Name: Hem oksijenaz-1 ekspresyonunun Gua Sha Usul Biyoparlaklık Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-08-28T09:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Öğrenin, Gua Sha uygulamasının canlı fare modelinde hem oksijenaz-1 düzenlenmesi üzerindeki etkilerini biyoparlaklık görüntüleme ile nasıl incelendiğini. Bu yöntem, geleneksel Çin tıbbının modern biyomedikal araştırmalardaki terapötik potansiyelini ortaya koyar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

K. Wong, STC Wong Fonksiyonel ve Moleküler Görüntüleme Merkezi, Brigham ve Kadın hastaneye gelen fon tarafından desteklenen K. Wong, STC Wong Biyoteknoloji ve Bilişim, Methodist Hastanesi Araştırma Enstitüsü, Weill Cornell Medical College Merkezi tarafından desteklenmektedir. KK Kwong, I. Chen, JQ Ren Athinoula A. Martinos Merkezi Biyomedikal Görüntüleme, Massachusetts Genel Hastanesi fon tarafından desteklenmektedir. Lenuta Kloetzer Braden Kuo nöroenterik Araştırma Merkezi, Massachusetts Genel Hastanesi fon tarafından desteklenen Yazarlar Dr teşekkür. S. Zeng ve Optik Imaging Lab, Brigham ve Kadın Hastanesi, teknik yardım için X. Xu.

