul Kriterleri: In vitro RHE modelleri (8) doğrulama işlemi sırasında değil, zaman içinde tutarlı, yüksek kaliteli veri sağlamalıdır. Uzun vadeli tahlil tekrarlanabilirlik ve performans sağlamak için önerilen kurallar "performans için her bir lot örnekleme doku veya hücrelerin tam karakterizasyonu, ..., ve test performansı tutarlılığı güvence sağlamak için düzenli kontrolleri ve benchmark kimyasalların kullanımı" (9) . Buna ek olarak, aşağıda ana hatlarıyla tahlil kabul kriterleri, Epiderm her üretim yeri (% 1 Triton X-100) ek bir kriter kimyasal karşı üretici tarafından test kalite kontrol. Maruz kalma süresi% 50 (ET-50) Triton X-100 belirlenir doku canlılığı azaltmak için gerekli. Epiderm için, yıllık ortalama ET-50 değerleri 5.9 saat ile 7.5 saat arasında değişmektedir. Çok negatif kontrol dokuları için çok CV (bazal canlılığı değişkenliği), 1996 yılından beri, her yıl için% 7.5 altında ortalama vardır. Amacıyla, her üretim yeri ET50 1996 (; Alt kabul sınırı = 4.8h üst kabul limit = 8.7h yani ET-50 = 6.7 saat) yılında kurulan tarihsel ortalamanın Triton X-100 ET50 2 standart sapma değeri içinde olmalıdır üretici tarafından kullanım için piyasaya sürülecek. </li><li> EPI-200-SİT Testi Kabul Kriter 1: Negatif Kontrol: MTT testi negatif kontrol (NC) dokular (steril DPBS ile tedavi) mutlak OD, nakliye ve depolama sonra prosedürleri ve belirli kullanım koşulları altında test laboratuarında elde edilen doku canlılığının bir göstergesi. NC dokuların ortalama OD 570 ≥ 1.0 ve ≤ 2.5 ise tahlil kabul kriteri karşılamaktadır. </li><li> EPI-200-SİT Testi Kabul Kriter 2: Pozitif Kontrol % 5 SDS (H 2 O) çözeltisi, pozitif kontrol (PC) olarak kullanılan ve test kimyasalları ile eş zamanlı olarak test edilmiştir . PC, her tahlil test edilebilir, ancak birden fazla PC gün test başına gerekli olduğunu Eşzamanlı anlamına gelir. Pozitif kontrol Canlılık tarihsel veriler% 95 güven aralığı içinde olmalıdır. Testin negatif kontrol dokuların% 20% olarak ortalama PC dokuların canlılığını ifade kabul kriteri karşılamaktadır. </li><li> EPI-200-SİT Testi Kabul Kriter 3: Standart sapma (SD) Tahrişi 3 tek dokular üzerinde belirlenen ortalama canlılığı tahmin ve bu nedenle doku değişkenlik kabul edilebilir düşük olmalıdır çoğaltır. Aynı tedavi edilen 3 ayrı% doku canlılığında hesaplanan SD &lt;% 18 çoğaltır eğer tahlil kabul kriteri karşılamaktadır. </li></ul> Temsilcisi Sonuçlar <div style="border:1px #000000 solid; width:100%; padding-bottom:5px;"><img src="/files/ftp_upload/1366/1366fig1.jpg" alt="Şekil 1"> <img src="/files/ftp_upload/1366/1366fig1_2.jpg" alt="Şekil 2"> <img src="/files/ftp_upload/1366/1366fig1_3.jpg" alt="Şekil 3"> </div> Şekil 1 - 6 test makaleler, NC ve PC kontrol edilen sonuçlar Bölüm sonuçlarının hesaplanması için otomatik bir elektronik tablo. NC başvurulan% 50 'nin altında doku canlılığı azalttı Testi kimyasalların tahriş edici olarak sınıflandırılır. Testi, yeteri kadar bu testin sağlamlık artan sınıflandırma cut-off (50% canlılığı) sonuçlar sağlayacak şekilde optimize edilmiştir. <div style="background-image:url(../index_RES_1me8j21/c1vzp1s1_strip23px.png); background-position:0 100%; background-repeat:repeat-x; height:24px; width:100%;"><div style="padding-left:26px; padding-right:4px; padding-top:4px; width:100%;"> Malzemeler </div></div><img src="/files/ftp_upload/1366/materialstable.jpg" alt="Malzeme Listesi">

