Nematod Senkronizasyonu: Aynı Gelişim Aşamalarında Solucan Popülasyonları Elde Etmek İçin Bir Yöntem

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biyoloji

0 görüntüleme • 3:43 dk • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

-Kendi kendine döllenen solucanları son larva dönemlerinde bakteriyel bir besin kaynağı ile ekilmiş tabaklara yerleştirerek başlayın. Solucanların içinde bol miktarda yumurta olana ve tabaklara konana kadar larvaların olgun yetişkinlere dönüşmesine izin verin. Yumurtaları ve solucanları toplamak için plakaları tamponla yıkayın.

Ardından, tamponu yetişkin solucanları çözen çamaşır suyu çözeltisi ile değiştirin. Yumurta kabuğu tarafından korunan embriyolar, gelişimin farklı aşamalarında olsalar da, bu tedaviden sağ çıkacaklardır. Daha sonra ağartıcıyı tampon ile değiştirin ve embriyoların gelişmesine izin verin. Larvalar yiyecek yokluğunda yumurta kabuklarından çıktıkça, gelişme ilk larva aşamasında duraklayacaktır.

Gelişime devam etmek için larvaları yiyecek içeren plakalara aktarın. Bu, kalan larva aşamaları boyunca senkronize ilerlemeyi uyaracaktır.

Solucanlar son larva aşamasına ulaştığında, onları yavru üretimini önleyen bir DNA sentezi inhibitörü olan yiyecek ve FUdR içeren tabaklara taşıyın. FUdR varlığında devam eden gelişim, steril yetişkin solucan popülasyonu üretir. Bu deneyde, nematod C. elegans'ın bir popülasyonunu senkronize edeceğiz.

-Başlamak için, istenen genetik geçmişe sahip L4 larvalarını, nematod büyüme ortamı veya NGM plakaları üzerinde taze tohumlanmış bir Escherichia coli çimine aktarın. Her gerinim için en az iki adet 100 milimetre veya üç adet 60 milimetre plaka kullanın.

Solucanları uygun büyüme sıcaklığında üç ila dört gün boyunca veya plakalar çok sayıda yumurta ve gravid solucanı ile konsantre olana kadar kuluçkaya yatırın. 100 milimetrelik nematod plakası başına yaklaşık altı mililitre M9 tamponu kullanarak yumurtaları ve solucanları plakalardan yıkayın. Cam Pasteur pipetleri kullanarak, yumurtaları ve solucanları her suş için ayrı ayrı 15 mililitrelik santrifüj tüplerine aktarın. Bu tüpleri 6.180 g'da üç dakika döndürün.

Santrifüjlemenin ardından, sadece hayvan ve yumurta peletini koruyarak M9 tamponunu aspire edin. Her tüpe üç ila dört mililitre çamaşır suyu çözeltisi ekleyin ve altı dakika boyunca aralıklı olarak girdap yapın.

Daha sonra her bir tüpü doldurmak için M9 tamponu ekleyin ve bir dakika boyunca 6.180 g'da döndürün. Süpernatanı aspire edin ve bu yıkamayı M9 ile üç kez tekrarlayın.

Yıkamanın ardından, yumurta peletini yaklaşık dokuz mililitre M9 tamponu içeren 15 mililitrelik taze bir tüpe taşıyın. Yumurtadan yeni çıkmış solucanları 16 ila 48 saat boyunca 20 santigrat derecede nütasyon yaparak senkronize edin.

Bu tüpleri 6,180 g'da 1,5 dakika döndürdükten sonra, senkronize L1 hayvanlarını ayrı NGM plakaları üzerinde taze tohumlanmış OP50 çimlerine koyun. Hayvanlar yaklaşık 42 saat sonra L4 larva aşamasına ulaşana kadar plakaları 20 santigrat derecede tutun. Şu anda, L4 larvalarını, döl üretmelerini önlemek için mililitre başına 0.5 miligram FUdR içeren OP50 tohumlu NGM plakalarına taşımak için bir platin kazma kullanın.

09:10

Kültürleme Embriyonik için bir yöntem C. elegans Hücreler

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:13

Yöntemler içinde Muscle hücrealtı Kompartmanları DeğerlendirecekÜSKÜP ° C. elegans

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:12

Büyüme ve üreme Caenorhabditis elegans kimyasallar etkisi ölçme

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:34

Temel Caenorhabditis elegans Yöntem: Senkronizasyon ve Gözlem

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:46

Roman Metrik Nematodu Embriyonik Uzama karakterize etmek Caenorhabditis elegans

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:58

Yineleme kümesi yöntemi: Bir yüksek-den geçerek yaklaşım kantitatif ölçü Caenorhabditis elegans ömrü

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:36

C. Eleganlarda Fizyolojik Stres Tepkilerinin Ölçüleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:55

Dokuya Özgü Chaperone Etkileşimlerini Taramak için Caenorhabditis elegans'ı Kullanma

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:51

Büyük Ölçekli Karma Aşama Caenorhabditis Elegans Popülasyonlarının Kültürü ve Tahlilleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:57

Türlerden Agnostik Tek Doku Uygulamaları için Lazer Mikrodiseksiyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026