<ol><li> Kadın HO-1-lusiferaz transgenik farelerin (4-6 hafta yaş), varışta Taconic Çiftlikler, Inc satın alınabilir, farelerin en az 4 gün konaklama izin için bir hayvan barınağı tesisini yerleştirilir . </li><li> Biyoparlaklık görüntüleme için hazırlanması: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> HO-1, her bir fare tartılır. Hayvan ağırlığı luciferase dozu hesaplamak için gereklidir. </li><li> Epilasyon, hayvan ya da geri karın ve / üzerinde saç çıkarıcı Nair ® uygulamak için bir pamuk takas kullanınız . 5 ila 10 saniye bekliyorum. , Saçları temizlemek için temiz bir pamuk takas kullanın. Temiz kalan saçları temizlemek için distile su bir doku parçası batırın. </li><li> Arka plan gürültüsünü azaltmak için bir IVIS 100 istasyonun görüntüleme platformu olmayan bir floresan siyah kağıt (Strathmore Artagain ® siyah kağıt) yerleştirin. </li><li> Luciferase (Xenogen Corporation&#39;ın) konsantrasyonu 7.5 mg / ml (steril H 2 O çözünmüş) çözüm hazırlayın. Luciferase dozu 65.5 mg / kg vücut ağırlığı. Böylece, 20 gram fare 0,175 ml luciferase çözüm intraperitoneal gerektirir. Bunu başarmak için, luciferase çözümü (0.175ml) tek bir enjeksiyon hacmi 26-gauge iğne ile bir şırınga önceden yüklenmiş </li></ol></li><li> Gua Sha prosedürü: Gua Sha biyoparlaklık görüntüleme protokolü çalıştırmadan önce sadece bir kez uygulanır. Gua Sha ağrılı olmadığından, fare sakin izofluran kısaca anestezi ihtiyacı var. Gua Sha prosedürü aşağıdaki adımları içerir: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Gua Sha Gua Sha prosedürü sırasında birkaç kez hedef deri bölgelerinde yağlamak için yemeklik yağ veya distile su uygulayın. </li><li> Seramik bir çorba kaşığı veya bir plastik kaşık kullanarak nazik ama sağlam kuvvet fare arka arka arkaya saç serbest bölge kazımak. </li><li> Kazıma arka deri kırmızı olana kadar devam eder, genellikle 2 ile 3 dakika içinde elde edilen deri altındaki kan ekstravazasyonu bir işaretidir. </li></ol></li><li> HO-1 upregülasyonu birkaç saat içinde yavaş yavaş inşa edilir gibi Biyoparlaklık görüntüleme Gua Sha hemen veya birkaç saat sonra başlamış olabilir. Biyoparlaklık görüntüleme için prosedür: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Izofluran (% 1.5) ve tıbbi dereceli hava karışımı ile dolu bir anestezi indüksiyonu odasında fare anestezisi. </li><li> Fare uyuşturulduktan sonra, IVIS 100 optik görüntüleme istasyonu görüntüleme odasına fareyi hareket ettirin. Fare (yukarı karın) supin pozisyonda yerleştirin. Görüntüleme odasının sürekli izofluran,% 1.5 ile demlenir. Görüntüleme platformu 37 ısıtılır ° C fare sıcak tutmak için. </li><li> , &quot;Orta binning&quot; görüntüleme edinimi ve maruz kalma süresi 30 saniye olarak ayarlanır ayarlayın. Görüntüleri elde etmek için Başlat. Manüel ya da otomatik olarak görüntü alımı her üç dakikada bir tekrar makineye ayarlayın. Satın alınmasından sonra ilk görüntü, ilgi (ROI) bir bölge, karın, göğüs ve baş alanı kapsayacak şekilde çizilir. Bu yatırım getirisi daha sonra