<ol><li>Kandárová, H., Liebsch, M., Genschow, E., Gerner, I. ngrid, Traue, D., Slawik, B., Spielmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+EpiDerm+Test+Protocol+for+the+upcoming+ECVAM+Validation+Study+on+In+Vitro+Skin+Irritation+Tests%5BTitle%5D)+AND+%22ALTEX%22%5BJournal%5D)">Optimization of the EpiDerm Test Protocol for the upcoming ECVAM Validation Study on In Vitro Skin Irritation Tests.</a> ALTEX. 21, 107-114 (2004).</li>
<li>Kandárová, H., Liebsch, M., Gerner, I., Schmidt, E., Genschow, E., Traue, D., Spielmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EpiDerm+Skin+Irritation+Test+Protocol+-+Assessment+of+the+performance+of+the+optimized+test%5BTitle%5D)+AND+%22ATLA%22%5BJournal%5D)">EpiDerm Skin Irritation Test Protocol - Assessment of the performance of the optimized test.</a> ATLA. 33, 351-367 (2005).</li>
<li>Kandárová, H., Hayden, P., Klausner, M., Kubilus, J., Kearney, P., Sheasgreen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Skin+Irritation+Test%3A+Improving+the+Sensitivity+of+the+EpiDerm+Skin+Irritation+Test+Protocol.Accepted+for+publication%5BTitle%5D)+AND+%22ATLA%22%5BJournal%5D)">In Vitro Skin Irritation Test: Improving the Sensitivity of the EpiDerm Skin Irritation Test Protocol.Accepted for publication.</a> ATLA. , Forthcoming (2009).</li>
<li>Spielmann, H., Hoffmann, S., Liebsch, M., Botham, P., Fentem, J., Eskes, C., Roguet, R., Cotovi, J., Cole, T., Worth, A., Heylings, J., Jones, P., Robles, C., Kandárová, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ECVAM+International+Validation+Study+on+In+Vitro+Tests+for+Acute+Skin+Irritation%3A+Report+on+the+Validity+of+the+EPISKIN+and+EpiDerm+Assays+and+on+the+Skin+Integrity+Function+Test%5BTitle%5D)+AND+%22ATLA%22%5BJournal%5D)">The ECVAM International Validation Study on In Vitro Tests for Acute Skin Irritation: Report on the Validity of the EPISKIN and EpiDerm Assays and on the Skin Integrity Function Test.</a> ATLA. 35, 559-601 (2007).</li>
<li>Follow-up validation of the modified EpiDerm Skin Irritation Test (SIT): results of a multicentre study of twenty reference test substances. Liebsch, M., Gamer, A., Curren, R., Frank, J., Genschow, E., Tharmann, J., Remmele, M., Bauer, B., Raabe, H., Barnes, N., Hilberer, A., Wilt, N., Lornejad-Schäfer, M. R., Schäfer, C., Spiller, E., Hayden, P., Kandárová, H. 15th Congress on Alternatives to Animal Experimentation, 2008 September 19-21, Linz Austria, , (2008).</li>
<li>United Nations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Globally+Harmonized+System+of+Classification+and+Labeling+of+Chemicals+%28GHS%29%22">Globally Harmonized System of Classification and Labeling of Chemicals (GHS)</a>. , Second revised edition, UN. New York and Geneva. (2007).</li>
<li>ESAC. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Statement+on+the+Scientific+Validity+of+In-Vitro+Tests+for+Skin+Irritation+Testing%22">Statement on the Scientific Validity of In-Vitro Tests for Skin Irritation Testing</a>. , ESAC. (2008).</li>
<li>Gupta, K., Rispin, A., Stitzel, K., Coecke, S., Harbell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ensuring+quality+of+in+vitro+alternative+test+methods%3A+Issues+and+answers%5BTitle%5D)+AND+%22Regul+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Ensuring quality of in vitro alternative test methods: Issues and answers.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 43, 219-224 (2005).</li>
<li>Rispin, A., Stitzel, K., Harbell, J., Klausner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ensuring+quality+of+in+vitro+alternative+test+methods%3A+Current+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Regul+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Ensuring quality of in vitro alternative test methods: Current practice.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 45, 97-103 (2006).</li>
</ol>

Yazarlar, bu makalede kullanılan reaktifleri ve araçları üreten MatTek şirketinin çalışanlarıdır.

Bu video, Epiderm Deri irritasyon testi (Epiderm SIT), kimyasal maddeler, kozmetik ve ilaç hammaddeleri de dahil olmak üzere in vitro cilt tahrişi testi için geliştirilen ve geçerliliği göstermiştir. Bu yöntem yaparken, protokolün sapma değişik sonuçlara neden olabilir, aseptik koşullarda çalışma ve kesin olarak doğrulanmış bir protokolü takip etmek önemlidir. Testinin bazı değişiklikler yapılabilir, ancak, protokol değişiklikleri yazarlar ile doğrudan tartışılan olmalıdır. Bu yöntemin tek sınırlama MTT son nokta ile test maddenin olası bir girişim. MTT son nokta ile doğrudan MTT azaltır renkli bir test maddesi veya bir (ve böylece hücresel mitokondri dehidrogenaz aktivitesi taklit) engel olabilir. Ancak, bu test madde (ya da) dokularda bulunur MTT testi (yani test madde maruz kaldıktan sonra 42 saat) test maddesi, yeterli miktarda anda sadece bir sorun. Bu olası olay, (gerçek) metabolik MTT azaltılması ve katkı renkli bir test materyali veya (yanlış) tarafından sağlanan tahlil Standart Operasyon Prosedürü ayrıntılı olarak açıklanan bir prosedür ile belirlenebilir test malzemesi doğrudan MTT azaltma durumunda Mattek Corp.

