JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 3:48 dk. • April 30th, 2023
- Enjekte edilen embriyolar G0 yetişkinlerine dönüştüğünde, potansiyel F1 CRISPR düzenlenmiş hatlarını genişletmek ve genomik modifikasyonun kalıtımını izleyebilmek için tüm bireysel sinekleri uygun dengeleyici stoklara çaprazlayın. Daha sonra, bir F1 erkeği mutasyon için pozitifse, yavruları geri alabilmek için rastgele seçilen F1 bekar erkekleri uygun dengeleyici dişilerle çaprazlayın. Haç alındıktan sonra, F1 erkeğini tarama için bir tüpe aktarın.
Genomik DNA'yı çıkarmak için, sineği ekstraksiyon tamponu içeren bir pipet ucuyla ezin. Doku parçalandıktan sonra sıvıyı dışarı atın. Ekstraksiyon tamponu, numunedeki proteinleri sindiren ve yüksek ısı ile etkisiz hale getirilen bir enzim olan proteinaz K içerir.
Artık DNA'ya erişilebilir olduğuna göre, PCR taramasına geçin. Örneğin, yeni diziyi içeren bir bölgeyi yükseltmek için tasarlanmış astarlar kullanın. Sadece modifikasyonun varlığında ikinci primer bağlanacak ve bir PCR ürünü amplifiye edilecektir. Örnekte, sineklerin, dalsız genin ilk ekzonunun yerini alan bir transaktivasyon dizisinin eklenmesi için PCR ile yetiştirildiğini ve tarandığını göreceğiz.
- Daha önce hem kılavuz RNA ekspresyon plazmidi hem de replasman donörü ile e
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin