Name: Mikro desenli Yüzeyler, protein-protein etkileşimleri-vivo Algılama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-03-19T17:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Öğrenin mikro desenleme tekniğiyle canlı hücrelerde protein-protein etkileşimlerini nicel olarak analiz etmeyi. Bu yöntem zayıf etkileşimleri tespit ederek yüksek verimli tarama olanağı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz GPI-GFP, hCD71 GFP inşa ve Daniel Legler, Konstanz Üniversitesi, İsviçre, onu türlü yardım, Katharina Strub, İsviçre&#39;nin Cenevre Üniversitesi Quentina Beatty, Linz, Avusturya Üniversitesi, teşekkür etmek istiyorum -DAF inşa. Avusturya Federal Bilim ve Araştırma Bakanlığı GEN-AU projesi; Bu çalışma, Avusturya Bilim Fonu&#39;nun (proje Y250-B03 FWF) tarafından desteklenmiştir.

Microcontact Baskı: <ol><li> Bir neşter kullanılarak PDMS damga micropattern alan Kes </li><li> Etanol (% 100) ve distile su ile püskürtülerek micropattern içeren alan yıkayın. </li><li> PDMS damga azot veya argon gazı ile kurulayın. </li><li> Pipet 50 ul BSA Cy5 çalışma solüsyonu (0.67 mg / ml) tüm micropattern alanında çözüm ile kaplıdır, böylece PDMS damga üzerine. Oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. </li><li> Fosfat ile kızarma micropattern alanında yıkayın Tamponlu Salin (PBS) ve distile su. </li><li> PDMS azot veya argon gazı ile kurulayın. </li><li> Ortasında bir epoksi kaplı lamel üzerine kendi ağırlığı altında PDMS damga yerleştirin ve petri oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. </li><li> Lamel arka PDMS damga pozisyon Etiket ve bir forseps ile slayt damga şerit. </li><li> Çubuk lamel microcontact baskılı alan üzerinde Güvenli Seal Hibridizasyon odasına. Etiket alanın merkezinde lokalize etmek yardımcı olur. </li><li> Pipet 60 ul streptavidin tepki odasına çözüm (50 mg / ml) ve örnek oda sıcaklığında 60 dakika inkübe edin. </li><li> Örnek odasının içine tampon bir bağlantı noktası ekleyerek ve bir pompa ile ikinci bağlantı noktasına aynı anda çıkarmadan 1 ml PBS ile yıkayın. </li><li> Pipet 60 ul biotinlenmiş antikor işi çözüm (10 mg / ml% 0.1 Tween 20 ile desteklenmiş PBS "PBST") reaksiyon odası ve oda sıcaklığında 60 dakika inkübe içine. </li><li> Örnek, odanın içine tampon bir bağlantı noktası ekleyerek ve bir pompa ile ikinci limanda tekrar kaldırarak 1 ml PBST ve daha sonra 1 ml PBS ile yıkayın. </li><li> Micropatterned yüzeyleri PBS içinde hücre ekimi için hazır olana kadar oda sıcaklığında karanlıkta saklayın. </li></ol> Micropatterned yüzeye hücrelerin inkübasyonu: <ol><li> % 50, 3 cm doku kültürü plaka izdiham yapışık hücrelerin büyümesine. </li><li> Ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) solüsyonu ile ilgi yem ve av proteinleri ifade hücreleri ayırın ve 1,000 rpm'de 5 dakika santrifüj. </li><li> Süpernatantı atın ve hücre pelletini göre büyüme ortamında çözülür. </li><li> 1000 rpm'de 5 dakika santrifüjleyin. </li><li> Süpernatantı atın ve uygun büyüme ortamında hücre pelletini çözülür. </li><li> Exchange hücre süspansiyonu 60 ul micropatterned lamel reaksiyon odasından PBS. </li><li> Distile su ile ıslatma ve steril bir ped, kuru çalışmasını örnek önlemek için petri içine koyarak nemlendirilmiş bir oda oluşturun. </li><li> 37-gece boyunca hücreler inkübe ° C micropatterned yüzeyler% 5 CO 2 atmosfer. </li><li> Hücrelerin mikroskop analiz etmeden önce, Ca 2 de dahil olmak üzere Hank tamponlu tuz çözeltisi orta alışverişinde + ve Mg 2 +. </li></ol> Mikroskopi: <ol><li> Lamel uygun bir montaj yerleştirilir ve hücre morfolojisi, beyaz ışık altında kontrol edilir. </li><li> BSA Cy5, desen kalitesi, 647 nm dalga boyunda eksitasyon tarafından kontrol edilir. </li><li> Toplam İç Yansıma (TIR) ​​uyarma altında 488 veya 514 nm'de, floresan av proteininin (GFP veya YFP) Micropatterns kaydedilir. </li></ol> Temsilcisi sonuçları: Hedef proteinlere micropatterned bir yüzey üzerinde yetiştirilen hücreler arasındaki etkileşimi varsa, av yem yeniden dağıtılması takip edecektir. Micropattern av proteinin floresan etiketi ile görüntülendi olabilir. Önemlisi kontrast elde edilen doğrudan bir etkileşim gücü ölçümü (bkz. Şekil 1) sağlar. Bu nedenle iki proteinin etkileşimi basit bir değerlendirme mümkün olur daha ölçülen birincil veri işleme gerek kalmadan. <img src="/files/ftp_upload/1969/1969fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 farklı etkileşim güçlü canlı hücre plazma membranı yem yeniden düzenlenmesi. CD59-antikor microbiochips TIR T24 hücrelerinin CD71-antikor (a) CD71-GFP ile transfekte görüntüleri, (b) CD4 ve CD4-antikor sitozolik YFP ve (c) GPI-GFP-DAF gösterilmiştir. Veriler için karakteristik olan güçlü (a), (b) veya Zayıf etkileşim (c). (A), (Weghuber ve ark. Baskıda), (b) (Schwarzenbacher ve ark, 2008) yeniden .

