Kimyasal Kurutma: Taramalı Elektron Mikroskobu (SEM) için Biyolojik Numune Hazırlama

0 görüntüleme4:17 dk • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- Başlamak için, geleneksel taramalı elektron mikroskoplarının, SEM'lerin düşük çalışma basıncında gazların ve sıvı suyun uzaklaştırılmasından kaynaklanan numune bozulmasını azaltmak için sabit bir numuneyi dehidre ederek ve kurutarak başlayın.

Numuneyi kurutmak için, %100 etanole ulaşılana kadar suda artan konsantrasyonlarda etanol ile yıkayın. Daha sonra bu işlemi, numune saf kurutma maddesi ile yıkanana kadar etanol içinde kimyasal bir kurutma maddesi ile tekrarlayın. Numuneyi ve kurutma maddesini bir buharlaştırma kabına aktarın. Minimum ek kurutma maddesi ile örtün ve gece boyunca çeker ocakta kurumaya bırakın.

Ardından, hazırlanan numuneyi karbon yapışkan bant kullanarak bir mikroskop sapının üstüne monte edin. Son olarak, istenmeyen görüntü artefaktlarına neden olabilecek fazla elektron birikimini azaltmak için saplamanın kenarlarına, ardından saplamanın kenarından örneklerin her birine gümüş boya uygulayın.

Bu deneyde, meyve sinekleri, Drosophila melanogaster, kurutma maddesi HMDS kullanılarak SEM analizi için hazırlanmıştır.

- Drosophila melanogaster'i hazırlamak için, anestezi uygulanmış sinekleri 4 santigrat derecede 2 saat boyunca 1 mililitre fiksatife batırın ve tamamen suya batırıldıklarından emin olun.

Sabitleyiciyi çıkarmak için bir cam pipet kullanın. Sabit Drosophila örneğini 1.5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpünde 1 mililitre 0.1 molar fosfat tamponu pH 7.2 ile oda sıcaklığında 10 dakika boyunca yıkayın. Her yıkamayı çıkarmak için bir cam pipet kullanın ve numuneyi çıkarmamaya dikkat edin.

Daha sonra numuneyi, her biri 10 dakika boyunca kademeli bir etanol serisi kullanarak, 1 mililitrelik bir hacimde bir mikrofüj tüpünde kurutun. Her yıkamayı çıkarmak için bir cam pipet kullanın ve numuneyi çıkarmamaya dikkat edin. Numuneyi, üzerini örtecek kadar %100 etanol içeren 1,5 mililitrelik mikrosantrifüj tüpünde tutun.

HMDS kullanarak sineklerin kimyasal olarak kurutulmasını sağlamak için önce %100 etanol solüsyonunu 1 ila 2 solüsyon HMDS ve %100 etanol ile 20 dakika boyunca değiştirin. Ardından çözeltiyi 20 dakika boyunca 2'ye 1 HMDS çözeltisi ve% 100 etanol ile değiştirin. Son olarak, bu çözeltiyi 20 dakika boyunca %100 HMDS ile değiştirin ve ardından işlemi bir kez tekrarlayın.

1,5 mililitrelik mikrosantrifüj tüpü ve HMDS içinde bulunan numuneyi tek kullanımlık bir alüminyum tartım kabına aktarın. %100 HMDS'yi, numuneyi kaplayacak kadar taze %100 HMDS ile değiştirin. Numunenin üzerine düşmesini önlemek için kutu gibi gevşek bir kapakla kuruması için numuneyi doğrudan alüminyum kabın içine kimyasal bir davlumbazın içine yerleştirin ve 12 ila 24 saat kurumasını bekleyin.

Drosophila'yı monte etmek için bir alüminyum montaj saplamasının altını etiketleyin. Kurutulmuş sinekleri, diseksiyon mikroskobu altında bir saplamanın üstüne sabitlenmiş bir karbon yapışkan tırnak üzerine istenen konuma yerleştirmek için hassas cımbız kullanın. Sapların dış kenarlarına gümüş iletken yapıştırıcı sürün.

Gümüş boyayı sineklere bağlamak için bir kürdan kullanın, iletkenliği sağlayın ve boyanın istenen görüntüleme alanına temas etmediğinden emin olun. Saplamaları bir saplama tutucu kutusuna yerleştirin. Ardından açık saplama tutucu kutusunu bir kurutucuya yerleştirin ve gümüş boyanın en az üç saat kurumasını bekleyin.

10:57

Sorunlu Tesisi, Oomiçet ve fungal Örnekleri için Elektron Mikroskobu (SEM) Protokoller tarayarak

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:28

Bağdaşık süper çözünürlük ve elektron mikroskobu Zebra balığı Retina Protein yerelleşme gidermek için

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:15

Taramalı Elektron Mikroskobu için Embriyo, Yumurta Kabuğu ve Mantar Kültürünün İşlenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:54

Odaklanmış iyon demeti Of Cryo-elektron Mikroskopi Numune Hazırlama By Means

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:21

Macerated Tissue taramalı elektron mikroskobu Ekstraselüler Matrix Visualize'a

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:58

Elektron mikroskobu (SEM) tarama morfolojik analiz için kimyasal kurutma kullanarak prokaryotik ve ökaryotik organizmaların hazırlanması

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:33

Yüksek basınç dondurucu, mikrodalga destekli kontrast geliştirme ve en az reçine birim görüntüleme için katıştırma tarafından biyolojik örnek hazırlama

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:09

Woodboring Böceği uzantıları için Tarama ve İletim Elektron Mikroskobu Örnek Hazırlama Yöntemi

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:48

Mikoheterotrofik Bitki Dokularında Mantar Kolonizasyonunu Yorumlamak ve Tohumların Simbiyotik Çimlenmesi için Mikroskopi Teknikleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:00

Attine Karıncalarının Bahçelerinin Mikrobiyotası: Elektron Mikroskobunu Tarayarak Mikrobiyal Bir Manzarayı Görselleştirmek

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026