Ada Testi: Drosophila Lokomotor Davranışını Değerlendirmek İçin Yüksek Verimli Bir Yöntem

- Ada tahlili, bir tarafı açık olan şeffaf bir kutu ile kaplanmış, sabunlu su tepsisinde yükseltilmiş beyaz bir platformdan oluşur. Kutunun üst kısmındaki bir kamera, platformun tepeden görüntülerini kaydeder ve alanın eşit şekilde aydınlatılmasını sağlamak için ışıklar yerleştirilir.

Sinekleri arenaya yüklemek için, tüm sinekleri dibe getirmek için bir şişeyi düz bir yüzeye vurun. Hızlı bir şekilde art arda, flakon tapasını çıkarın, flakonu ters çevirin ve tüm sinekleri aynı anda dışarı atmak için flakonun açık ucunu platforma hafifçe vurun. Platforma iniş, bir kaçış tepkisini tetikler. Tipik hareket kabiliyetine sahip sinekler, lokomotor kusurları olanların aksine platformu birkaç saniye içinde temizleyebilir.

Denekler kutuya hapsedilir ve sabunlu suya inenler hızla suya batırılır çünkü sabun suyun yüzey gerilimini azaltır. Farklı koşullardan lokomotor davranışı değerlendirmek için, belirli bir süre sonra platformda kalan sinekleri sayın.

Bu örnek protokolde, yarı otomatik görüntü analizi ile uyumlu bir ada tahlili kurulumunu göreceğiz.

- İlk olarak, biyolojik kopyalar olarak deney koşulu başına en az üç şişe hazırlayın. Her flakon, aynı cinsiyette ve benzer yaşta yaklaşık 15 sinek içermelidir. Daha da önemlisi, sineklerin sağlam kanatları olmalıdır.

Deneyleri depolamak için klasörler oluşturun. Bunları, koşullar tarafından tanımlanan bir dizin yapısında oluşturun ve çoğaltın. Örneğin, denemenin her biri beş kopyalı iki genotipi varsa, deney tarihini içeren bir ana klasör oluşturun ve bu klasörün içinde her genotip için bir alt klasör oluşturun. Ardından, genotip klasörleri içinde, her çoğaltma için alt klasörler oluşturun.

Ardından, test cihazını kurun. Banyo tepsisine az miktarda sabunla soğuk su ekleyin ve henüz banyoya sabitlenmemişse, platformu banyonun ortasına yerleştirin. Tepsiyi ve platformu şeffaf bir kutu ile örtün.

Platformu aydınlatmak için, üzerine sıradan 12 voltluk LED'ler gibi soğuk bir lamba yerleştirin. Ayrıca, bir bilgisayara bağlı bir web kamerasını doğrudan platformun üzerine yerleştirin.

Bilgisayarda görüntü kayıt yazılımını açın. Menü sisteminden, yakalama cihazı olarak uygun web kamerasını seçin. Video ayarlarını yapmak için adaya ölü bir sinek yerleştirin. Yazılımdaki parlaklığı, kontrastı ve rengi, ölü sinek beyaz bir arka plana karşı siyah görünecek şekilde ayarlayın.

Ardından, filmleri AVI dosyaları olarak kaydetmek için hızlandırılmış film kurulumunu ayarlayın. Ardından, verilerin kaydedilmesi gereken dizine göz atın ve filmin adını tanımlayın. Bu değişiklikleri kaydedin.

Görüntü verilerinin sıkıştırılması için Intel IYUV kodunu seçin. Kayıt hızını her 0,1 saniyede bir kareye ayarlayın ve karşılık gelen oynatma hızını saniyede 10 görüntüye ayarlayın.

Son olarak, Gelişmiş ayara gidin ve Yakalanan her kare için bir BNP görüntüsü oluştur'u seçin. Ardından, AVI dosyalarını barındırmak için seçtiğiniz dizine göz atın ve Tamam'a basın.

Başlamadan önce adanın boş ve temiz olduğundan emin olun. Ardından, görüntü kayıt yazılımının hızlandırılmış görüntü arayüzünde kaydı başlatın.

Sinek içeren bir şişe alın ve tüm sinekleri dibe vurmak için iki veya üç kez vurun. Ardından, fişi şişeden hızlı bir şekilde çıkarın ve sinekleri platforma kuvvetlice vurun. Hepsi kabaca aynı anda platforma çarpmalıdır.

Sineklere platformdan ayrılmaları için 30 saniyeye kadar süre verin. Ardından kaydı durdurun. Gerekirse, kalan sinekleri platformdan manuel olarak çıkarın.

Bir sonraki denemeye geçmeden önce, bir sonraki veri kümesinin depolanacağı dizini yeniden tanımladığınızdan emin olun.