<ol><li>Brameshuber, M., Schwarzenbacher, M., Kaltenbrunner, M., Hesch, C., Paster, W., Weghuber, J., Heise, B., Sonnleitner, A., Stockinger, H., Schuetz, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reply+to+%22Uncoupling+diffusion+and+binding+in+FRAP+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Reply to "Uncoupling diffusion and binding in FRAP experiments.</a> Nat. Methods. 6, 183-184 (2009).</li>
<li>Kim, P. W., Sun, Z. J., Blacklow, S. C., Wagner, G., Eck, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Zinc+Clasp+Structure+Tethers+Lck+to+T+Cell+Coreceptors+CD4+and+CD8%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A Zinc Clasp Structure Tethers Lck to T Cell Coreceptors CD4 and CD8.</a> Science. 301, 1725-1728 (2003).</li>
<li>Ramm, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-based+screening%3A+a+technology+in+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Image-based screening: a technology in transition.</a> Curr. Opin. Biotechnol. 16, 41-48 (2005).</li>
<li>Schwarzenbacher, M., Kaltenbrunner, M., Brameshuber, M., Hesch, C., Paster, W., Weghuber, J., Heise, B., Sonnleitner, A., Stockinger, H., Schutz, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropatterning+for+quantitative+analysis+of+protein-protein+interactions+in+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Micropatterning for quantitative analysis of protein-protein interactions in living cells.</a> Nat. Methods. 5, 1053-1060 (2008).</li>
<li>Weghuber, J., Brameshuber, M., Sunzenauer, S., Lehner, M., Paar, C., Haselbruebler, T., Schwarzenbacher, M., Kaltenbrunner, M., Paster, W., Heise, B., Sonnleitner, A., Stockinger, H., Schutz, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+protein-protein+interactions+in+the+live+cell+plasma+membrane+by+quantifying+prey+redistribution+upon+bait+micropatterning%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Detection of protein-protein interactions in the live cell plasma membrane by quantifying prey redistribution upon bait micropatterning.</a> Methods in Enzymology. , Forthcoming Forthcoming.</li>
</ol>

Görselleştirme Araştırma Lab ana alınan Olympus, Brown Üniversitesi tarafından sağlanan veya (Kim ve ark, 2003) çoğaltılamaz video görüntüleri içerir.

