Name: Dekstran Sülfat Sodyum (DSS) kullanarak murin Kolit Modelleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-19T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: Öğrenin, farelerde akut koliti indüklemek için dextran sülfat sodyum (DSS) kullanımını ve kolon dokusunun histolojik analiz için hazırlanmasını. Bu standart protokol, inflamatuar bağırsak hastalığı araştırmalarında tutarlı sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NIH (1 K08 DK080221-01) ve Vanderbilt kurumsal kalkınma fonları tarafından sağlanmaktadır Finansman.

Bölüm 1: Sakatlık-Onarım Kolit Modeli <ol><li> Temel ağırlık DSS tedavi başlamadan önce her fare için alınmalıdır. </li><li> % 3 (w / v) Dekstran Sülfat Sodyum Tuz su içinde çözüm ve 0.45 mikron selüloz asetat filtre filtre olun. </li><li> Dört gün için% 3 DSS çözümü ile fare kafes içme suyu değiştirin. Fareler, başka herhangi bir su kaynağı (otomatik sulama sistemleri üzerine yerleştirilen yani dışlama ipuçları) erişim olmamalıdır. </li><li> Günde dört, bazı kolon epitel kurtarma sağlayan, ek bir üç gün boyunca su ile DSS çözüm değiştirin. Fareler kolit sistemik sonuçları ölçmek için dört günde değerlendirilmelidir. Kilo kaybı, ağır yaralanma ile ortak. </li><li> 7 gün, tartmak ve farelerin kurban. Fare, izofluran, ya da kurumsal diğer inhalasyon doz aşımı ötenazi olabilir, IACUC onaylı yöntemlerle. </li></ol> Bölüm 2: Otopsi ve Colon Hasat <ol><li> Karın için engelsiz erişim sağlamak için, fare ve güvenli bacaklar ventral tarafta Açığa. Karın% 70 etanol ile tamamen ıslatın. </li><li> Doku forseps ile karın orta hat kavrayın ve çadır cildi yukarı doğru uzatmak. , Karın, böylece karın içeriğini teşhir kesilirken ince uçlu makas kullanın. Insizyon orta hatta xiphoid sürecinin ucu uzatın ve sonra bilateral kot marjlarının aşağı yönü boyunca uzanan. </li><li> Küçük bağırsak, çekum ve kolon tanımlayın. Dikkatlice disseke / çevreleyen mezenter kolon kızdırmak. Distal kolon ve rektum serbest kolon pelvis derin transect. Proksimal kolonda serbest colonocecal marjı kolon transect. Bakım, temizlik gibi perforasyon oluşursa kolon sorunlu olacaktır kolon zarar görmemesi için bu işlem sırasında alınmalıdır. </li><li> 20G besleme iğne ve 10 ml şırınga kullanarak, entübe ve buz gibi soğuk PBS ile kolon eluat dışkı tamamen temizlenene kadar yıkayın. </li><li> Bu noktada, bir diseksiyon mikroskobu ile makroskopik analiz isteniyorsa, iki nokta üst üste "sucuk" olarak sabit olabilir. Histolojik analiz sadece 4 "Akut Kolit Histolojik Analizi İsviçre Rolls yapma" Parça devam etmek isteniyorsa. </li></ol> Bölüm 3: Tüm Colon Makroskopik Analizi "Sosis" olarak İşleme <ol><li> Kolon doğru yönde korumak için önemlidir, bu nedenle, operatöre yakın kolon distal ucundan tutun. Emilmeyen dikiş iki adet (SP116 1.5 metrik örgülü ipek), uzunluğu yaklaşık 1 inç, diğer 2 inç kesin. </li><li> Hala iyi bir mühür korurken, mümkün olduğunca marjı yakın olarak distal ucu kapalı bağlamak için 2 inç dikiş parça kullanın. </li><li> 5 ml% 10 içeren bir 20G besleme iğne formalin fosfat tamponlu kolon proksimal ucunu yerleştirin. Gevşek beslenme iğne ampul hemen proksimal dikiş kalan parçasını bağlar. Kolon beslenme iğne ampul sıkıca kavrayın ve kolon genişletilmiş kadar formalin demlenmeye. Böylece bir "sucuk" olarak aşılanmış, genişletilmiş kolon bırakarak, besleme iğnesi geri dikiş düğüm sıkın. </li><li> % 10 formalin fosfat tamponlu ve tüp içinde kolon 15 ml konik tüp doldurun. 