kopyalanmış ve &quot;Yaşayan Görüntü ®&quot;, IVIS 100 istasyonu ile birlikte yazılım kullanarak aşağıdaki resimlere yapıştırılır. </li><li> Saniyede fotonlar sinyal yoğunluğu ölçülür. Mark sinyal yoğunluğu doruk değere ulaşmak ve görüntüleme fare tepe süre sonra yaklaşık 5 ila 10 dakika devam. </li><li> Supin pozisyonda görüntüleme edinimi tamamlandığında, fareyi ters çevirin ve yüzükoyun pozisyonda (yedeklemek) yatıyordu. Hayvan görüntüleme yazılımı &quot;Yaşayan Görüntü ®&quot; kullanımı sırt ve baş alanı kapsayacak şekilde çizilmiş ROI 5 ila 10 dakika devam edin. Supin pozisyonda sonra yüzükoyun pozisyonda görüntüleme seçimi keyfidir. Bir birincil ilgi organlara bağlı olarak, yüzükoyun pozisyonda başlatmak için seçebilirsiniz. Başka bir seçenek görüntünün ayrı deneyler ve yüzüstü yatar pozisyonlarda. </li><li> Yüzükoyun pozisyonda görüntüleme satın alma işlemi tamamlandığında, izofluran kapatın ve görüntüleme odasının indüksiyon odasına kurtarmak için fareyi hareket ettirin. Indüksiyon odasına tıbbi sadece hava ve fare genellikle bir dakikadan daha az uyanıyor ile demlenir. </li><li> Post-processing için görüntüleme verileri kaydetmek. </li><li> Ilk Görüntüleme çalışmadan sonra ilave görüntüleme satın almalar Gua Sha sonra birkaç gün boyunca yapılır. Bir örnek program, 12. saat, 24. saat, 36. saat, 48. saat, 72. saat ve 120 inci saat görüntüleme tekrarlandı ama kesin görüntüleme programı esnek olmasıdır . Ek görüntüleme oturumları ise daha uzun bir izlem gereklidir eklenebilir. Görüntüleme önce, saç büyüdü saç kaldırma işlemi tekrarlayın. </li></ol></li><li> Kontrol grubu için, tüm prosedürü tekrarlayın ancak Gua Sha (adım 3) atlayın. Farelerin aynı grup kontrolü ve Gua Sha, kontrol exp için kullanılıreriment en az bir ay daha sonra tercihen Gua sha işlem öncesi yürütülen ya da olmalıdır. </li></ol> Temsilcisi Sonuçlar: Gua Sha yanıt HO-1 in vivo upregülasyonu biyoparlaklık görüntüleri Şekil 1 gösterisi. Şekil 2&#39;de grafik aynı fare Gua Sha ile ilgili tüm vücut optik akı (fotonlar / sn), 120 saatten fazla nicel temporal değişiklik gösterir ... <img src="/files/ftp_upload/1385/figure1tmb.jpg" alt="Şekil 1" border="0" /> Şekil 1 Soldan sırasıyla 18 saat, 36 saat ve 120 saat sonrası Gua Sha sağ ön Gua Sha önce aynı fare görünümünde (yatarak), temsili görüntü,. Gua Sha sonra, bir ilerleme, gastrointestinal sistem, genital sistem, karaciğer, böbrekler (arka görünümünde gösterilir), ve diğerleri bölgeleri kapsayacak birden fazla organlarda önemli bir sinyal yoğunluğu artış gözlemlemiştir. Lütfen <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1385/figure1.jpg">buraya tıklayın</a> Şekil 1&#39;de bir büyük versiyonu için. <img src="/files/ftp_upload/1385/figure2tmb.jpg" alt="Şekil 2" border="0" /> Şekil 2 Şekil 1 aynı fare Gua Sha, 120 saat boyunca izlenen tüm vücut akı nicel değişim (fotonlar / sn) . Lütfen Şekil 2&#39;de büyük halini görmek için <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1385/figure2.jpg">buraya tıklayın</a> .