İlişikteki video canlı hücrelerin plazma zarı (Brameshuber ve diğerleri, 2009;. Weghuber ve arkadaşları, basın Schwarzenbacher ve ark, 2008) protein-protein etkileşimleri tespit etmek için bir yöntem gösteriyor. Prensip olarak, herhangi bir TIRF tabanlı mikroskobu platformu okuma sistemi olarak kullanılacak. Yüksek hassasiyeti (örneğin tek moleküllerin tespiti için) istenen zaman, gelişmiş mikroskoplar gerekecektir. En iyi sonuçlar, hazırlanması sürecinde aşağıdaki kritik noktaları elde etmek için özel bir dikkat gerektirir: <ol class="lroman"><li> Karanlık koşullar altında saklayın Cy5 stok solüsyonu fluorofor beyazlatma önlemek ve microcontact yazdırmadan önce taze BSA Cy5 çalışma solüsyon hazırlanır. </li><li> PDMS micropattern pipet ucu ile kazıyın ve örnek fluorofor beyazlatma önlemek için karanlık koşullar altında inkübe için dikkatli olun. </li><li> Petri cam slayt yapışmasını önlemek için steril bir ped lamel koyun. Cam slayt PDMS damgası yapıştırılır sonra, hareket etmez. </li><li> Reaksiyon odasındaki hava kabarcıkları kaçının ve fluorofor beyazlatma önlemek için karanlık koşullar altında örnek kuluçkaya yatmaktadır. </li><li> Tuz kristallerinin oluşumunu önlemek için, fazla 2 dakika için örnek kurumasını bekleyin. </li><li> Hücrelerin ayrılmasına olarak tripsin kullanmayın tutunmaya şimdiye kadar ifade membran proteinlerinin ekstrasellüler etki alanı olacaktır. Yüzeyindeki hücrelerin ek hemen sonra micropatterns oluşturmak için düşük devir hızı ile proteinler tripsin kaçınmak yararlı olacaktır. </li><li> Mikroskop inkübe hücrelerinin sayısını kontrol ve hücrelerin% 30-50 daha fazla izdiham ulaşmak olmadığını emin olun. Aşırı hücrelerin antikor kaplı yüzey hücreleri hızlı eki nedeniyle hemen çıkarılmış olduğundan emin olun. </li><li> Sadece yüksek kaliteli BSA-Cy5 desen slayt ileri analiz için kullanılabilir. </li><li> , Floresan av protein Kararlı ifade tarama başına analiz edilebilir hücreleri daha fazla sayıda nedeniyle tercih edilir. </li><li> Yeterli TIRF ayarlaması nedeniyle desen sitozolik arka plan görselleştirmek için vazgeçilmez bir unsurdur. </li></ol> Mikro-desenleme tekniği, protein-protein etkileşimleri analiz için çeşitli olanaklar sunmaktadır. Öncelikle, aynı zamanda yerel, mekansal çözüme protein-protein etkileşimleri miktarının birlikte, yanlış pozitif veya negatif, yüksek bir sayı vermenin dezavantaj olmaksızın, zayıf ya da dolaylı etkileşimleri algılama mümkündür. İkincisi 2-hibrit ekran gibi biyokimyasal yaklaşımlarla elde etmek zor canlı hücrelerin plazma zarı, protein-protein etkileşimleri analiz etmek için araştırmacı sağlar. Üçüncü yaklaşım, sıcaklık, farklı proteinlerin veya diğer molekülleri ya da post-translasyonel modifikasyonlar varlığı gibi çevresel değişiklikler modüle yem-av etkileşimlerinin tespiti için izin verir. Bu nedenle tahlil canlı hücreleri bağlamında belirli bir etkileşim çiftinin tarama modülatörleri sağlar. Ayrıca, yakalama ligand veya monovalan ligandların kullanımı yüzey yoğunluğu azaltarak, dinlenme devlet analizi mümkün hale gelir. Son olarak, yeterli tarama platformlarda kullanılması halinde, analiz hücrelerinin sayısı, ilaç firmaları, ilaç tarama için yüksek kapasiteli talepleri (Ramm, 2005) maç için yeterince yüksek.