24 saat saptamak için. </li><li> Formalin dökün ve ek bir 24 saat için% 70 EtOH ile değiştirin. Kolon (oda sıcaklığında 70% EtOH süresiz olarak saklanabilir.) </li><li> Konik tüp kolon çıkarın ve iki nokta üst üste zarar vermemek için dikkatli olmak, bir bistüri ile her iki ucundaki dizeleri kesmek. Distal ucu dizenin en uzun parçası olduğunu unutmayın. Distal kolon proksimal sonuna kadar uzun bir sayfa oluşturur, böylece uzunlamasına kesilir. Bu noktada, iki nokta üst üste bir diseksiyon mikroskop altında görülebilir. </li></ol> Bölüm 4: Akut Kolit Histolojik Analizi İsviçre Rolls yapma <ol><li> Kolon doğru yönde korumak için önemlidir, bu nedenle, operatöre yakın kolon distal ucundan tutun. </li><li> Kolon uzunluğunu ölçün. Bu metrik yaralanma şiddeti bir başka göstergesidir. Kolit ödemi artırır ve genel kolon süresini kısaltır. </li><li> Ince uçlu makas kullanarak, distal kolon proksimal ucuna uzunlamasına insizyon. Ince uçlu forseps, böylece düz bir levha olarak kolon kesi ya da kenarını kavramak ve distalde-&gt; proksimalde şekilde çalışma yanlamasına açık kullanın. </li><li> Rolling kolon forseps bir çift ve iki el tekniği gerektirir. Forseps ile distal margin iki kenarına tutun. Sırayla proksimal marjı geçmeden forseps dönen ve serbest kolon rulo geçin. Bu nedenle, üçüncü bir boyut ya da "İsviçre Roll" ile bir sarmal oluşturuyor.Haddelenmiş formunu korumak için, forseps ile sıkıca rulo kavramak ve 27G1 / 2 iğne ile transect. Rulo çıkar iğne bükerek iğne sabitleyin. </li><li> % 10 bir kavanoza bir şekilde etiketlenmiş doku kaset ve yer rulo yerleştirin doku fiksasyonu sağlamak için oda sıcaklığında 24 saat formalin fosfat tamponlu. </li><li> Formalin dökün ve ek bir 24 saat için% 70 EtOH ile değiştirin. Kolon (oda sıcaklığında 70% EtOH süresiz olarak saklanabilir.) </li><li> Örnek sabit olmuştur sonra, parafine gömülü kesitli ve histolojik analiz için kızaklar üzerinde monte edilebilir. </li></ol> Bölüm 5: Temsilci Sonuçlar DSS akut kolit için modeli, araştırmacı, elde, düzeltmek ve bu modelleri akut kolit kolon analiz sağlar. (Şekil 1) düzgün İsviçre rulo rulo halinde kesilir ve monte edildiğinde, tüm kolon temsili bir dilim formu gerekir. Monte rulo distal (iç) ucundan proksimal (dış) uç (Şekil 2), kolon hasarın boyutunu belirlemek için H &amp; E ile boyanmış olabilir. İmmünohistokimya İsviçre roll inflamatuvar infiltrat belirlemek ve ölçmek için de yapılabilir. Sosis yöntemi doğru yapıldıysa, sabit kolon genişlemiş olacak ve tüm mukoza yüzeyi kolaylıkla diseksiyon mikroskobu altında (Şekil 3) manipüle ve izlenebilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig1.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig1tmb.jpg" alt="Şekil 1" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"></a> Şekil 1 düzgün bir şekilde yürütülen "İsviçre roll". (A) kolon, distal proksimal sonuna kadar haddelenmiş bir iğne ile transeksiyon ve iğne sonuna bükme tarafından güvenli. Daha sonra, sabitlenmesi için bir doku kaset yerleştirilir. (B) H &amp; E DSS (d = distal kolon p = proksimal kolon) ile tedavi edilen bir fare kolon yapılan bir İsviçre rulo 5 mikron bölümünde boyandı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig2.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig2tmb.jpg" alt="Şekil 2" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"></a> Şekil 2 DSS tedavi iki nokta üst üste, akut kolit belirtileri gösteriyor . Inflamasyon ve crypt zarar bir su tedavi kontrolü göre DSS ile tedavi edilen kolon açıktır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig3.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig3tmb.jpg" alt="Şekil 3" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"></a> Şekil 3 "sucuk" bir örnek. Sosis, formalin ile aşılanmış ve tamamen genişledi. Hafif bir açı kolon doğal eğrilik mevcut ikincil olacaktır. Ambalajı açılmış salam düz durmalıdır.