<ol><li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+potential+therapeutics+based+on+in+vivo+spatiotemporal+transcription+patterns+of+heme+oxygenase-1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Selection of potential therapeutics based on in vivo spatiotemporal transcription patterns of heme oxygenase-1.</a> J Mol Med. 80, 655-6564 (2002).</li>
<li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+in+vivo+functional+analysis+of+transgenes+in+mice+using+whole+body+imaging+of+luciferase+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid in vivo functional analysis of transgenes in mice using whole body imaging of luciferase expression.</a> Transgenic Res. 10, 423-434 (2001).</li>
<li>Contag, C. H., Stevenson, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+patterns+of+heme+oxygenase-1+transcription%5BTitle%5D)+AND+%22J+Perinatol%22%5BJournal%5D)">In vivo patterns of heme oxygenase-1 transcription.</a> J Perinatol. 21, Suppl 1. 119-1124 (2001).</li>
<li>Nielsen, A., Knoblauch, N. T., Dobos, G. J., Michalsen, A., Kaptchuk, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+Gua+Sha+treatment+on+the+microcirculation+of+surface+tissue%3A+a+pilot+study+in+healthy+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Explore+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">The effect of Gua Sha treatment on the microcirculation of surface tissue: a pilot study in healthy subjects.</a> Explore (NY). 3, 456-466 (2007).</li>
<li>Schwickert, M. E., Saha, F. J., Braun, M., Dobos, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gua+Sha+for+migraine+in+inpatient+withdrawal+therapy+of+headache+due+to+medication+overuse%5BTitle%5D)+AND+%22Forsch+Komplementmed%22%5BJournal%5D)">Gua Sha for migraine in inpatient withdrawal therapy of headache due to medication overuse.</a> Forsch Komplementmed. 14, 297-300 (2007).</li>
<li>Tsai, P. S., Lee, P. H., Wang, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demographics%2C+training%2C+and+practice+patterns+of+practitioners+of+folk+medicine+in+Taiwan%3A+a+survey+of+the+Taipei+metropolitan+area%5BTitle%5D)+AND+%22J+Altern+Complement+Med%22%5BJournal%5D)">Demographics, training, and practice patterns of practitioners of folk medicine in Taiwan: a survey of the Taipei metropolitan area.</a> J Altern Complement Med. 14, 1243-1248 (2008).</li>
<li>Nielsen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gua+sha+research+and+the+language+of+integrative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bodyw+Mov+Ther%22%5BJournal%5D)">Gua sha research and the language of integrative medicine.</a> J Bodyw Mov Ther. 13, 63-72 (2009).</li>
<li>Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+gene+expression+in+living+mammals+using+a+bioluminescent+reporter%5BTitle%5D)+AND+%22Photochem+Photobiol%22%5BJournal%5D)">Visualizing gene expression in living mammals using a bioluminescent reporter.</a> Photochem Photobiol. 66, 523-531 (1997).</li>
<li>Cui, K., Xu, X., Zhao, H., Wong, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+study+of+factors+affecting+in+vivo+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Luminescence%22%5BJournal%5D)">A quantitative study of factors affecting in vivo bioluminescence imaging.</a> Luminescence. 23, 292-295 (2008).</li>
<li>Shibahara, S., Yoshida, T., Kikuchi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+increase+of+heme+oxygenase+activity+induced+by+hemin+in+cultured+pig+alveolar+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Mechanism of increase of heme oxygenase activity induced by hemin in cultured pig alveolar macrophages.</a> Arch Biochem Biophys. 197, 607-617 (1979).</li>
<li>Lee, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-inducible+factor-1+mediates+transcriptional+activation+of+the+heme+oxygenase-1+gene+in+response+to+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-inducible factor-1 mediates transcriptional activation of the heme oxygenase-1 gene in response to hypoxia.</a> J Biol Chem. 272, 5375-5381 (1997).</li>
<li>Maines, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heme+oxygenase+system%3A+a+regulator+of+second+messenger+gases%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pharmacol+Toxicol%22%5BJournal%5D)">The heme oxygenase system: a regulator of second messenger gases.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 37, 517-554 (1997).</li>
<li>Wunder, C., Potter, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heme+oxygenase+system%3A+its+role+in+liver+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Drug+Targets+Cardiovasc+Haematol+Disord%22%5BJournal%5D)">The heme oxygenase system: its role in liver inflammation.</a> Curr Drug Targets Cardiovasc Haematol Disord. 3, 199-208 (2003).</li>
<li>Hoekstra, K. A., Godin, D. V., Cheng, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+heme+oxygenase+in+the+blood+vessel+wall+during+atherogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Protective role of heme oxygenase in the blood vessel wall during atherogenesis.</a> Biochem Cell Biol. 82, 351-359 (2004).</li>
<li>Yang, N. C., Lu, L. H., Kao, Y. H., Chau, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1+attenuates+interleukin-1beta-induced+nitric+oxide+synthase+expression+in+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Sci%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1 attenuates interleukin-1beta-induced nitric oxide synthase expression in vascular smooth muscle cells.</a> J Biomed Sci. 11, 799-809 (2004).</li>
<li>Morse, D., Choi, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1%3A+from+bench+to+bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1: from bench to bedside.</a> Am J Respir Crit Care Med. 172, 660-670 (2005).</li>
<li>Ryter, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+functions+of+heme+oxygenase-1+and+carbon+monoxide+in+the+respiratory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Protective functions of heme oxygenase-1 and carbon monoxide in the respiratory system.</a> Antioxid Redox Signal. 9, 2157-2173 (2007).</li>
<li>Wilson, K., Yu, J., Lee, A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+in+vivo+bioluminescence+reporter+gene+imaging+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vitro and in vivo bioluminescence reporter gene imaging of human embryonic stem cells.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Calabrese, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitagenes%2C+dietary+antioxidants+and+neuroprotection+in+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci%22%5BJournal%5D)">Vitagenes, dietary antioxidants and neuroprotection in neurodegenerative diseases.</a> Front Biosci. 14, 376-397 (2009).</li>
<li>Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K., Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+indicators+in+living+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent indicators in living mammals.</a> Nat Med. 4, 245-247 (1998).</li>
</ol>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