mikro desenli yüzeyler, protein-protein etkileşimleri-vivo algılama

In-vivo Detection of Protein-protein Interactions on Micro-patterned Surfaces

Moleküllerin etkileşim ağı çözülüyor<em&gt; In vivo</em&gt; Hücre fonksiyonu ve metabolizmayı düzenleyen mekanizmalar anlamanın anahtarıdır. Hücrelerin moleküler etkileşimler adresleme için metodolojik seçenekleri bir çok gelişmiş, ancak bu yöntemlerin çoğu oldukça dolaylı ve hemen hemen kantitatif nedenle muzdarip olmuştur. Aksine, birkaç high-end nicel yaklaşımlar getirilmiştir, ancak yüksek işlem hacmi genişletmek için zor olan. Kantitatif bilgileri ayıklamak imkanı ile yüksek verimlilik özellikleri birleştirmek için, yakın zamanda protein-protein etkileşimleri tanımlamak için yeni bir konsept geliştirdi (Schwarzenbacher<em&gt; Ve ark.</em&gt;, 2008). Burada, (&quot;yem&quot;) fluorofor-etiketli bir protein (&quot;av&quot;) ve bir membran proteini arasındaki etkileşimleri analiz etmek için izin verir Bu sistemin tasarımı ve yapımı için ayrıntılı bir protokol tarif<em&gt; In vivo</em&gt;. Hücreler yem exoplasmic etki alanına karşı antikorlar ile Fonksiyonlu micropatterned yüzeylerde kaplama. Bait-av etkileşimleri floresan yırtıcı yeniden dağıtımı yoluyla test. Bu yöntem, tarama aracı olarak uygulanabilir, tek moleküllerin düzeyini yüksek hassasiyet, zayıf etkileşimleri tespit yeteneği ve yüksek verimlilik kapasitesi ile karakterizedir.

Bu video kullanımı ile mikro-desenli yüzeyler, protein-protein etkileşimleri sonraki analizi ile deneyler gösterir. Bu yaklaşım, canlı hücreler protein etkileşimleri tespit etmek imkanı sunar ve kantitatif bilgileri ayıklamak imkanı ile yüksek verimlilik özellikleri bir araya getiriyor.

Mikro desenli Yüzeyler, protein-protein etkileşimleri-vivo Algılama

Moleküllerin in-vivo etkileşim ağının aydınlatılması, hücre fonksiyonunu ve metabolizmasını düzenleyen mekanizmaların anlaşılması için temel teşkil eder. Çok sayıda...

