Yetişkin Bir Sinekten Malpighian Tübül Diseksiyonu: Osmoregülasyon ve Boşaltım Organının İzole Edilmesi

- Bir diseksiyon kabında anestezi uygulanmış bir yetişkin sineği ile başlayın. Sineği forseps ile göğüs kafesinden tutun ve ikinci bir forseps çifti kullanarak karnın arka ucunu açın. Yetişkin sinekler, ortak üreterler yoluyla bağırsağa birleşen iki çift malpighian tübülü veya MT'ye sahip olduğundan, MT'leri serbest bırakmak için arka bağırsağı sinekten dışarı çekin. Arkadaki MT çifti, bağırsakların arkasını çevreledikleri için önce serbest bırakılacaktır. Anterior MT'leri serbest bırakmak için bağırsağı çekmeye devam edin ve ardından onları sinekten ayırmak için üreterde sıkıştırın.

Tübülleri monte etmek için, üreterin altına bir cam çubuk kaydırın ve MT'leri poli-L-lizin kaplı kızağa aktarın. Üreteri aşağı doğru bastırarak disseke edilen organları sabitleyin ve ardından çubuğu MT'lerin üzerine dikkatlice süpürün. Slayt üzerindeki poli-L-lizin, tübüllerin negatif yüklü hücrelerinin bağlanması için mevcut pozitif yüklü bölgelerin sayısını artırarak bağlanmayı teşvik edecektir. Aşağıdaki protokolde, yetişkin bir dişi sinekten MT'leri inceleyeceğiz ve bunları bir perfüzyon sisteminde ex vivo canlı görüntüleme için monte edeceğiz.

- Bu prosedüre başlamak için, her iki tarafta bir kele