HO-1, heme oksijenaz indüklenebilir formu, Transkripsiyon heme, hidrojen peroksit, UV ışını, hipoksi ve fiziksel stresler de dahil olmak üzere birçok faktör tarafından upregüle. HO-1 biyoparlaklık protokolü gibi tüm vücut görüntülemesi çok organlarda sistemik HO-1 ekspresyonu hızlı bir anlık sağlar. Küçük hayvanlar, biyoparlaklık görüntüleme, yüksek hassasiyet in vivo sistemik gen ekspresyon değişiklikler gerçek zamanlı kantitatif uzunlamasına optik değerlendirme, gösterildiği gibi sağlar. Biyoparlaklık moleküler görünt...

<table><tbody><tr><td>Lusiferin</td><td>Caliper Life Sciences</td><td>P/N 122796</td><td>Eski adıyla Xenogen</td></tr><tr><td>IVIS 100</td><td>Caliper Life Sciences</td><td></td><td>Eski adıyla Xenogen</td></tr></tbody></table>

hem oksijenaz-1 ekspresyonunun gua sha usul biyoparlaklık görüntüleme

Bioluminescence Imaging of Heme Oxygenase-1 Upregulation in the Gua Sha Procedure

Gua Sha, deri, derialtı mikrovasküler kan ekstravazasyonu ve morluklar neden kazıma istihdam, geleneksel bir Çin halk tedavi. Bioluminescent optik görüntüleme için protokol HO-1-<em&gt; Lusiferaz</em&gt; Bu yazıda bildirilen transgenik farelerin hızlı bir şekilde sağlar<em&gt; In vivo</emUpregülasyonu&gt; tahlil heme oksijenaz-1 (HO-1) gen ekspresyonu Gua Sha prosedürü yanıt. HO-1, oksidatif strese karşı uzun sitoproteksiyonun sağlamak için bilinmektedir. Biyoparlaklık çıkış tarafından değerlendirilen HO-1 upregülasyonu, Gua Sha tarafından serbest dolaşan hemoglobin ürünleri bir antioksidan yanıt temsil ettiği düşünülmektedir. Gua Sha peteşi (splinter hemoraji) veya subkutan kılcal damarların kan ekstravazasyonu göstergesidir ekimoz (çürükler) gözlendi kadar arkasında veya diğer transgenik fare hedeflenen vücut parçası yağlanan cilt üzerinde pürüzsüz bir kaşık kenarından tekrarlanan vuruş tarafından verildi. Gua Sha sonra, birkaç gün için, birden fazla iç organlarda HO-1 ekspresyonu dinamikleri takip etmek biyoparlaklık görüntüleme oturumları günlük olarak yapılmıştır.

Gua Sha, geleneksel Çin tedavi cilt kazıma, subkutan mikrovasküler kan ekstravazasyon neden olur. Biz, biyoparlaklık görüntüleme protokolü rapor HO-1<em&gt; Lusiferaz</em&gt; Gua Sha heme upregüle göstermek için transgenik farelerin oksijenaz-1 çoklu organlarda (HO-1).

Hem oksijenaz-1 ekspresyonunun Gua Sha Usul Biyoparlaklık Görüntüleme

Gua Sha, deri yüzeyinin kazınması yoluyla deri altı mikrovasküler kan ekstravazasyonu ve ekimozlara neden olan geleneksel bir Çin halk terapisidir. Protokol ...