Hücre metabolizmasını ve işlevlerini düzenleyen mekanizmaları anlamak için canlı hücrelerdeki moleküllerin etkileşim ağını çözmek özel bir öneme sahiptir. Kalitatif ve kantitatif bilgi sağlayan, sayısı giderek artan metodolojiler, hücre işlevlerinin bütünsel resimlerini elde etme yolundaki itici gücü oluşturmaktadır. Co ip, TAP tag veya foto çapraz bağlama deneyleri, öncü moleküllerin in vitro ortamda saflaştırılmasına olanak tanır.Ek olarak, canlı hücrelerdeki protein etkileşimlerinin analizi için çeşitli yaklaşımlar tasarlanmıştır. Bunlar arasında iki hibrit tarama veya floresan proteinlerin komplementasyon deneyleri yer almaktadır. Ayrıca, bu sorunu ele almak için FRET veya FCS gibi bazı spektroskobik yaklaşımlar ve spektroskobik olmayan yöntemler geliştirilmiştir.Söz konusu teknikler geniş hücre popülasyonlarının kaydedilmesi için geliştirilmiştir, ancak oldukça dolaylı olmaları ve bu nedenle neredeyse hiç kantitatif olmamaları nedeniyle sorun teşkil etmektedir. Buna karşılık, birkaç üst düzey kantitatif yaklaşım tanıtılmıştır. Ancak, yüksek kapasiteli veri toplama yeteneklerini kantitatif bilgi çıkarma imkanıyla birleştirmek, yüksek verimliliği genişletmeyi zorlaştırmaktadır.Yakın zamanda protein-protein etkileşimlerini tanımlamak için yeni bir konsept geliştirdik. Buradaki mikro desenleme tekniği, BSA Sci beşin fonksiyonelleştirilmiş cam lamel üzerine basıldığı mikro desenli SA ızgaralarının şematik bir gösterimidir ve ara boşluklar önce streptavidin, ardından biyotinize ligandlar ile doldurulur. Çoğu durumda, membrana karşı antikorlar kullanılır.Bu tür mikrobiyom çipleri üzerinde büyütülen hücrelerdeki protein yemi. Yem, antikor mikro desenine göre plazma membranında düzenlenecektir. Floresan işaretli ikinci bir protein avı ile olan etkileşimler, ortak desenleme derecesi ölçülerek incelenir. Belirli özellik boyutu ve derinliğe sahip karelerden oluşan bir dizi içeren silikon master PDMS damga kullanılarak gerçekleştirilir.Üç mikrometrelik parçalar bir jelden üretilir ve kesilip çıkarılır. Damgalar, önceden %100 etanol ve çift distile su ile durulanır ve nitrojen ile kurutulur. Ardından 0,67 mg/mL sci-fi ile inkübe edilirler.İnkübasyon sırasında, oda sıcaklığında 30 dakika boyunca işaretli BSA çözeltisi ile bekletilir; epoksi modifiyeli cam lamel örtüler de aynı şekilde temizlenir. Mürekkepleme işleminden sonra damgalar, aynı şekilde PBS ve su ile yıkanır. BSA sci beş transferi için.Bir damga azot ile kurutulur ve hemen ardından 30 dakika boyunca bir cam lamelin altına kendi ağırlığıyla yerleştirilir. Mikro desen alanının konumu, lamelin arka yüzüne işaretlenir. Damgalar kaldırıldıktan sonra, lameller yapışkan silikon maskelerle mühürlenir.Odacıklar, bir saat boyunca inkübe edilen 50 µg/mL Streptavidin çözeltisi ile doldurulur ve ardından bir mililitre PBS ile durulanır. Sonrasında, streptavidin desenleri bir saat boyunca 10 µg/mL biotinize antikor ile inkübe edilir ve PBS ile yıkandıktan sonra odacığa hücreler yüklenir. Hücreler yüzeye tutunduğunda, örnek ölçümler için hazır hale gelir.Okuma işlemi için tek gereksinim, örneği toplam iç yansıma konfigürasyonunda aydınlatabilen bir floresan mikroskobudur. Bu tür sistemler farklı tedarikçilerde ticari olarak mevcuttur ve son yıllarda kullanıcılar için yönetimi kolay hale gelmiştir. Bizim tespit sistemimiz bir epi-floresan mikroskop üzerine kurulmuştur.Kullanılan floroforların seçici floresan eksitasyonu için argon ve kripton iyon lazerleri kullanılır; numuneler, 100 kat büyütmeli, yüksek NA'li bir yağ daldırma objektif kullanılarak objektif tabanlı bir toplam iç yansıma konfigürasyonunda aydınlatılır. Standart filtre setleri kullanılarak yapılan uygun filtrelemenin ardından, floresan bir arka aydınlatmalı CCD kameraya görüntülenir. Okuma işlemi, geniş numune alanlarının taranmasına olanak tanıyan zaman gecikmeli entegrasyon modunda gerçekleştirilir. Bunun için numuneler, kameranın satır kaydırmasıyla senkronize edilmiş motorlu bir XY tablası kullanılarak kaydırılır.Geri yansıyan lazer ışını, iki segmentli bir fotodiyota görüntülenir ve diferansiyel sinyal, hızlı yeniden odaklama için bir Z pizo kontrolünde kullanılır. Okuyucu, tarama işlemi sırasında çalışan otomatik bir odak tutma sistemiyle donatılmıştır; bu işlemde ilk tarama GFP'nin seçici uyarımı için 488 nanometrede, ikinci tarama ise PS Five'ın seçici uyarımı için 647 nanometrede gerçekleştirilir. Veri analizi için, yakalanan antikor bölgesinin içindeki ve dışındaki floresan yoğunluğuna dayalı, MATLAB ile yazılmış bir kontrast hesaplama programı kullanıyoruz.Çok sayıda hücrenin hızlı analizi için kontrast seviyesi ve dolayısıyla protein etkileşim derecesi analiz edilir. Ayrıca ticari olarak mevcut olan otomatik yazılımlar da kullanılabilir. Örneğin, Olympus tarafından sunulan scan R görüntüleme yazılımı, mikro desenleme deneylerinin kontrast değerlendirmesi için başarıyla test edilmiştir.Burada gösterildiği gibi, erken T-hücresi sinyalizasyonundaki proteinlerden CD four ve LCK arasındaki iyi bilinen etkileşimi analiz ediyoruz. Floresan LCK, CD four antikorla kaplanmış bölgelerdele açıkça yeniden dağılmaktadır. Bir çinko şelatör eklenmesiyle bu iki proteinin ana etkileşim bölgesi olan çinko kenet yapısının bozulması, daha sonra LCK mikro desenlerinin kontrastını azaltmaktadır.Özetle, mikro desenleme tekniğinin temel avantajları şunlardır: yerel olarak uzaysal çözünürlüğe sahip protein etkileşimlerinin nicelenmesi. Ayrıca, canlı hücrelerin plazma membranındaki zayıf etkileşimlerin saptanması, modüle edilmiş yem-av (bait-prey) etkileşimlerinin tespiti, dinlenme durumunun analizi ve yaklaşımın yüksek kapasiteli tarama için uygulanabilirliği.