bir in vitro</emepiderm> cilt tahriş testi (sit) İnsan epidermal (rhe) model yeniden inşa

An In Vitro Skin Irritation Test (SIT) using the EpiDerm Reconstructed Human Epidermal (RHE) Model

Epiderm Deri irritasyon testi (Epiderm SIT) geliştirildi<sup&gt; (1,2,3)</sup&gt; Ve valide<sup&gt; (4,5)</sup&gt; Için<em&gt; In vitro</emKimyasallar&gt;, kozmetik ve ilaç maddeler de dahil olmak üzere cilt tahrişi testleri,. Epiderm SİT 3D kullanmaktadır.<em&gt; In vitro</em&gt; Yeniden inşa insan epidermal (RHE) modeli Epiderm. Bu protokolü açıklanan prosedür GHS kategori tahriş edici 2 ve non-tahriş edici arasında ayırım sağlar<sup&gt; (6)</sup&gt;. 4 günlük bir zaman dilimi boyunca oluşan ön-inkübasyon, 60 dakika maruz kalma, 42 saat sonrası inkübasyon ve MTT canlılığı tahlil, test yapılır. Doku alınması ve bir gecede ön-inkübasyon (Gün 0) sonra, dokularda sıvı, yarı katı, katı ya da balmumu olabilir test kimyasallar (Gün 1), topikal maruz kalmaktadır. Üç dokular her test kimyasal yanı sıra, pozitif kontrol (% 5 aq. SDS çözüm) ve negatif kontrol (DPBS) için kullanılır. Kimyasal maddelere maruz kalma, dokular 37 bir kuluçka tutulur 60 dakika, 35 dakika ° C sürer Test maddeler daha sonra doku yüzeyinin geniş bir yıkama prosedürü kaldırılır. Doku ekler, lekelenen ve taze ortama aktarılır. 24 saat inkübasyon süresi (Gün 2) sonra, orta değiştirilir. Orta, sitokinler ya da diğer ilgi uç noktaları daha fazla analiz için kaydedilebilir. Orta döviz sonra, doku ilave bir 18 saat inkübe edilir. Tüm 42H sonrası inkübasyon (3 gün) sonunda, dokuların sarı MTT çözüm içine transfer edilir ve 3 saat inkübe. Özellikle mitokondriyal metabolizma ile oluşan çıkan mor-mavi formazan tuz, izopropanol kullanılan 2 saat çıkarılır. Ayıklanan formazan optik yoğunluk bir spektrofotometre kullanılarak belirlenir. % 50 &#39;nin altında negatif kontrol tedavi dokulara göre doku canlılığı azalmış ise tahriş edici kimyasal olarak sınıflandırılır. Bu prosedür, AB düzenlemelerine paralel olarak kimyasal maddelerin tehlike tanımlama ve etiketleme için in vivo tavşan cilt irritasyon testi dolu yedek olarak kullanılabilir<sup&gt; (7)</sup&gt;.

Bu video, Epiderm Deri irritasyon testi (Epiderm SIT) için geçerli göstermek<em&gt; In vitro</emKimyasallar&gt;, kozmetik ve ilaç maddeler de dahil olmak üzere cilt tahrişi testleri,.

Bir In Vitro</emEpiderm> Cilt tahriş Testi (SIT) İnsan Epidermal (RHE) Model yeniden inşa

EpiDerm Cilt İrritasyon testi (EpiDerm SIT), ... dahil olmak üzere kimyasalların in vitro cilt irritasyon testleri için geliştirilmiş (1,2,3) ve valide edilmiştir (4,5).