Merhaba, ben Harvard Tıp Fakültesi'nin eğitim hastanesi olan Brigham Women's Hospital Radyoloji Bölümü Nöroradyoloji biriminden Jeffrey Young. Merhaba, ben Brad Quo. Massachusetts General Hospital'daki Gastrointestinal birimi ve Dahiliye Bölümü'nün yanı sıra Martino Radyoloji Merkezi'ndenim.Bugün, canlı bir fare modelinde heme oksijenaz 1 regülasyonunun biyolüminesans görüntülemesi için bir prosedürü göstereceğiz. Laboratuvarımızda bu tekniği, cilt kazımayı içeren geleneksel bir Çin tıbbı yöntemi olan guasha adlı prosedürle heme oksijenaz 1'in sistemik yukarı regülasyonunu incelemek için kullanıyoruz.Hadi başlayalım. Kıl temizleme işlemine başlamadan önce, Lucifer'in doğru dozunun hesaplanabilmesi için dişi HO one lusiferaz transgenik fareler anestezi uygulanmadan önce tartılır. Farelerin tamamen anestezi altında olduğu, ayak parmağı sıkıştırma refleksinin yokluğuyla doğrulanır.Ardından, hayvanın sırtına bir pamuklu çubuk yardımıyla tüy dökücü losyon uygulayın. Beş ila 10 saniye bekleyin ve ardından temiz bir pamuklu çubukla tüyleri silerek temizleyin. Bundan sonra, bir parça mendili distile suya batırın ve kalan tüyleri temizlemek için bu mendili kullanın. İşlem sırasında, gua tarafından hedeflenen cilt bölgelerini kayganlaştırmak için birkaç kez distile su uygulayın.Plastik bir kaşık kullanarak farenin sırtındaki tüysüz bölgeyi nazikçe ancak sıkı bir şekilde kazıyın. Sırt derisi, deri altı kan sızıntısının bir belirtisi olan kırmızı renge dönene kadar kazımaya devam edin. Bu işlem genellikle iki ila üç dakika içinde tamamlanır.Sıradaki bölümde gösterilecek olan Lucifer solüsyonunu hazırlarken fareleri indüksiyon haznesine yerleştirin. Lucifer'i steril su içerisinde çözerek mililitrede 7,5 miligramlık bir Lucifer solüsyonu hazırlayın. Lucifer dozu, vücut ağırlığının kilogramı başına 65,5 miligramdır.26 gauge iğneli bir şırıngayı, Lucifer solüsyonunun tam dozunu içeren tek bir alikvot ile doldurun. İğneyi farenin abdomenine hızlıca yerleştirin ve tüm dozu tek bir enjeksiyonla uygulayın. IVUS 100 istasyonunun görüntüleme alanına floresan olmayan siyah bir kağıt parçası yerleştirin.Görüntüleme sırasında arka plan gürültüsünü azaltmak için. Görüntülemeye başlamak için fareyi IVUS 100 optik görüntüleme istasyonundaki görüntüleme haznesine aktarın. Fareyi anestezi altında tutmak için görüntüleme haznesine sürekli olarak %1,5 isofloran verilmektedir; fareyi sırtüstü pozisyonda yerleştirin.Karın bölgesi yukarıda olacak şekilde konumlandırın. Görüntüleme ayarını orta ölçekli (medium binning) olarak ve pozlama süresini 30 saniye olarak ayarlayın. Cihazı, görüntüleme işlemini manuel veya otomatik olarak her üç dakikada bir tekrarlayacak şekilde ayarlayın.İlk görüntünün alınmasının ardından görüntüleri almaya başlayın. Karın, göğüs ve baş bölgelerini kapsayacak şekilde bir ilgi alanı veya ROI çizin. Ardından bu ROI'yi kopyalayıp sonraki görüntülere yapıştırın.Living image yazılımı kullanılarak, sinyal yoğunluğu saniyedeki foton cinsinden ölçülür. Sinyal yoğunluğunun tepe değerine ulaşması için geçen süreyi işaretleyin ve fareyi yaklaşık 5 ila 10 dakika boyunca görüntülemeye devam edin. Tepe süresinden sonra, sırtüstü pozisyondaki görüntüleme işlemi tamamlandığında, fareyi çevirerek yüzüstü pozisyona getirin.Bu aşamada geri çekilerek, sırt ve baş bölgelerini kapsayacak şekilde ROI'yi çizin. İlk görüntüyü elde ettikten sonra, hayvanın görüntülemesine beş ila 10 dakika boyunca devam edin. Prone pozisyondaki görüntüleme tamamlandığında, isofloran akışını kapatın.Fareyi görüntüleme odasından indüksiyon odasına aktarın. İyileşme için. İndüksiyon odasına şu anda yalnızca tıbbi hava verilmektedir ve fare bir dakikadan kısa sürede uyanmalıdır.Görüntüleme verilerini son işlem için kaydedin. İlk görüntülemenin ardından, gua prosedürünü takiben birkaç gün boyunca ek görüntülemeler gerçekleştirilir. Görüntüleme öncesinde, farelerin sırtındaki tüy alma prosedürünü tekrarlayın.Kıllar in vivo ortamda yeniden büyüdüyse, guha'ya yanıt olarak HO one'ın yukarı regülasyonu gözlemlenir. Aynı farenin ön görünümü, soldan sağa sırasıyla guha öncesinde ve guha sonrası 18. saat, 36. saat ve 120. saatlerde gösterilmiştir. Görülebileceği üzere, gu sha sonrası çok sayıda organda biyolüminesans sinyal yoğunluğu kademeli olarak artmaktadır.Bu grafik, aynı farenin tüm vücudundan gelen optik akıdaki 120 saatlik kantitatif zamansal değişimi göstermektedir. Guha prosedürüne yanıt olarak, biyolüminesans görüntüleme ile heme oksijenaz bir'in in vivo yukarı regülasyonunun nasıl görüntülendiğini izlediniz. Bu prosedürü gerçekleştirirken, toz ve tüylerden kaynaklanan girişimleri önlemek için görüntülenecek alanın temiz tutulması önemlidir.Görüntüleme sonuçlarında doygunluğun önlenmesi için pozlama süresinin dikkatli bir şekilde kontrol edilmesi gerekir. Hepsi bu kadar.İzlediğiniz için çok teşekkür ederiz, deneylerinizde başarılar dileriz.

