CApillary FEeder (CAFE) Testi: Drosophila'da Gıda Tüketimini ve Tercihini İzlemek İçin Bir Yöntem

- Kılcal Besleyici veya CAFE tahliline hazırlanmak için, renkli, sıvı gıdalarla doldurulmuş dereceli veya işaretli cam kılcal damarları, önce alt ucu, önceden monte edilmiş bir deney şişesinin üstündeki pipet uçlarından geçirin. Kılcal damarların aynı yüksekliğe güvenli bir şekilde yerleştirildiğinden ve aparatla temas halinde olmadığından emin olun.

Her kılcal damardaki menisküsün başlangıç seviyesini işaretleyin. Daha sonra şişeleri deney süresince sıcaklık, nem ve ışık kontrollü bir ortamda saklayın ve gerektiğinde kılcal damarları değiştirin. CAFE testi sırasında, mobil sinekler sınırsızdır ve mikropipetin alt açık ucuna serbestçe erişebilirler. Sinekler, hortumlarını uzatırken ve sıvıyı alırken gönüllü olarak beslenirler ve kılcal damar içindeki ortamı azaltırlar.

Belirli bir süre boyunca gıda tüketimini ve tercihini izlemek için, menisküsün başlangıç işaretinden o dönemin sonundaki seviyeye kadar olan inişini uygun kılcal damarlardan kaydedin. Örnek protokolde, sıvı dolu kılcal damarlardan daha az buharlaşma elde etmek için düzeneğin modifiye edildiği CAFE testini göreceğiz.

- Dış açıklıklardan birini kapatan pipet ucunu dikkatlice çıkarın ve önce alt ucu dolu bir cam kılcal damar yerleştirin. Pipet ucunu kılcal damarın yanına geri yerleştirerek kılcal damarı sabitleyin. Test edilen tüm gıda çözümleri için bu adımı tekrarlayın.

Daha sonra, kılcal uçları tüm şişelerin içine, kapaktan 3 ila 4 santimetre uzakta aynı seviyede yerleştirin. Kılcal damarın sızmasını önlemek için filtre kağıdı arasında biraz mesafe bırakın. Renkli sıvının üst ucunu etiketlemek için bir işaretleyici kalem kullanın. Farklı kılcal damarların tanımlanabilmesini sağlamak için bunları bir şerit kodu kullanarak ayrı ayrı etiketleyin.

Hazırlanan CAFE tahlillerini ızgaralı bir kakma ile plastik bir kutuya yerleştirin. Tahlil içindeki nemi sabit tutmak için her 24 saatte bir 100 mikrolitre tatlı su uygulamak için bir sünger kullanın. Nem cihazları olarak 30 mililitre çift damıtılmış H2O ile doldurulmuş dört ayrı şişe kullanın ve bunları plastik kutudaki CAFE tahlillerinin yanına yerleştirin.

Deney sırasında nem kontrollü bir ortam oluşturmak için plastik kutuyu örtün. Deney süresi için kutuyu sıcaklık, ışık ve nem kontrollü bir iklim odasında güvenli bir konuma aktarın. Her 24 saatlik aralıktan önce, ölü sinekleri not edin ve bir sonraki dönem için sinek başına tüketimi hesaplamak için canlı sinek sayısını kullanın.

Testin sonunda ve kılcal damarı değiştirmeden önce CAFE testini dik konumda tutun. Kapağı çıkarmayın ve kılcal damarın alt menisküsünü işaretlemeyin. İşaret ucu ilk işaretin altında değilse verileri atın. Her 24 saatte bir uzun süreli deneyler için kullanılmış kılcal damarları yeni doldurulmuş kılcal damarlarla değiştirin.

Menisküsün düşüşünü ölçün. Ardından eski kılcal damarları atın. Daha sonra kılcal damarları tahlilden dikkatlice çıkarın ve veri toplama için saklayın. Kılcal damarın içindeki sıvının alt uca ulaşıp ulaşmadığını kontrol edin. Kılcal damarın içindeki sıvı alt uca ulaşmadıysa, verileri atın.

Deneyden sonra, kurulumu sökün ve şişeleri, kapakları ve sünger topaklarını bir sabun banyosunda yıkayın. Daha sonra kullanmak için gece boyunca oda sıcaklığında kurutun. Aynı genotiplerle yapılan deneyleri en az üç farklı günde tekrarlayın. Bir kumpas kullanarak, kılcal damar üzerindeki işaret başlangıcı ve işaret sonu arasındaki mesafeyi ölçün. Son olarak, ölçümden sonra kılcal damarları atın.