Epiderm, Matt Tech Corporation tarafından geliştirilen, normal insan hücrelerinden türetilmiş, in vitro rekonstrüktif bir insan epidermis modelidir. EC VM onaylı epiderm cilt iritasyon testi protokolü; kozmetik ürünler, ham maddeler ve endüstriyel ajanlar gibi insan cildiyle temas edecek ürünlerin geleneksel hayvan bazlı testlerinin yerini almaktadır. Bu test, cilt iritasyon kiti ve epiderm dokusunun laboratuvara ulaştığı sıfırıncı günde başlar ve ardından gece boyu süren bir inkübasyonun ardından bir assay ortamında ön koşullandırma işlemi uygulanır.Birinci günde, epiderm dokusunun atipik yüzeyi bir saat boyunca potansiyel bir irritan bileşiğe maruz bırakılır ve ardından ikinci günde bir yıkama adımıyla irritan uzaklaştırılır. 24 saatlik inkübasyonun ardından, kültür inserti taze medyuma yerleştirilir ve eski medyum, salınan sitokinlerin ve kemokinlerin analizi için kullanılabilir. Doku, mitokondriyal redüktaz tarafından koyu mor renge dönüştürülen MTT olarak bilinen bir bileşik ile reaksiyona sokulur.Hücre canlılığı için bir okuma sağlanır. Örnekte koyu mor rengin olmaması, canlılığın azaldığının bir göstergesidir. Bir test bileşiği için kolorimetrik okuma, negatif kontrollerin %50'sinden düşük olduğunda, test bileşiği iritan olarak sınıflandırılabilir.Merhaba, ben Matt Corporation'dan Helena Kava. Bugün size, yeniden yapılandırılmış insan deri modeli epiderm kullanılarak yapılan in vitro cilt tahriş testi prosedürünü göstereceğiz. Bu prosedür, düzenleyici gerekliliklere bağlı olarak, in vivo hızlı cilt tahriş testinin tamamı veya bir kısmı yerine kullanılabilir.Bu yeni in vitro prosedür, kimyasalların ve ham kozmetik maddelerin tehlike tanımlaması ve etiketlemesi için kullanılabilir. Öyleyse başlayalım. Epiderm, insan epidermisinin üç boyutlu, çok katmanlı ve yüksek derecede farklılaşmış bir modelini oluşturmak için insan epidermal keratinosit kültüründen türetilmiştir.Dokular mitotik ve metabolik olarak aktiftir; hem yapısal hem de biyokimyasal olarak in vivo karşılıklarını yakından taklit ederler ve bunu insan epidermisi gibi garanti edilmiş bir tekrarlanabilirlikle gerçekleştirirler. Epidermis; organize bazal, spinöz ve granüler tabakalar ile çok tabakalı bir stratum corneum'dan oluşur. Sonuncusu, in vivo'da bulunanlara benzer paternlerde düzenlenmiş hücreler arası lam Miller lipid tabakaları içerir.Bu dokular serumsuz ortamda kültüre edilir. Her doku, ayrı bir hücre kültürü insertinde büyütülür. 96 kuyucuklu yüksek kapasiteli format dahil olmak üzere diğer konfigürasyonlar da mevcuttur.Doku üretimi yaklaşık üç hafta sürer; bu sürecin belirli bir noktasında doku, hava-sıvı ara yüzeyine yükseltilir ve dokunun apikal yüzeyindeki tüm sıvı uzaklaştırılır. Dokular, MatTek'in tescilli kültür ortamıyla temas halinde kalan bazolateral yüzey aracılığıyla beslenir. Tipik bir Epiderm kiti, her biri doku kültürü insertinde yer alan dokuz milimetre çapında 24 doku ve bu cilt irritasyon testini gerçekleştirmek için yeterli miktarda analiz ortamı içerir.24 eklem, standart bir 24 kuyucuklu plakadaki her bir kuyucukta bir doku olacak şekilde, orta infüzyonlu AGA gül jeline sıkıca yerleştirilmiştir; sevkiyat, kimyasal testlere başlamadan önce gece taşıyıcısı ile 3 ila 4 °C sıcaklıkta gerçekleştirilir. EPIDERM test sistemini kullanarak, analizde kullanılan tüm enstrüman ve araçları yazılı protokolde açıklandığı şekilde hazırlayın ve sterilize edin. Pamuklu çubuklar gibi malzemelerin bir kısmı steril paketlerde gelmeli veya otoklavlanmalıdır.Pens gibi aletlerin sterilizasyonu için %70 etanol, yıkama şişelerinin sterilizasyonu için ise UV veya gama ışınlaması kullanılmalıdır. Analizde kullanılan iki kritik çözelti, önceden hazırlanmış DPBS ve %5 SDS çözeltisidir. 