bioluminescence-imaging-heme-oxygenase-1-upregulation-gua-sha

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Hipoksi indüklenebilir faktör-1α aktivite Biyoparlaklık görüntüleme, bir meme kanseri beyin metastazı fare modeli intrakranial tümör hipoksi gelişimini izlemek için uygulanır.

Meme Kanseri Beyin metastaz tümör Hipoksi Dynamics in vivo Biyoparlaklık Görüntüleme Fare Modeli

NADPH oksidaz fagositler reaktif oksijen türlerinin ana kaynağı (ROS) 'dir. Çünkü ROS geçici doğası nedeniyle, canlı hayvanlarda ROS seviyelerini ölçmek ve izlemek zordur. Yaşayan farelerde ROS seri ölçümü için bir minimal invaziv bir yöntem tarif edilmiştir.

Farklı Hayvan Modelleri NADPH Oksidaz Aktivitesinin Biyoparlaklık Görüntüleme

Bioluminescent Bakteriyel Görüntüleme<em&gt; In Vivo</em

Source: Hunt, A. M. A., et al. Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model. J. Vis. Exp.(2017).This video demonstrates the procedure for assessing infection clearance and healing progression in a wounded diabetic mouse using bioluminescent and microscopic images.

Bioluminescence Imaging to Track Bacterial Infection and Wound Healing in a Mouse Model

Biz inflamatuvar aşamaları ayırt için invaziv olmayan bir görüntüleme yöntemi açıklanmaktadır. Luminol sistemik teslim nötrofillerinde MPO aktivitesi bağlı akut inflamasyon alanları ortaya koymaktadır. Bunun aksine, lusigenin enjeksiyon makrofajlarda Phox aktivitesi bağlı kronik inflamasyon görselleştirme sağlar.

