Drosophila Erkek Aksesuar Bez Diseksiyonu: İkincil Hücreleri İzole Etmek İçin Bir Yöntem

0 görüntüleme2:59 dk • April 30th, 2023

- Diseksiyon mikroskobu altında ve serum takviyeli ortamda, üreme sistemini forseps ile her sinekten çıkarın. İlk olarak, üreme sistemine eşlik etmiş olabilecek sindirim sisteminin parçalarını çıkarın. Aksesuar bezleri ve boşalma kanalını izole etmek için testisleri, boşalma ampulünü ve terminaliayı çıkarın. Serumu çıkarmak için dokuyu PBS'de bir ila iki dakika yıkayın. Ardından, ayrışma çözeltisine aktarın.

Bezlerin içindeki hücreleri ayrışma çözeltisine maruz bırakmak için, her bezin merkezini forseps ile tutun ve bezi bir çift keskin forseps ile dilimleyin. Çiftleşmede yer alan proteinleri salgılamaktan sorumlu nadir ikincil hücre popülasyonunu içeren bezlerin distal ucunu geride bırakmak için bezin proksimal kısmını ve boşalma kanalını çıkarın. Son olarak, sindirime hazırlık için aksesuar bez uçlarını bir mikro santrifüj tüpüne aktarın. Aşağıdaki protokolde, transkriptom analizi için ikincil hücreleri izole etmek için aksesuar bezleri inceleyeceğiz.

- Prosedüre başlamadan önce, bezleri tutmak için yuvarlak, geniş 200 mikrolitrelik uçları kesin ve alevlendirin ve açıklıkları daraltmak için birden fazla 1000 mikrolitrelik ucun uç açıklığını bir saniyeden daha kısa bir süre alevin yanından geçirin. Ardından, değiştirilmiş uçları aspirasyon hızlarına göre daha dardan daha genişe doğru sıralayın. Aksesuar bez diseksiyonu için, 20 ila 25 erkek drosophila'yı buz üzerine bir cam tabağa koyun ve bir erkek sineğin üreme sistemini çıkarmak için forseps ve diseksiyon mikroskobu kullanın.

Aksesuar bez çiftini, testisler ve boşalma ampulü de dahil olmak üzere diğer tüm dokulardan temizleyin ve aksesuar bezlerini oda sıcaklığında serum takviyeli ortam içeren bir cam plakaya aktarın. 20 çift aksesuar bezi toplandığında, bezleri oda sıcaklığında bir ila iki dakika boyunca bir PBS kabında yıkayın. Yıkamanın sonunda, bezleri taze hazırlanmış ayrışma çözeltisine aktarın ve bir bez lobunun ortasını sıkıca sıkıştırmak için diseksiyon mikroskobu altında keskin forseps kullanın.

İkinci bir forseps çifti kullanarak, aksesuar bezin proksimal bölgesini ve boşalma kanalını bezin ikincil hücreler içeren kısmından ayırmak için dokuyu keskin uçla kesin. Ardından, bezleri 1,5 mililitrelik bir tüpe aktarmak için önceden ıslak alev yuvarlatılmış geniş 200 mikrolitrelik bir pipet ucu kullanın.

15:19

Gastropod Molluskların Yumurta döflenmesi erkek Aksesuar Bezi Ürünlerinin Etkisi

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:35

Diseksiyon, Görüntüleme ve Farmakolojik Tedavi: Drosophila Pupa Testis ve Bekar Erkek germ-line Kistler ex vivo Kültür

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:05

Drosophila Larval ve Pupal Testislerinin Canlı, Sağlam Dokuda Hücre Bölünmesi Analizi İçin Hazırlanması

İlgili videolar

0 Görüntüler

15:01

Yetişkin gelen Oenocytes diseksiyonu Drosophila melanogaster

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:13

İzolasyonu Drosophila melanogaster Testisler

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:23

Drosophila melanogaster Over Diseksiyonu: Ex Vivo Doku Hazırlığı İçin Bir Teknik

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:20

Larva Lenf Bezi Diseksiyonu: Drosophila Hemosit Üreten Organın İzole Edilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:07

Larva Halka Bezi Diseksiyonu: Gelişimsel Endokrin Organların Drosophila'dan İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:30

Spermatogenez sitolojik analizi: Canlı ve Sabit Hazırlıklar

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:49

Yöntemler Lenf Bezi ve Hemocytes içinde incelemek için

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 29 Ağustos 2026