<ol><li>Okayasu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+in+the+induction+of+reliable+experimental+acute+and+chronic+ulcerative+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice.</a> Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).</li>
<li>Martinez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+Mtgr1+sensitizes+the+colonic+epithelium+to+dextran+sodium+sulfate-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic epithelium to dextran sodium sulfate-induced colitis.</a> Gastroenterology. 131 (2), 579-588 (2006).</li>
<li>Moolenbeek, C., Ruitenberg, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%22Swiss+roll%22%3A+a+simple+technique+for+histological+studies+of+the+rodent+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">The "Swiss roll": a simple technique for histological studies of the rodent intestine.</a> Lab Anim. 15 (1), 57-59 (1981).</li>
<li>Mahler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, G544-551 (1998).</li>
<li>Aharoni, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulatory+therapeutic+effect+of+glatiramer+acetate+on+several+murine+models+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Immunomodulatory therapeutic effect of glatiramer acetate on several murine models of inflammatory bowel disease.</a> J Pharmacol Exp Ther. 318 (1), 68-78 (2006).</li>
<li>Hahm, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+transforming+growth+factor+beta+signalling+in+the+intestine+contributes+to+tissue+injury+in+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Loss of transforming growth factor beta signalling in the intestine contributes to tissue injury in inflammatory bowel disease.</a> Gut. 49 (2), 190-198 (2001).</li>
<li>Green, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenergic+modulation+of+Escherichia+coli+O157%3AH7+adherence+to+the+colonic+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Adrenergic modulation of Escherichia coli O157:H7 adherence to the colonic mucosa.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 287 (6), G1238-1246 (2004).</li>
<li>Dieleman, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+experimental+colitis+induced+by+dextran+sulphate+sodium+%28DSS%29+is+characterized+by+Th1+and+Th2+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines.</a> Clin Exp Immunol. 114 (3), 385-391 (1998).</li>
</ol>

Vanderbilt IACUC tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak hayvanlar üzerinde deneyler yapıldı.

Bu protokol, akut yaralanma, yaralanma-onarım veya kronik kolon yaralanma süreçlerini modellemek için modifiye edilebilir. Akut Sakatlık Modifikasyonu: DSS tedavi reklam lib hemen kurban takiben 4-6 gün boyunca Sakatlık-Onarım Modifikasyon: 4-6 gün, iyileşme süresi 3-4 gün ve fedakarlık (, yukarıda protokol açıklandığı gibi) DSS tedavi ile yaralanmalara neden olabilir. Kronik Kolit Modi...

<table><tbody><tr><td>Sodyum Dekstran Sülfat Tuzu</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>9011-18-1</td><td>mol ağırlığı 40,000-50,000</td></tr><tr><td>%10 Tamponlu Formalin Fosfat</td><td>Fisher Scientific</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran, USP</td><td>Phoenix Pharmaceuticals, Inc.</td><td>NDC 57319-474-06</td><td></td></tr><tr><td>TISSUE PATH Macrosette Kasetleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>15182706</td><td></td></tr><tr><td>BD 10 ml Şırınga</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>Etil Alkol</td><td>Pharmco-AAPER</td><td>E190</td><td>Distile su ile %70'e seyreltin</td></tr><tr><td>20G Düz Besleme İğnesi</td><td>VWR international</td><td>20068-612</td><td></td></tr><tr><td>27G1/2 PrecisionGlide İğne</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Sivri/Küt Uçlu Diseksiyon Makası</td><td>VWR international</td><td>82027-588</td><td></td></tr><tr><td>Waugh Penseti</td><td>VWR international</td><td>82027-428</td><td></td></tr><tr><td>Absorbe Olmayan Sütür</td><td>LOOK Surgical</td><td>SP116</td><td></td></tr><tr><td>Whatman Blot Kağıdı</td><td>VWR international</td><td>28298-020</td><td>İhtiyaca göre kesin</td></tr><tr><td>Nalgene Sürfaktan İçermeyen Selüloz Asetat (SFCA) Filtre</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-06731-2</td><td></td></tr><tr><td>Karbon fiber kompozit dijital kumpas</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-007-958</td><td></td></tr></tbody></table>

dekstran sülfat sodyum (dss) kullanarak murin kolit modelleme

Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS)

- Crohn Kolit en önemlisi Ülseratif Kolit ve Crohn Hastalığı kolon varyantı; Kolit, viral ya da bakteriyel enfeksiyonlar, iskemik hakaret veya otoimmün hastalıklar ortaya çıkabilir. Akut kolit, karın ağrısı ve şişme, malabsorpsiyon, ishal, hematokezya ve dışkıda mukus ile ortaya çıkabilir. Biz çevre, genetik, ve epitelyal bariyer disfonksiyonu kolit İnflamatuar Barsak Hastalıkları ve hayvan modellerinde, bu hastalık anlayışımızı ilerleyen temel olmuştur arasındaki karmaşık etkileşimleri anlamaya başlıyor. Bir popüler model, birkaç gün süren epitelyal hasar ve kolon sağlam bir inflamatuar yanıt ile sonuçlanan farelerin içme suyu, düşük molekül ağırlıklı Dextran&#39;ın Sodyum Sülfat (DSS) ile tamamlayan<sup&gt; 1</supBu yaklaşımın&gt; Çeşitlemeler akut yaralanma, akut yaralanma, tamir ve kurtarma modelleme kronik iltihabi hastalıklar ile serpiştirilmiş DSS tekrarlayan döngüleri modeli için kullanılabilir<sup&gt; 2</sup&gt;. Içme suyu% 3 DSS tek bir dört günlük tedaviden sonra, fare, kilo kaybı, kanlı dışkı ve ishal de dahil olmak üzere akut kolit belirtileri gösteriyor. Fareler, tedavi dersin bitiminde ötenazi nekropsi disseke iki nokta üst üste işlenir ve &quot;İsviçre&quot; yuvarlandı.<sup&gt; 3</sup&gt; Tüm kolon mikroskopik analizi izin vermek veya makroskopik analiz izin &quot;sucuk&quot; olarak formalin ile aşılanmış. Doku sonra kesitli parafin, gömülü ve histolojik inceleme için boyanmış.

Içme suyu uygulanan dekstran sülfat sodyum (DSS), akut kolit kurulmuş bir fare inflamatuar yaralanma modeli. Bu protokol, DSS tedavi ve dokuların hazırlanması için yöntemi özetlemektedir.

Dekstran Sülfat Sodyum (DSS) kullanarak murin Kolit Modelleme

Kolit; viral veya bakteriyel enfeksiyonlar, iskemik hasar veya otoimmün bozukluklar sonucunda ortaya çıkabilir; bunlar arasında en dikkat çekicileri Ülseratif Kolit ve ...'nin kolonik varyantıdır.

Farelere dört gün boyunca libido içinde %3 DSS verilir. Ağırlık, ishal varlığı ve dışkıda kan günlük olarak kaydedilirken, dördüncü günden sonra TSS otoklavlanmış su ile değiştirilir. Suyla geçen üç günün ardından fareler sakrifiye edilir ve kolonları çıkarılır.Kolonlar ölçülür ve tartılır. Ardından kolonlar, ya İsviçre rulosu (Swiss roll) ya da sosis şeklinde düzenlenir ve mikroskop altında incelenir. Bu video makale, bir kolit fare modelinde kolonların hasat edilmesini ve işlenmesini gösterecektir.Bu prosedür, Vanderbilt Üniversitesi Kanser Biyolojisi Bölümü'nden Dr. Christopher Williams'ın laboratuvarında, dekstran sülfat sodyum tedavisine başlamadan önce koliti incelemek için kullanılır. Deney süresince temel ağırlıklar kaydedilir. Fareler tartıldıktan sonra günlük ağırlıklar alınır; su içerisinde hacimce %3 ağırlıkta bir dekstran sülfat sodyum tuzu çözeltisi veya DSS hazırlayın.Bu modelin etkili olabilmesi için DSS'nin düşük moleküler ağırlıkta olması gerekir; her fare kafesi için bir su şişesini dolduracak kadar DSS çözeltisi hazırlayın ve çözeltiyi 0,45 mikrometre selüloz asetat filtre ile filtreleyin. Fare kafesindeki içme suyu şişesini, %3 DSS çözeltisi içeren bir şişe ile değiştirin. Kurumunuz otomatik bir sulama sistemi kullanıyorsa, farelerin başka herhangi bir su kaynağına erişemediğinden emin olmak için sulama uçlarına dışlama uçları takın.Dört gün sonra, kolitin sistemik sonuçlarını belirlemek için fareler tekrar tartılır. Ağır yaralanmalarda kilo kaybı yaygındır, ancak aynı gün içinde birkaç gün daha belirginleşmeyebilir. Dördüncü günde, kolon epitelyal dokusunun bir miktar iyileşmesini sağlamak amacıyla DSS solüsyonu üç gün boyunca su ile değiştirilir.Üç gün sonra, yedinci günde, fareler tekrar tartılır. Ardından kolon, bir sonraki bölümde gösterildiği şekilde ötanazisi yapılmış farelerden toplanabilir. Kolonu toplamak için, abdomen bölgesine engelsiz erişim sağlamak amacıyla ötanazisi yapılmış farenin ventral tarafını açığa çıkarın.Karın bölgesini %70 etanol ile tamamen ıslatın. Karın orta hattını doku pensetiyle kavrayın ve kaldırın. Böylece ince uçlu makas kullanarak cildi gerdirin.Karın içeriğini açığa çıkarmak için abdomeni kesin. İnsizyonu orta hatta ksifoid çıkıntının ucuna kadar uzatın ve ardından her iki tarafta kostal kenarların alt kısmı boyunca uzatın. İnce bağırsak, sekum ve kolonu tanımlayın.Kolonu çevreleyen mezenterden dikkatlice ayırın veya serbest bırakın. Ardından, rektumdan distal kolonu serbest bırakmak için pelvisin derinliğinde kolonu kesin.Herhangi bir arter veya venin kesilmemesine dikkat edilmelidir. Ayrıca, kolonun kolayca yırtılabileceği unutulmamalıdır. Bu nedenle, kolonu mezenterden nazikçe ayırın.Proksimal kolonu serbest bırakmak için kolonu Colona sequel sınırından kesin. Kolonu çıkarın ve 20 gauge besleme iğnesi ile 10 mililitrelik şırınga kullanarak, EIT dışkıdan tamamen temizlenene kadar kolonu buz gibi soğuk PBS ile entübe edip yıkayın. Kolonun distal ucunu kendinize en yakın konumda tutarak doğru yönlendirmeyi korumak önemlidir.İşleme, dijital bir kumpas kullanarak kolon uzunluğunu ölçerek başlayın. Kolon uzunluğu, hasarın şiddetinin bir başka göstergesidir. Kolit, ödemi artırır ve toplam kolon uzunluğunu kısaltır.Bu aşamada, hasat edilen kolonlar ya makroskobik analiz için sosis şeklinde işlenebilir ya da akut kolitin histolojik analizi için İsviçre rulosu (Swiss roll) haline getirilebilir. Kolonun sosis şeklinde işlenmesi için bu teknikleri sonraki bölümlerde göstereceğiz. Tüm kolonun makroskobik analizi için kolonun doğru yöneliminin korunması önemlidir. Bu nedenle, kolonun distal ucunu kendinize en yakın konumda tutun.Biri yaklaşık bir inç, diğeri ise iki inç uzunluğunda iki parça emilmeyen sütür kesin. İki inçlik sütür parçasını, iyi bir sızdırmazlık sağlarken kolonun distal ucunu marjine mümkün olduğunca