24 epiderm dokusu içeren bir kit ile gerçekleştirilecek analizde, distile su içerisinde yaklaşık iki litre steril pH 7 DPBS kullanılacaktır.Steril DPBS, hem negatif kontrol hem de yıkama solüsyonu olarak kullanılır. Pozitif kontrol olarak %5 SDS hazırlanmalı ve kullanılmalıdır. Cilt irritasyon testi, EPIDERM EPI 200 SIT kitinin teslim alınmasıyla başlar.Tüm kit bileşenlerinin bütünlüğünü kontrol ettiğinizden emin olun ve herhangi bir sorun olması durumunda derhal Mat Tech şirketi ile iletişime geçin; her şey tamamsa bir sonraki adıma geçin. Teste başlamak için, kit ile birlikte verilen assay ortamının oda sıcaklığına ulaşmasını bekleyin. Laminar akışlı kabin içerisinde ön ısıtma yapmayın.Her üç epiderm doku inserti için bir adet steril altılı kuyucuklu plaka hazırlayın ve steril koşullar altında her kuyucuğa 0.9 mililitre analiz ortamı pipetleyin. Epidermal dokuları içeren 24 kuyucuklu plakanın bulunduğu plastik torbayı steril hava akışı altında açın. Steril gazlı bezi kaldırın ve epidermal doku içeren her bir inserti dikkatlice çıkarmak için steril pens kullanın.İnsertin dış yanlarına yapışmış olan kalan tüm artıkları, steril gazlı bez veya filtre kağıdıyla hafifçe tamponlayarak temizleyin. Ardından, dokuları önümüzdeki beş dakika içinde boş, steril 24 kuyucuklu plakaya yerleştirin. İnsertleri görsel olarak kontrol edin.Yüzeydeki doku defektlerini ve aşırı nemi kaydedin. Defektli dokuları veya tamamen sıvı ile kaplanmış dokuları kullanmayın.Optimal doku insertleri. Yüzey kuru olmalı; ayrılmalar, düzensiz kısımlar veya yüzeyde fazla sıvı bulunmamalıdır. Ardından, steril bir pamuklu çubuk kullanarak dokuların yüzeyini dikkatlice kurulayın.Dokuya doğrudan dokunmamaya çalışın. Yüzeyi kuruttuktan sonra, yüzeydeki nemi uzaklaştırmak için kılcal etkiler yeterlidir. Her altı dokunun üst sırasına üç doku aktarın.Kuyucuk plakaları 0,9 mililitre analiz ortamı ile önceden doldurulur. İnsetlerin altında kalan hava kabarcıkları serbest bırakılır. Ardından, insetleri içeren altı kuyucuklu plakalar bir saat boyunca inkübatöre yerleştirilir.37 °C'de ön inkübasyon. İlk ön inkübasyon süresinin sonunda, insertleri altı kuyucuklu plakanın üst kuyucuklarından alt kuyucuklarına aktarın. Plakaları gecelik ön inkübasyon için tekrar inkübatöre yerleştirin.Kalan analiz ortamını buzdolabına yerleştirin. Gece boyu süren ön inkübasyonun ardından, test kimyasalları epiderm doku insertlerine uygulanabilir. Kimyasal maruziyet analizine başlamadan önce, gerekli tüm cihazları, solüsyonları ve test kimyasallarını oda sıcaklığına getirin.Steril kabin içerisinde, steril olmayan tüm materyal şişelerini kabine yerleştirmeden önce %70 etanol ile silin. Negatif kontrol steril DPBS, pozitif kontrol, %5 SDS ve distile su da oda sıcaklığında kabine yerleştirilmelidir. Atıklar için büyük bir flakon kenara ayrılmalıdır.Her bir kimyasal için bir adet altılı kuyucuklu plaka hazırlayarak, yalnızca üst sıradaki her bir kuyucuğa 0,9 ml analiz ortamı doldurun. Her plakayı doku numarası ve kimyasal adı ile etiketleyin.Planlanan kimyasal maruziyetinden yaklaşık beş dakika önce, ön koşullandırma dokularını içeren altı kuyucuklu plakaları inkübatörden çıkarın. Ardından dokuların yüzeyini görsel olarak değerlendirin.Steril pamuklu çubuklar kullanarak tüm nemi alın ve doku yüzeyine baskı uygulamayın. Son olarak, altılı kuyucuklu plaka kapaklarını test materyali kodları veya isimleri ile etiketleyin. Tek bir test döngüsünde, negatif ve pozitif kontroller de dahil olmak üzere, her biri üç tekrarlı altıdan fazla kimyasalı test etmeyin.Bilinen test maddeleriyle çalışırken bir dakikalık kimyasal uygulama ve yıkama aralığı kullanın. Kodlanmış veya bilinmeyen numuneler için malzeme güvenlik bilgi formunda veya MSDS'de verilen talimatları izleyin. Kimyasal güvenlik yönergelerine uyun ve havalandırmalı bir kabin kullanın.Eldiven takın; gözlerinizi ve yüzünüzü koruyun. Maruziyet sonrası test kimyasallarının durulanmasını kolaylaştırmak için dokuları bir dakikalık zaman aralıklarıyla kimyasallara maruz bırakın; dozlanan dokuların bulunduğu plakaları, son doku dozlanana kadar laminar akışlı kabinde tutun. Prosedür