Drosophila Nöromüsküler Kavşak (NMJ) Miktar Tayini: Sinaptik Morfoloji ve Fonksiyonu Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

- İlk olarak, NMJ'lerin veya nöromüsküler kavşakların farklı yönlerini vurgulayan belirteçlerle Drosophila larvalarını immünostain. Bu, bir motor nöron aksonunun ucunun bir kas ile temas ettiği bölgedir ve morfolojisi sinaptik fonksiyonun bir okuması olarak kullanılır.

Akson, bouton adı verilen çıkıntılar oluşturan birkaç dalda sona erer. Nörotransmiterler butonlardan salınır ve kas kasılmasına neden olur. Nörotransmitter salınım alanlarına aktif bölgeler denir. Burada bir belirteç, NMJ'yi özetleyen sinaptik bir protein için spesifiktir ve diğer belirteç, aktif bölgelerde bulunan bir protein içindir.

Ardından, mikroskopi kullanarak NMJ görüntülerini elde edin ve yarı otomatik görüntü analiz yazılımı ile morfolojilerini kantitatif olarak değerlendirin. Görüntülere önceden ayarlanmış bir dizi yazılım komutu uygulayın. Çıktı dosyaları, analiz edilen NMJ görüntülerini ve morfoloji sonuçlarını içerir. Ölçülebilen özellikler arasında butonların sayısı ve yüzey alanı, NMJ uzunluğu ve dal numarası, bağlantısız NMJ bölmelerinin sayısı ve aktif bölgelerin sayısı bulunur.

Aşağıdaki örnekte, postsinaptik bir belirteç olan DLG1 ve aktif bir bölge işaretleyicisi olan BRP ile boyanmış Drosophila