JoVE Encyclopedia of Experiments
Biyoloji
0 görüntüleme • 3:23 dk • April 30th, 2023
- Bir iğne çektirmesi kullanarak ince duvarlı cam kılcal damarları çekerek konik enjeksiyon iğneleri hazırlayın. Mikroskop altında bir iğne tutun ve ucu kırın, açıklığın yetişkin sinek kütikülünü gereğinden fazla yaralamadan delecek kadar büyük olduğundan emin olun. İğnenizi steril bir boya ve tuz tampon çözeltisi ile yükleyerek ve ardından bir sahne mikrometresinde bir damla mineral yağ üzerine çıkararak enjeksiyon hacmini ölçün. Dağıtılan hacmi hesaplamak için kullanılabilecek püskürtülen damlacığın çapını ölçmek için mikrometre üzerindeki ölçeği kullanın ve enjektör ayarlarınızı buna göre kalibre edin.
İğneyi enjeksiyon solüsyonunuzla yükleyin ve bir enjeksiyon memesine monte edin. Sineklerinizi CO2 ile uyuşturun ve onları anestezi altında tutacak bir CO2 sinek pedi üzerine yerleştirin. Sinekler deneyiniz için doğru yönde olduğunda, enjeksiyonlara devam edin. Örnek protokolde, in vivo görüntüleme için yetişkin sineklere floresein etiketli parçacıklar enjekte edeceğiz.
- İnce cidarlı cam kılcal damarları iğne çektirme ile çektikten sonra, iğneyi mikroskop altında tutmak için bir mikrometre kullanın ve ucu 100 mikrometre uç çapına kadar kırmak için beş numaralı ince uçlu paslanmaz çelik cımbız kullanın. Her bir sineğe enjekte edilecek sıvının hacmini ölçmek için, PBS'de steril% 5 gıda boyası içeren bir kılcal iğne yükleyin ve sıvıyı 0.01 milimetre aşamalı bir mikrometrede bir damla mineral yağ üzerine boşaltın.
Mililitre parçacıkları başına 10 mikrolitre 1.6 miligramı küçük bir parafilm karesine dağıtın ve sıvıyı iğneye çekin. İğneyi enjektör memesine monte edin ve anestezi uygulanmış sinekleri, kafaları pedin önüne bakacak şekilde, ventral tarafı yukarı bakacak şekilde, sinek pedi üzerinde belirlenen alan boyunca hizalayın. Şişeleri tezgahın ilgili alanlarına yerleştirin ve toplamda yaklaşık 10 nanolitre partikül vermek için karnın üst köşesindeki sinekleri beş adet 100 milisaniye sıvı pompası ile enjekte edin. Her sineği enjekte edildiği gibi uygun şişeye aktarın ve şişenin üzerindeki süreyi not edin.
Ardından, %0,4 Tripan Mavisi çözeltisi içeren yeni bir iğne yükleyin ve sıvıyı iğneden dışarı itmek için sabit bir hava akışına izin vermek için pnömatik enjektörü 'kapılı' konuma getirin. İlk enjeksiyondan 30 dakika sonra, karınlar dolana ve şişene kadar her sinek karnına Tripan Blue enjekte edin. Sinekleri, elektrik bandı ventral tarafı aşağı bakacak şekilde mikroskop slaytlarına monte edin, kanatları banda sabitlemek için sineğin yanına itin. Ardından, sineğin hareket etmemesini sağlamak için kafayı yavaşça bandın içine itin.
Bu makale, in vivo görüntüleme için yetişkin sineklerin floresein işaretli partiküllerle enjekte edilmesine yönelik bir protokolü detaylandırmaktadır. Yöntem, hassas enjeksiyonları kolaylaştırmak için konik enjeksiyon iğnelerinin hazırlanmasını ve sineklerin anesteziye alınmasını içermektedir.
Model organizmalarda hassas bileşik iletimi, terapötik hedeflerin mekanistik olarak riskten arındırılmasını sağlar ve erken aşama analiz geliştirmelerini destekler. Bu yöntem, işaretli bileşiklerin veya biyolojiklerin yetişkin Drosophila'lara verilmesi için ölçeklenebilir bir yaklaşım sunarak fenotipik tarama ve hedef doğrulama iş akışlarını kolaylaştırır. Enjeksiyon hacmini standartlaştırarak ve doku hasarını minimize ederek, keşif biyolojisi süreçlerindeki tekrarlanabilirliği artırır.
Bu yöntem, özellikle bileşik lokalizasyonunun veya hedef modülasyonunun in vivo olarak görüntülenmesi gerektiğinde, hedef hipotez testinden öncü bileşik tanımlamaya kadar uzanan keşif sürekliliğine uygundur.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 29 Ağustos 2026