boyunca dokuları ve test bileşiklerini manipüle etmek için ucu ampul şeklinde bir pipet kullanılacaktır. Sıvı kimyasalları test etmek için ampul şeklinde uç oluşturmak amacıyla Bunsen beki alevi kullanılabilir.Sıvı test maddesinin 30 µL'sini doğrudan dokunun üzerine damlatın ve süreyi ölçmek için zamanlayıcıyı hemen başlatın. Naylon ağı dokunun yüzeyine yerleştirin. Zamanlayıcı bir dakikaya ulaştığında, ikinci sıvı bileşiği ekleyin. Her test kimyasalı için üç doku kullanın ve her bir bileşiği birer dakika aralıklarla eklemeyi unutmayın.Yarı katıların testi için, 30 µL maddeyi doğrudan dokunun üzerine damlatmak amacıyla pozitif deplasmanlı bir pipet kullanın. Gerektiğinde, kimyasalı doku boyutuna uygun hale getirmek için pastör pipeti ile yayın. Katı maddenin uygulanmasından kısa süre önce, doku yüzeyinin test kimyasalıyla temasını artırmak için yüzeyi 25 µL steril DPBS ile nemlendirin; ardından 25 mg'lık keskin uygulama kaşığını ince öğütülmüş test materyali ile doldurun.Katı test kimyasalını doku yüzeyine uygulayın. Gerekirse, kaşığı tamamen boşaltmak için pipetinizin ucuna takılmış steril bir lastik pompasını kullanın. Katının yüzeye daha iyi yayılmasını sağlamak için insertleri hafifçe sallayın.Doku boyutuna uygun hale getirmek için pipetinizin ucuna balon uç da takabilirsiniz. Doku yüzeyine baskı uygulamayın. Son olarak, son doku dozlamasından sonra, negatif kontrol olarak DPBS ve pozitif kontrol olarak %5 SDS'yi doku insertlerine yine üç tekrarlı olarak uygulayın; ardından tüm plakaları 35 ± 1 dakika boyunca nemlendirilmiş 37 °C inkübatöre yerleştirin.Bu inkübasyon sırasında, yıkama adımları için gerekli tüm malzemeleri çeker ocak içerisine yerleştirdiğinizden emin olun. 35 dakikalık inkübasyonun ardından tüm plakaları inkübatörden çıkarın. Plakaları steril çekere ocağa yerleştirin ve ilk doz doku için 60 dakikalık kimyasal maruziyet süresinin tamamlanmasını bekleyin.Ardından, yıkama prosedürüne başlayın. Dokuları steril DPBS ile 15 kez durulayın. Herhangi bir kalıntı test materyalini uzaklaştırmak için, doku yüzeyinden 1,5 santimetre uzaklıktan sabit bir DPBS akışı kullanarak doku insertini doldurun ve boşaltın.DPBS akışının çok zayıf olmadığından emin olun, aksi takdirde test maddesi uzaklaştırılamaz. Dört dokunun naylon ağ ile beş kez yıkanması için bir dakikalık zaman aralığını korumayı ve ağı sivri uçlu pensle dikkatlice çıkarmayı unutmayın. Ardından, 15. yıkamadan sonraki kalan 10 yıkama ile devam edin; yıkama şişesini kullanarak inserti üç kez tamamen daldırın ve 150 milliliters DPBS ile test materyalinin kalıntılarını uzaklaştırmak için çalkalayın.Son olarak, dokuyu durulayın. Steril DPBS ile bir kez içeriden ve bir kez dışarıdan yıkayın. İnseti hafifçe sallayarak ve steril emici kâğıda bastırarak doku üzerindeki fazla DPBS'yi uzaklaştırın.Ardından, blotting işlemi yapılmış doku insertlerini, daha önce assay medyumu ile doldurulmuş olan yeni altı kuyucuklu plakaya aktarın. Her bir örnek için 60 dakikalık maruziyet süresini korumak adına, tüm bu adımların bir dakikalık ara ile tamamlanması gerektiğini tekrar hatırlatırız. Son doku durulandıktan sonra, her bir dokunun yüzeyini steril pamuklu bir swab ile dikkatlice kurulayın.Yüzeyde hala kimyasal kalıntıları mevcutsa, bunları steril pamuklu çubuk kullanarak temizlemeye çalışın. Son olarak, dokuları önümüzdeki 24 saat boyunca inkübatörde inkübe edin. İnkübasyonun başlangıç saatini yöntem dokümantasyon formuna kaydedin.Ayrıca, yöntem dokümantasyon formuna tüm farklı uygulamaları kaydedin. Plakaların çeker ocakta taşınmasıyla ilgili Mat Tech Corporation tarafından sağlanan standart uygulama prosedürünün ekine ekleyin. İnseti, 0.9 mL besiyeri ile önceden doldurulmuş altı kuyucuklu plağın alt kısmına aktarın.