in-vivo-detection-protein-protein-interactions-on-micro-patterned

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol bir FRET tabanlı yakınlık tahlil kullanarak nasıl görüntü protein-protein etkileşimleri açıklar.

Görüntüleme Protein-protein etkileşimleri In vivo</em

Test protein-protein etkileşim protein işlevsellik diseksiyon için vazgeçilmezdir. Burada, bir...

Protein Membran Kaplama Testi: Çözünür ve çözünmez Proteinler Arasında Etkileşim Test Protokolü In vitro</em

Neredeyse tüm S. içeren protein mikrodiziler kullanarak cerevisiae proteom paralel protein-protein etkileşimleri, binlerce hızlı tarafsız sorgulama için incelenir. Bu yöntem, protein-küçük molekül, translasyon sonrası modifikasyon ve yüksek verimlilik Diğer tahliller için kullanılabilecektir.

Yüksek yoğunluklu Fonksiyonel Protein mikrodizileri Probing Protein-protein Etkileşimleri Algılama

Peptit dizisi taraması, protein-protein etkileşim bölgelerini tanımlamak için yüksek verimli bir testtir. Bu, bir hedef proteinin çoklu etkileşimlerinin haritalanmasına izin verir ve bir proteini hedef alan inhibitörler için bölgeleri belirlemek için bir yöntem olarak hizmet edebilir. Burada peptit dizilerini taramak ve analiz etmek için bir protokol açıklıyoruz.