yakın şekilde bağlamak için kullanın. Ardından, kolonun proksimal ucuna beş mililitre %10 tamponlu formalin fosfat içeren 20 gauge bir besleme iğnesi yerleştirin.Besleme iğnesinin baş kısmının hemen proksimaline kalan sütür parçasını gevşekçe bağlayın. Şimdi kolonu, besleme iğnesinin baş kısmından sıkıca tutun ve kolonun genişlemesini sağlayacak şekilde yeterli miktarda formalin infüze edin. Besleme iğnesini geri çekerken sütürdeki düğümü sıkın; böylece infüze edilmiş genişlemiş kolon içeride kalacaktır.Sosis şeklinde, 15 mililitrelik konik bir tüpü %10 tamponlu formalin ve fosfat ile doldurun ve tüpü etiketleyin. Kolonu tüpe yerleştirin ve 24 saat boyunca sabitleyin. 24 saat sonra, formalini uygun bir atık kabına boşaltın ve 24 saat daha bekletmek üzere %70 etanol ile değiştirin.Kolonlar, oda sıcaklığında %70 etanol içinde süresiz olarak saklanabilir. Kolonu analiz etmeye hazır olduğunuzda, konik tüpten çıkarın. Kolona zarar vermemeye dikkat ederek, her iki uçtaki bağları bir skalpel ile kesin.Distal ucun en uzun ip parçasına sahip olduğunu unutmayın. Kolonu, uzun bir tabaka oluşturacak şekilde distal uçtan proksimal uca doğru boyuna kesin. Kolon artık bir diseksiyon mikroskobu altında incelenebilir.Kolonu boylamasına kesin ve düz bir tabaka halinde yayın. Kolonun rulo yapılması için iki çift pens ve iki elli bir teknik gereklidir. Distal kolon kenarının her iki lateral kenarını penslerle kavrayın; pensleri döndürüp bırakarak sırasıyla proksimal kenara doğru ilerleyin ve böylece üçüncü boyuta sahip bir spiral veya "Swiss roll" oluşturun.Kolon watman kağıdına yapışmışsa, formu korumak için kağıdı ve kolonu az miktarda PBS ile ıslatın. Ruloyu pensle sıkıca kavrayın ve 27,5 gauge bir iğne ile enine kesin. İğneyi rulodan çıkarken bükerek ruloyu sabitleyin.Şimdi, rulo şeklinde hazırlanan örneği etiketli bir doku kasetine yerleştirin ve kaseti %10 tamponlu formalin fosfat içeren bir kavanoza koyun. Dokunun fikse olması için oda sıcaklığında 24 saat bekletin. 24 saat sonra formalini boşaltın ve yerine dört saat daha bekletmek üzere %70 etanol ekleyin.Kolonlar, oda sıcaklığında %70 etanol içerisinde süresiz olarak saklanabilir. Bu model, araştırmacının kolonları elde etmesine, tespit etmesine ve analiz etmesine olanak tanıyarak kolitin şiddetinin analiz edilmesini sağlar. Tüm kolonun makroskobik analizi için kolon, formalinle infüze edilmiş ve tamamen genişletilmiş bir sosis şeklinde işlenebilir.Açılmış sosis düz bir şekilde yatırılmalıdır. Sosis yöntemi doğru şekilde uygulandıysa, fikse edilmiş kolon genişlemiş olacak ve tüm mukozal yüzey diseksiyon mikroskobu altında kolayca manipüle edilip görüntülenebilecektir. Histolojik analiz için kolon, Swiss roll (İsviçre rulosu) şeklinde işlenebilir.Rulo bir iğne ile sabitlenir ve fiksasyon için bir doku kasetine yerleştirilir. Rulo doğru şekilde sarıldıysa, kesilip monte edildiğinde tüm kolonun temsili bir kesitini oluşturmalıdır; kolon hasarının boyutunu belirlemek amacıyla Swiss roll kesitleri hematin ve ASIN ile boyanabilir. Lam üzerindeki rulonun merkezinde kolonun distal ucunun yer aldığı unutulmamalıdır.Bu örnekte, su ile işlem görmüş kontrole kıyasla DSS ile işlem görmüş kolonda inflamasyon ve kript hasarı belirgindir. Akut kolit murine modelinden kolonların nasıl toplandığını ve işlendiğini göstermiş olduk. Bu prosedürü gerçekleştirirken, sakrifikasyon öncesinde iyi organize olmanız önemlidir.Örneğin fare çalışmaları için, her fareye ait tüm tüpler ve kasetler etiketlenmiş; tüm araçlar ve reaktifler hazır bulundurulmalıdır. Ek olarak, fare ağırlığı ve kolon uzunluğuna dair ayrıntılı kayıtlar tutun. Son olarak, işlem süreci için yeterli zaman ayırdığınızdan emin olun.Bu teknik için işlem süresi, deneyimsiz bir kişi için fare başına genellikle 15 dakika, daha deneyimli bir kişi için ise altı ila sekiz dakikadır.