Üst sıradaki besiyerini toplayın ve önceden etiketlenmiş bir 24 kuyucuklu plakaya aktarın, ardından plakayı -20 °C'ye yerleştirin. Analize kadar, kültür besiyerine salınan sitokinlerin ve/veya kemokinlerin analizi isteğe bağlı bir adımdır. İnkübasyona MTT analizi için 18 ± 3 saat daha devam edin ve iki adet 24 kuyucuklu plağı kimyasal isimleri veya kodlarıyla etiketleyin.MTT'nin toksik olduğunu unutmayın, bu nedenle işlem sırasında koruyucu eldiven giydiğinizden emin olun. MTT konsantresini çözdürüp MTT dilüenti ile seyrelterek MTT çözeltisini hazırlayın.MTT ışığa duyarlı olduğu için ışıktan koruyun ve iki ila üç saat içinde kullanın. MTT zamanla degrade olduğu için 24 kuyucuklu plakanın her bir kuyucuğuna 300 µL MTT medyumu pipetleyin. Şimdi altı kuyucuklu plakaları inkübatörden çıkarın.İnsertlerin alt kısmını bir emici kağıtla kurulayın ve MTT ile önceden doldurulmuş 24 kuyucuklu plakaya aktarın. 24 kuyucuklu plakayı inkübatöre yerleştirin ve üç saat boyunca inkübe edin. Farklı MTT okumaları almayı önlemek için MDS'ye MTT inkübasyonunun başlangıç saatini kaydetmeyi unutmayın ve üç saatlik inkübasyon süresine kesinlikle uyun. MTT inkübasyonu tamamlandığında, tüm kuyucuklardaki MTT ortamını nazikçe aspire etmek için toksik atık tuzağına sahip bir vakum pompası kullanın.Kuyucukları DPBS ile tekrar doldurun ve aspire edin. Bu durulama işlemini iki kez daha tekrarlayın ve son aspirasyondan sonra dokuların kuru olduğundan emin olun. Yıkama işlemlerinin ardından insertleri yeni bir 24 kuyucuklu plakaya aktarın; her bir insertin içine nazikçe iki mililitre ekstraksiyon çözeltisi pipetleyerek insertleri daldırın.Sıvı seviyesi insertin üst kenarlarının üzerine çıkacak ve böylece dokuları her iki taraftan tamamen kaplayacaktır. Ekstrakt kaybını ve buharlaşmayı önlemek için 24 kuyucuklu plakayı bir ısı mühürleyici veya parafilm kullanarak mühürleyin. Ekstraksiyonun başlangıç saatini yöntem dokümantasyon sayfasına kaydedin ve bir plaka çalkalayıcı üzerinde hafif çalkalama ile oda sıcaklığında en az iki saat boyunca ekstraksiyonu gerçekleştirin. Ekstraksiyon süresi tamamlandıktan sonra, insertleri bir enjeksiyon iğnesi veya pipet ucunuzla delerek ekstraktın, insertin alındığı kuyucuğa akmasını sağlayın.Delinmiş insertleri atın ve kuyucuktaki çözeltiyi homojen hale gelene kadar pipetle üç kez aşağı yukarı çekin. Her bir doku için 120 RPM'ye ayarlanmış bir plakka çalkalayıcı da kullanılabilir. Mavi forma ve çözeltiden iki adet 200 µL'lik alikotu 96 kuyucuklu düz tabanlı bir mikro titer plağına aktarın.Kopyaları, bu video protokolüne eşlik eden hesap tablosunda boşlar için verilen sabit plaka tasarımına göre aktarın. ISO propanol kullanın, referans filtresi kullanmadan 570 nanometre dalga boyunda 96 kuyucuklu plaka spektrofotometresi ile optik yoğunluğu veya OD'yi okuyun. Sonuçların otomatik hesaplanması için verileri hesap tablosuna girin.Eşlik eden protokolde belirtildiği üzere, test kimyasal girişimi kaynaklı düzeltmeleri dikkate alın; bir test kimyasalı tahriş edici olarak etiketlenir. Spektrofotometrik analiz sonucunda doku canlılık yüzdesi %50 veya daha düşükse, NC dokularının OD 570 değeri 1'e eşit veya büyük ve 2,5'e eşit veya küçükse; negatif kontrol dokularının yüzdesi olarak ifade edilen PC dokularının ortalama canlılığı %20'den azsa ve özdeş şekilde işleme tabi tutulmuş üç tekrarlayan örneğin bireysel doku canlılık yüzdelerinden hesaplanan SD %18'den azsa; hücre canlılık değerleri %50'den düşük olan bileşikler tahriş edici olarak kabul edilebilir.Rekonstrükte insan deri modeli Epiderm ile valide edilmiş 60 dakika ve 42 saatlik deri irritasyon testinin nasıl gerçekleştirileceğini size göstermiş olduk. Bu prosedürü uygularken, testin büyük bir kısmının steril veya aseptik koşullar altında gerçekleştirildiğini hatırlamak önemlidir. Herhangi bir yöntem modifikasyonuna ihtiyaç duyarsanız veya prosedür adımlarından herhangi birinin daha detaylı açıklanmasını isterseniz, lütfen yardım ve tavsiye için bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin.İşte böyle. İzlediğiniz için teşekkür ederiz, deneylerinizde başarılar dileriz.

