Drosophila Kur Yapma Koşullandırması: Sineklerde Öğrenme ve Hafızayı Test Etmek İçin Bir Yöntem

-İlk olarak, bekar saf veya çiftleşmemiş Drosophila melanogastor erkeklerini izole edin. Ardından, erkekleri şartlandırmak için, zaten çiftleşmiş ve bu nedenle kur yapmaya açık olmayan bir dişi ekleyin. Erkek, ona doğru yönelmek, onu takip etmek, ön ayağıyla ona vurmak ve kur şarkısını üretmek için kanadını uzatmak ve titretmek gibi tipik kur yapma davranışları sergiler. Ayrıca yalamayı ve çiftleşmeyi de deneyebilir. Çabalar ne olursa olsun, dişi alıcı kalmaz ve erkek bir reddedilme yaşar. Böylece, daha önce çiftleşmiş bir dişiye kur yapmamayı öğrenir.

Erkeğin hafızasını test etmek için dinlenmesine izin verin ve ardından onu başka bir çiftleşmiş dişiye maruz bırakın. Eğitimli erkek, geçmişteki reddedilmenin hatırasını koruduğu için bu sineği kur yapmaya teşebbüs etmeyecektir. Örnek protokolde, kısa ve uzun süreli hafıza değerlendirmesi için bir kur yapma koşullandırma testinin eğitim ve test aşamaları sırasında sineklerin nasıl ele alındığını göreceğiz.

- Dört günlük çiftleşme dosyalarından tüm yetişkinleri uyuşturarak başlayın. Cinsiyetleri ayırın ve tek prematize dişileri bir konut bloğunun bir sırasının 12 kuyusunun her birine aktarın. Daha sonra, bir aspiratör kullanarak ve anestezi olmadan, saf erkekleri ev kuyularından çıkarın ve onları önceden doğmuş dişilerin bulunduğu kuyulara aktarın. 12 çift daha ayarlamak için bu işlemi ikinci satırda tekrarlayın.

Öğrenmeyi veya kısa süreli hafızayı test etmek için bu kurulumu şafakta gerçekleştirin ve eğitim süresinin bir saat sürmesine izin verin. Uzun süreli hafızayı test etmek için, öznel şafaktan dört saat önce çiftleri ayarlayın ve eğitimin sekiz saat sürmesine izin verin.

- Öğrenme ve hafızanın oluşması için, erkeklerin çiftleşememesi önemlidir, bu nedenle erkeklerin reddedildiğinden emin olmak için eğitim süresi boyunca çiftleri periyodik olarak kontrol edin.

Eğitim süresi sona erdiğinde, erkekleri karbondioksit anestezisi değil, bir aspiratör kullanarak kuyulardan nazikçe çıkarın. Erkekleri yeni bir konut bloğuna yükleyin. Öğrenme deneyi için, eğitimi takiben erkekleri dinlenme süresi olmadan hemen test edin. Kısa süreli hafıza deneyi için, test aşamasına başlamadan önce erkeklerin bir saat dinlenmesine izin verin. Uzun süreli hafıza deneyi için, erkekleri bir sonraki öznel şafağa kadar dinlendirin.

Deneyin test aşamasına hazırlanmak için, prematize edilmiş dişileri uyuşturun ve onları yeni bir normal yiyecek aşağılığına aktarın. Sineklerin anesteziden kurtulması için en az bir saat bekleyin. Ardından, test kurulumunu hazırlayın. Kur yapma alanlarındaki etkinlikleri kaydetmek için video kayıt cihazlarının hazır olduğundan emin olun.

Testi başlatmak için, bir test erkeğini konut bloğundan bölücüler kapalıyken kur yapma alanına aktarmak için hafif bir aspirasyon kullanın. 18 arenanın tamamı bekar erkeklerle dolana kadar arenalar arasındaki giriş deliklerini hareket ettirin. Daha sonra, aynı tekniği kullanarak, bireysel premated dişileri 18 arenanın her birine, ancak bölücülerin karşı tarafına aktarın. Şimdi, kur yapma arenasını dikkatlice çevirin ve kuyu açıklıkları beyaz tezgah yüzeyine doğru olacak şekilde video kameranın altına yerleştirin. Ardından, bölücüleri çıkarın ve video kaydını başlatın. En az 10 dakikalık aktivite kaydedin. Deney bittiğinde, sinekleri bir vakum kullanarak arenalardan çıkarın ve yeniden kullanılmadan önce kur odalarını en az 10 dakika havalandırın.