Murin Bioluminescent Karaciğer Tümör Modeli

Herkese merhaba. Benim adım Simon Regenron. Buradaki, İrlanda'daki kanser araştırma merkezinde cerrahi asistanlarından biriyim.

Bugün size karaciğer metastazları oluşturmaya yönelik bir cerrahi tekniği göstereceğim. Nöron modelinde karaciğer, metastatik yayılımın yaygın bir merkezidir ve kansere bağlı ölümlerin başlıca nedenidir. İleri evre karaciğer hastalığı olan hastaların sadece küçük bir yüzdesi cerrahi rezeksiyon için uygundur.

Bu nedenle, bu durumun tedavisi için yeni terapötiklere ihtiyaç duyulmaktadır. Karaciğer metastazlarının birçok hayvan modeli, klinik tabloya benzeyen bir hastalıkla sonuçlanmamaktadır. Bugün size göstereceğim model, klinik olarak ilgili bir modeldir; öğrenilmesi nispeten kolaydır ve oldukça yüksek başarı oranlarına sahiptir.

Bu model, dalağın iki yarım dalağa bölünmesini içerir. Yarım dalaklardan biri tümör hücrelerinin inokülasyonu için kullanılır. Bu tümör hücreleri, portal dolaşım aracılığıyla karaciğere taşınır.

Diğer hemi dalak, immünolojik özelliklerini korumak amacıyla bozulmadan bırakılır. Kullandığım hücre hattı stabil olarak lusiferaz eksprese etmekte olup, bu durum tümör büyümesinin in vivo biyolüminesans analizine olanak tanır. Bu nedenle, söz konusu model, karaciğer hastalığı tedavilerinin non-invaziv olarak izlenmesine imkan sağlayacaktır.

Tamam, bugünkü prosedüre başlayalım. İhtiyacımız olan aletler şunlardır: disseksiyon makasları, portegü, iki küçük pens, 10 numara bistüri, cilt kapatma için 5-0 prolin sütür, periton tabakasının kapatılması için 4-0 PDS sütür, dalağı bölmek için 3-0 Vicryl bağlar, salin, anestezik enjeksiyonu için 29 gauge insülin iğnesi, tümör süspansiyonu enjeksiyonu için 26 gauge insülin iğnesi, serumsuz ortamda tümör hücre süspansiyonu, enjekte edilebilir anestezik, cilt markörü ve önceden kesilmiş steril gazlı bezler. Bugün kullanacağım fare modeli Athymic MF1 nude faredir.

Uygun tümör hücre hatları ile C 57 ve BC gibi diğer modeller kullanılabilir. Laboratuvar ortamında, enjekte edilebilir genel anestezik ve bir ısıtıcı ped kullanılır. Anestezinin derinliği ayak parmağı sıkıştırma testi ile değerlendirilir.

Ayak parmağı sıkıştırıldığında ayak çekme refleksi görülmemelidir. Knee size fare uygun şekilde konumlandırılmış ve bantlanmıştır; karın bölgesi Betadine ile hazırlanmış ve steril bir şekilde örtülmüştür. Bir subkostal insizyon yapılır, abdominal kaviteye girilir, dalak tanımlanır ve dışarı çıkarılır.

Spleen, önceden kesilmiş steril bir gazlı bez kullanılarak farenin geri kalanından izole edilir. İki vasküler pedikül arasına iki dikey bağ uygulanır ve nazikçe bağlanır. Spleen, iki eşit yarıya (hemi-spleen) bölünür.

Tümör hücrelerinin inokülasyonu için bir hemi dalak kullanılır. Sızıntıyı önlemek amacıyla tümör hücreleri hemi dalağa yavaşça enjekte edilir. Tümör hücreleri portal dolaşım yoluyla ilerleyerek karaciğere ulaşır.

10 dakikalık inkübasyonun ardından, enjeksiyon yapılan dalak yarısı eksize edilir ve diğer dalak yarısı karın boşluğuna geri yerleştirilir. Periton boşluğunu kapatmak için emilebilir sütürler ve sürekli dikiş kullanılır; cilt kapatma işlemi için ise emilemez 5-0 prolen sütür kullanılır. İyileşme süreci rutin şekilde gerçekleştirilir.

Karaciğer hastalığının gelişimi, 2D ivus görüntüleme kullanılarak zaman içinde değerlendirilebilir. Fare daha önce olduğu gibi anestezi altına alınır ve intraperitoneal olarak Lucifer substratı verilir. Fare, 37 derece olan oda içindeki sahneye yerleştirilir.

Görüntüleme üç dakika boyunca gerçekleştirilir ve lüminesansı tespit edilen farenin üst üste bindirilmiş bir görüntüsü oluşturulur. Tedaviden üç hafta sonra karın bölgesi açılır ve yaygın karaciğer hastalığı tespit edilir. Sonuç olarak, bu teknik karaciğerle lokalize metastatik tümör hücresi büyümesinin indüklenmesine olanak tanır; lüminesans görüntüleme ise tümör büyümesinin görselleştirilmesini, miktarının belirlenmesini ve terapötik yanıtların değerlendirilmesindeki uygulanmasını sağlar.