In vivo Görüntüleme Yöntemi Akut ve Kronik İltihap ayırt

Bu el yazması oksidatif stres xenobiotic kaynaklı incelenmesi için genetik olarak kodlanmış fluorogenic gazetecilere canlı hücre görüntüleme bir uygulamada kullanımını açıklar. Bu deneysel yaklaşım eşsiz kronolojik zamanmekansal çözünürlük, duyarlılık ve özgüllük eksiklikleri toksikolojik oksidatif stres tespiti için kullanılan geleneksel yöntemlerden birçoğu kaçınırken sunmaktadır.

Genetik olarak kodlanmış Fluorogenic sensörleri kullanarak toksikolojik oksidatif stres ilişkin Değerlendirmeler yaklaşımlar görüntüleme

Bu protokol, Çift Bioluminesans görüntüleme ile tümör ilerlemesini ve anjiyogenezi gerçek zamanlı olarak izlemek için tümör taşıyan bir fare modelinin kurulması açıklanmaktadır.

Tümör Ilerlemesi ve anjiyogenezinin çift Bioluminescence görüntülenmesi

Bu protokolün amacı, fare derisinde öldürücü olmayan seviyelerde reaktif oksijen türlerinin (ROS) geçici in vivo üretimini indüklemek ve dokudaki fizyolojik tepkileri daha da teşvik etmektir.

Fare Derisinde Kök Hücre Nişlerinin Uyarılması ve Doku Rejenerasyonu, Değiştirilebilir Protoporfirin IX'a Bağlı Reaktif Oksijen Türlerinin Fotojenerasyonu ile Yerinde

Küçük moleküllü bir substratı oksitleyen bir lusiferaz enzimi tarafından yayılan biyolüminesans ışığı, bir lusiferin, fotosensoriyel proteinleri aktive etmek için kullanılabilir, böylece ışık stimülasyonuna başka bir boyut ekler ve hücrelerde zamansal ve mekansal ölçeklerde çok sayıda ışık aracılı fonksiyonun manipülasyonunu sağlar.

Biyolüminesan Optogenetik 2.0: Fotosensör Proteinleri In Vitro ve In Vivo'yu Aktive Etmek için Biyolüminesanstan Yararlanma

İki foton uyarma floresan mikroskobu (2PEF) ile entegre olan döteryum-oksit (ağır suD2O) problu uyarılmış Raman saçılımı (DO-SRS) mikroskobu kullanılarak amino asitler tarafından düzenlenen hücrelerdeki metabolik aktiviteleri doğrudan görselleştirmek için bir protokol sunuyoruz.

Aromatik Amino Asitler Tarafından Düzenlenen Hücre Metabolizmasının Biyoortogonal Kimyasal Görüntülenmesi

Bu protokol, kronik yorgunluk sendromu teşhisi konmuş insan bireylerde bakır Bian-taşı Gua Sha uygulamak için standartlaştırılmış, adım adım bir prosedürü tanımlar. Bu teknik, bakır alaşımlı kazıyıcının belirli meridyen yollarına (Governor Vessel ve Bladder Meridyen) ve belirlenmiş akupunktur noktalarına uygulanmasını içerir. Prosedürel iş akışını ve veri toplama yöntemlerini göstermek için temsil eden müdahale öncesi ve sonrası gözlemsel veriler dahil edilmiştir.

İnsan Bireylerde Kronik Yorgunluk Sendromu Tedavisi İçin Standartlaştırılmış Bakır Bian-Taş Gua Sha Protokolü

Öğrenin, Gua Sha uygulamasının canlı fare modelinde hem oksijenaz-1 düzenlenmesi üzerindeki etkilerini biyoparlaklık görüntüleme ile nasıl incelendiğini. Bu yöntem, geleneksel Çin tıbbının modern biyomedikal araştırmalardaki terapötik potansiyelini ortaya koyar.

Hem oksijenaz-1 ekspresyonunun Gua Sha Usul Biyoparlaklık Görüntüleme

Daha fazla video keşfet