Drosophila Erkek Aksesuar Bez Diseksiyonu: İkincil Hücreleri İzole Etmek İçin Bir Yöntem

- Diseksiyon mikroskobu altında ve serum takviyeli ortamda, üreme sistemini forseps ile her sinekten çıkarın. İlk olarak, üreme sistemine eşlik etmiş olabilecek sindirim sisteminin parçalarını çıkarın. Aksesuar bezleri ve boşalma kanalını izole etmek için testisleri, boşalma ampulünü ve terminaliayı çıkarın. Serumu çıkarmak için dokuyu PBS'de bir ila iki dakika yıkayın. Ardından, ayrışma çözeltisine aktarın.

Bezlerin içindeki hücreleri ayrışma çözeltisine maruz bırakmak için, her bezin merkezini forseps ile tutun ve bezi bir çift keskin forseps ile dilimleyin. Çiftleşmede yer alan proteinleri salgılamaktan sorumlu nadir ikincil hücre popülasyonunu içeren bezlerin distal ucunu geride bırakmak için bezin proksimal kısmını ve boşalma kanalını çıkarın. Son olarak, sindirime hazırlık için aksesuar bez uçlarını bir mikro santrifüj tüpüne aktarın. Aşağıdaki protokolde, transkriptom analizi için ikincil hücreleri izole etmek için aksesuar bezleri inceleyeceğiz.

- Prosedüre başlamadan önce, bezleri tutmak için yuvarlak, geniş 200 mikrolitrelik uçları kesin ve alevlendirin ve açıklıkları daraltmak için birden fazla 1000 mikrolitrelik ucun uç açıklığını bir saniyeden daha kısa bir süre alevin