an-vitro-skin-irritation-test-sit-using-epiderm-reconstructed-human

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu raporda, üç boyutlu bir cilt, mimari ve kompozisyon insan deri taklit modeli yeniden açıklar. Melanosit fizyolojisi, melanom ilerlemesi ve dermal kök hücre kaderi cilt modeli yeniden kullanarak incelenmiştir. Model preklinik ilaç değerlendirilmesi için bir araç olarak da yararlıdır.

Üç Boyutlu İnsan Cilt Model Yeniden İnşa: Aracı Normal Cilt ve Melanom İlerleme Eğitim

Bu videoda, melanom ilerlemesini incelemek için in vitro 3D organotipik cilt rekonstrüksiyonları oluşturmak için ayrıntılı protokol açıklanmaktadır. Bu cilt modeli, in vivo organların hem mimarisini hem de çok hücreli karmaşıklığını taklit eder.

Organotipik Tam Cilt Rekonstrüksiyonlarının Oluşturulması: İnsan Derisi Örneklerini Kullanarak 3D Cilt Modeli Oluşturma Prosedürü

Bu protokolün amacı, doğal cilde benzeyen üç boyutlu tam kalınlıkta bir cilt eşdeğeri oluşturmaktır. Özel olarak yapılmış bir otomatik yaralama cihazı ile, sterilitenin korunması altında hassas ve tekrarlanabilir yaralar oluşturulabilir.

Üç-boyutlu Tam Kalınlığı Deri Üretimi Eşdeğer ve Otomatik Yaralama

Biz üç boyutlu yeniden insan kornea gibi epitel (RHCE) doku modelini kullanan bir göz tahrişi testi geliştirdi. Test göz irritan ve korozif malzemeler (GHS kategorileri 1 ve kombine 2) ve etiketleme (GHS yok Kategori) gerekmez olanlar arasında ayrım yapabiliyor.

Yeniden İnşa İnsan Kornea gibi Epitelyal (RHCE) Doku Modeli kullanılarak Göz tahriş Kimyasalların Tehlike Tanımlaması Göz tahrişi Testi (EIT)

Bu makalenin amacı, epidermal keratinositlerden ve devitalize insan dermisinden genetik olarak değiştirilmiş insan organotipik derisinin nasıl oluşturulacağına dair kapsamlı ve ayrıntılı bir protokol sağlamaktır.

Güçsüz İnsan dermis kullanma Genetiği Değiştirilmiş Organotipik Cilt Kültürlerin Üretimi

Bu makromoleküler Crowders (MMC) kullanarak, hücre dışı matris protein açısından zengin hücre-türevi matrisleri elde etmek için bir protokol mevcut. Buna ek olarak, yapının vadesinin korurken kültür süresini azaltır 3D Organotipik bir deri ko-kültür üretimi bölgesi MMC içeren bir protokol mevcut.

Geliştirilmesi 2D ve 3D Cilt<em&gt; İn Vitro</emMakromoleküler Dışlamasını Kullanma&gt; Modeller

Bu protokol, üç boyutlu yeniden oluşturulmuş insan epidermisini tekrarlanabilir ve sağlam bir şekilde yetiştirmek için basit bir yöntemi açıklar. Ek olarak, epidermal bariyer modelinin yapı-işlev ilişkisini karakterize eder. Yeniden inşa edilen insan epidermisinin proinflamatuar uyaranlar üzerine biyolojik tepkileri de sunulmaktadır.

Büyük Ölçekte Üç Boyutlu Yeniden Yapılandırılmış İnsan Epidermisi Yetiştirmek

Bu protokolün amacı, uzun vadeli kültür için erişilebilir ve basit teknikler kullanarak damarlı insan derisi eşdeğerlerinin neslini ve hacimsel analizini tanımlamaktır. Mümkün olduğu ölçüde, adımların gerekçesi, araştırmacılara araştırma ihtiyaçlarına göre özelleştirme olanağı sağlamak için açıklanmıştır.

Kendi Kendine Monte Edilmiş Vaskülerleştirilmiş İnsan Derisi Eşdeğerlerinin Üretimi

Burada, mikromakine mikroakışkan bir platform kullanarak üç boyutlu basitleştirilmiş ve farklılaşmamış bir cilt modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz. Paralel akış yaklaşımı, hepsi şırınna pompaları tarafından kontrol edilen, üstteki epitel hücrelerinin tohumlaması için bir dermal bölmenin yerinde birikmesini sağlar.

Mikromakine Mikroakışkan Platformda Basitleştirilmiş Üç Boyutlu Çip Üzerinde Cilt Modeli Üretimi

Burada, bir hücre kültürü laboratuvarında rutin araştırmalar için çeşitli 3D cilt modellerini tanıtmak için ucuz ve basit prosedürler sunuyoruz. Araştırmacılar, ticari olarak mevcut modellere güvenmeden ihtiyaçlarına göre uyarlanmış modeller oluşturabilirler.

Çok Sayıda Uygulama için Cilt Modelleri Oluşturma - İki Boyutlu (2D) Monokültürden Üç Boyutlu (3D) Çoklu Kültüre

Mevcut protokol, in vitro olarak konak-patojen etkileşimlerini araştırmak için organotipik doku modellerinin uygulanmasını özetlemektedir. Spesifik olarak, açıklanan model sistemi, ağız sağlığına karşı hastalık bağlamında biyofilmlerle (diş plağı) ilişkili mikroorganizmalara maruz kalan çok katmanlı bir ağız epiteli kullanır.

Konak-Patojen Etkileşimlerinin İn Vitro Araştırılması için Organotipik Doku Model Sistemleri

Öğrenin, EpiDerm cilt tahriş testi ile kimyasalların cilt tahriş potansiyelini değerlendirmeyi. Bu yöntem, yeniden yapılandırılmış insan epidermisi kullanarak hayvan testlerinin yerini alır ve kozmetik ürün güvenliği değerlendirmelerinde güvenilir sonuçlar sunar.

Bir In Vitro Cilt tahriş Testi (SIT) İnsan Epidermal (RHE) Model yeniden inşa

Daha fazla video keşfet