Drosophila Larva Hayali Disk Diseksiyonu: Gelişmekte Olan Epiteli Gözlemlemek İçin Bir Yöntem

- Diseksiyona başlamak için, larva gövdesini ortada kavramak için bir çift forseps ve larvaları ikiye bölmek için ikinci bir çift kullanın. Ardından, gövdeyi arka tarafta tutarken ağız kancasını ön uçta sıkıştırın. Ardından, ağzı vücudun içinde tutan forsepsleri itin. Vücut duvarını ters içe katlamak için arka forsepsleri kullanın.

Bu hazırlıkta, tükürük bezleri ve bağırsak, beyni ve hayali diskleri ortaya çıkarmak için kolayca tanımlanabilir ve çıkarılabilir. Anten, göz, bacak, kanat ve haltere diskleri görülebilir. Sabitlendikten sonra, larva preparatını, disklerin daha fazla incelenebileceği montaj ortamına sahip bir slayta aktarın. Örnek protokolde, bu larva preparatını kullanarak kanat hayali disklerinin nasıl inceleneceğini göreceğiz.

- Başlamak için, dolaşan üçüncü instar larvalarını PBS'li bir Petri kabına aktarmak için tahta bir çubuk veya künt forseps kullanın. Daha sonra mozaik larvaları için uygun floresan belirteçleri belirlemek için bunları floresan ışığı altında genotiplendirin. Devam etmeden önce larvaları PBS ile yıkayın. Daha sonra bir diseksiyon mikroskobu altında, larvaların merkezini sıkıştırmak için iki çift forseps kullanın ve vücudu ikiye bölün. Ardından, vücudu ters çevirmek için ağzı vücuda doğru iterken ağız kancalarını sıkıştırın. Ardından tükürük bezleri ve yağ kütleleri gibi gereksiz malzemeleri çıkarın. Larvalar şimdi metin protokolünde ayrıntılı olarak açıklanan fiksasyon ve antikor boyama için hazırlanmıştır.

Lekeli doku preparatlarını iki mililitrelik bir plastik transfer pipeti kullanarak bir mikroskop lamına aktarın. Daha sonra forseps kullanarak, tek tek larvaları bir mikroskop lamı üzerinde montaj ortamı damlalarına hareket ettirin. Şimdi forseps kullanarak, hayali diskleri izole edin. Diseke dokunun ucunu basılı tutarak ve diğer forseps ile beyin ve göz anten disklerini çekerek başlayın. Beyinleri kullanıma hazır tutun.

Şimdi kanat hayal disklerini bulun. Kanat hayali diskleri, diseke edilen dokunun yan tarafına yapışır. Ardından, dokuyu bir forsep ile sabitleyin ve kanat disklerini nazikçe çizin. Ardından, lamel tarafından ezilmelerini önlemek için beyinleri kanat disklerinin yakınına yerleştirin. Şimdi yapıları nazikçe bir kapak fişi ile örtün ve lamel oje ile kapatın. Slaytı 4 santigrat derecede saklayın.