murine-colitis-modeling-using-dextran-sulfate-sodium-dss

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Deneysel modeller inflamatuvar barsak hastalığı patogenezi ile ilişkili karmaşık doğal ve adaptif immün yanıtları incelemek için izin verdiler. Histolojik skorlama, pro-inflamatuar sitokinler ve miyeloperoksidaz aktivitesi ölçümü kullanarak, inflamatuvar barsak hastalığı görülen bu yanıtlar değerlendirmeye başlayabilirsiniz.

İBH DSS-kaynaklı Modeli Bağırsak Enflamasyon incelenmesi

Biz hızla pro-inflamatuar ajan dekstran sülfat sodyum (DSS) üç kür takip ve sürekli insan kolit görülenler ile morfolojik ve moleküler benzerlikleri olan farelerde kolon tümörleri oluşturur genotoksik ajan azoxymethane (AOM) hangi yönetiminde bir protokol göstermek kanserle ilişkili.

Azoxymethane (AOM) ve Dekstran Sülfat Sodyum (DSS) ile Modelleme Kolit-İlişkili Kanser

Bu video, inflamatuar bir bağırsak hastalığı olan kimyasal kaynaklı bir kolit murin modeli oluşturmak için bir teknik göstermektedir. Farenin yeterli bir süre boyunca bir dekstran sodyum sülfat (DSS) çözeltisi tüketmesine izin verilir. Tüketildikten sonra, DSS kolondaki mukus ve epitel tabakası bariyerine zarar vererek, bağırsak mikroplarının alttaki dokuya girmesine izin verir - burada yerleşik bağışıklık hücreleri tarafından abartılı bir bağışıklık tepkisine aracılık etmek için algılanırlar...