Peptit Diziler protein-protein etkileşim Siteleri belirlenmesi

İşte, bir yakınlık ligasyonu tahlil (PLA) ile yüksek hassasiyet MST1/MST2 heterodimerization sabit hücrelerdeki görselleştirmek için nasıl kullanılacağını göstermektedir.

Heterodimerization in Situ yakınlık ligasyonu tahlil kullanarak Protein izoformlarının tespiti

Burada montaj ve demontaj biolayer Interferometry (BLI) kullanarak şarbon toksini izlemek için bir iletişim kuralı mevcut. Montaj/demontaj biyoalgılayıcı yüzeyinde, büyük protein kompleksleri yüzey Görselleştirme ve elektron mikroskobu ve kütle spektrometresi, sırasıyla kullanarak kompleksleri bileşenlerinin tanımlaması için serbest bırakılır.

Dinamik Protein kompleksleri analiz monte ve kütle spektrometresi ve Elektron Mikroskopisi kullanılarak Biolayer Interferometry biyoalgılayıcı--dan serbest bırakmak

Burada, içinde yüksek üretilen iş ekran ekstraselüler protein microarrays kimliği roman reseptör-ligand etkileşimleri için bir iletişim kuralına mevcut. Ayrıca protein-microbead kompleksleri kullanarak geçici protein-protein etkileşimlerinin algılama geliştirmek için bir yöntem açıklar.

Hücre dışı Protein Mikroarray teknoloji yüksek işlem hacmi düşük benzeşme reseptör-Ligand etkileşimleri algılanması için

Burada, kütle spektrometresi için numunelerin hazırlanması için bir on-membran sindirim tekniği için bir protokol sunuyoruz. Bu teknik, protein-protein etkileşimlerinin uygun analizini kolaylaştırır.

Bir on-membran sindirim tekniği kullanılarak protein-protein etkileşimlerinin değerlendirilmesi

Genel amacımız, hücrelerin yönlendirilmiş aksonal büyümeye yol açan hücre dışı ipuçlarını nasıl algıladığını anlamaktır. Burada, akson büyümesini ve yol bulmayı yöneten belirli olayları incelemek için hücre dışı matriks bileşenlerinin tanımlanmış mikro desenlerini üretmek için kullanılan Proteinlerin Hafif Kaynaklı Moleküler Adsorpsiyon metodolojisini açıklıyoruz.

Hücre Dışı Matriks Proteinlerine Hücre Yanıtlarını İncelemek Için Mikro-Desenleme için PRIMO Sistemini Kullanan Proteinlerin Işık Kaynaklı Moleküler Adsorpsiyonu

Doğası gereği düzensiz birçok proteinin, çok sayıda hücresel süreç için önemli bir davranış olan oldukça dinamik biyomoleküler kondensatların oluşumuna katıldığı gösterilmiştir. Burada, canlı hücrelerdeki biyomoleküler kondensatlarda proteinlerin birbirleriyle etkileşime girdiği dinamikleri ölçmek için tek moleküllü görüntüleme tabanlı bir yöntem sunuyoruz.

Biyomoleküler Kondensatlarda Protein Etkileşim Dinamiğinin Tek Moleküllü Ölçümü

Protokol, ilgilenilen bir proteine kaynaşmış bir biyotin ligaza yakınlıklarına dayalı olarak biyotinin proteinlere in vivo kovalent bağlanması için bir yöntem sunar. Bu modifikasyon, protein etkileşim çalışmalarında gerektiği gibi streptavidin boncukları kullanılarak proteinlerin seçici olarak zenginleştirilmesine izin verir.

İn vivo Paramecium tetraurelia'da Protein Etkileşim Çalışmaları için Yakınlık Biyotinilasyonu

Öğrenin mikro desenleme tekniğiyle canlı hücrelerde protein-protein etkileşimlerini nicel olarak analiz etmeyi. Bu yöntem zayıf etkileşimleri tespit ederek yüksek verimli tarama olanağı sağlar.

Mikro desenli Yüzeyler, protein-protein etkileşimleri-vivo Algılama

Daha fazla video keşfet