Dekstran Sülfat Sodyum Kaynaklı Kolitin Murin Modelini Oluşturmak İçin Bir Teknik

Bu video, inflamatuar bir bağırsak hastalığı olan DSS'nin neden olduğu kolitin bir fare modelinde kolon hasarını değerlendirmek için hematoksilen ve eozin (H&amp;E) boyama yöntemini göstermektedir. Kolonu DSS ile tedavi edilen bir fareden izole ettikten ve dokunun bölümlerini elde ettikten sonra, bölümlerin H&amp;E boyaması, inflamasyonun aracılı doku hasarını tanımlamaya yardımcı olur.

DSS'nin Neden Olduğu Kolitte Kolon Hasarını Değerlendirmek için Hematoksilen ve Eozin Boyama

DNBS / TNBS indüksiyonlu kolit bir alternatif ve iltihabik barsak hastalığı patobiyolojisini incelemek için pahalı olmayan yöntemi sunmaktadır. Bu yazıda tartışılan protokolü farelerde ve sıçanlarda kolit başlatmak için DNBS başarılı uygulama özetliyor ve bir iyice konak-aracılı bağırsak yanıtları çalışma sağlar.

DNBS / TNBS kolit Modelleri: Koliti içine Trendleri ve Diyet Yağ Etkileri sağlanması

Fare distal kolostomi insan saptırma kolit, ağırlıklı olarak Lenfositik kolit dışkı akışından hariç iki nokta üst üste segmentinde için bir fare modeli sağlar.

Fare Distal kolostomi, C57BL/6 farelerde saptırma kolit roman modeli

Belirli fare doku işleme için fare histopatolojik analiz insan numuneler ile karşılaştırıldığında kalitesini azaltır. Burada, robot sistemleri işleme ve insan örnekleri katıştırma için rutin olarak kullanılan fizibilite göstermek için fare iltihaplı ve uninflamed kolon dokularında histopatolojik incelenmesi gerçekleştirmek için bir iletişim kuralı mevcut.

Robot sistemleri kullanarak işlemek ve histolojik analizler için kolon fare örnekleri katıştır

Sunulan protokol, inflamatuar barsak hastalığı ile ilişkili kolorektal kanserin indüksiyonu takip eden bir farede apandisin (kaekal yama) kolay bir cerrahi olarak çıkarılmasını açıklar. Bu murine apendektomi modeli insan gastrointestinal hastalığın patogenezinde apandisin biyolojik rolünün araştırılmasını sağlar.

Kaekal Patch Kesin Lokalizasyonu ile Kronik Kolit İlişkili Kolorektal Kanser Murine Apendektomi Modeli

Ücretsiz bilgisayar destekli bir sistem kullanılarak bağırsak iltihabının sistematik olarak puanlanması, ülser ve enflamatuar değişikliklerin varlığı ile karakterize kolit modellerindeki histopatolojik değişiklikleri nicel olarak karşılaştırmak için güçlü bir araçtır. Histolojik kolit skoru değerlendirmesi klinik gözlemleri güçlendirir ve veri yorumlamayı kolaylaştırır.

Murine Dextran Sodyum Sülfat Kaynaklı Kolit Modelinde Bağırsak İltihabı İçin Sistematik Puanlama Analizi

Charles Taylor ve John Marshall nüfus değiştirme stratejisinin etkinliğini değerlendirmek için matematiksel modelleme yardımcı açıklar. Insight hesaplama modelleri hakkında bilgi sivrisinek nüfus dinamikleri ve A. gambiae alttür ile transposable elementlerin yayılmasını sağlayabilir nasıl içine verilir. Vahşi genetiği değiştirilmiş sivrisinekler serbest etik hususlar ele alınmıştır.

Matematiksel Modelleme Nüfus Yedek Strateji Etkinliği tahmin

Öğrenin, farelerde akut koliti indüklemek için dextran sülfat sodyum (DSS) kullanımını ve kolon dokusunun histolojik analiz için hazırlanmasını. Bu standart protokol, inflamatuar bağırsak hastalığı araştırmalarında tutarlı sonuçlar sağlar.

Dekstran Sülfat Sodyum (DSS) kullanarak murin Kolit Modelleme

Daha fazla video keşfet