JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 3:16 dk. • April 30th, 2023
- Bir larvayı fileto diseksiyonu için yönlendirmek için, onu soğuk tuzlu su içeren silikon kaplı bir tabağa koyun ve sırt ve ventral taraflarını belirleyin. Uzunluğu boyunca uzanan trakeal tüpler dorsal tarafı işaretlerken, abdominal dentikül kayışları ventral tarafı tanımlar.
Ardından, ventral tarafı yukarı bakacak şekilde larvaları nazikçe gerin ve her iki ucunu da tabağın dibine sabitleyin. Bu pozisyon, diseksiyon ilerledikçe duyusal multi-dendritik nöronların dorsal kümelerini ve ilişkili epidermal hücreleri sağlam tutacaktır.
Larvaların ventral orta hattı boyunca kesmek için diseksiyon makası kullanın. Preparatı düzleştirmek için kütikülü plakaya sabitleyin ve alttaki kas dokusunu ortaya çıkarmak için iç yapıları çıkarın. Ardından, epidermisi açığa çıkarmak ve dendritik morfolojilerini korurken daha önce gizlenmiş nöronlara erişmek için uygun kası dikkatlice çıkarın.
Örnek protokolde, duyusal da nöronlarını ve epidermal hücreleri görüntülemek için larva fileto hazırlığı ve kas çıkarmanın ayrıntılı bir gösterimini göreceğiz.
- Başlamak için, alt yüzeyi kaplayacak kadar silikon elastomer bir tabağa yeterince soğuk tuzlu su ekleyin. Konu larvasını tabağa ekleyin ve ışığın uygun şekilde yerleştirilmesini sağlayarak stereo mikroskobun altına yerleştirin. Larvaları, abdominal diş eti kayışları ile tanımlanabilen ventral tarafı yukarı bakacak şekilde konumlandırın.
Larvaları ön-arka yönde gerin ve böcek pimleri kullanarak başı ve kuyruğu tabağın dibine sabitleyin. Bir çift ince diseksiyon makasıyla, larvaların ventral orta hattı boyunca bir uçtan diğer uca kesin. Larvaları açın ve kütikül dokusunu düz duracak şekilde dört köşeden sabitleyin.
Forseps kullanarak, CNS, bağırsak ve trakea dahil olmak üzere iç organları çıkarın. Böcek pimlerini, fileto gergin olacak, ancak maksimum derecede gerilmeyecek şekilde ayarlayın.
Kas dokusunun bulunmadığı larvanın dorsal orta hattını bulun ve ardından bu sınırın iç kısmına bir forseps ucu yerleştirin. Epidermis ile teması en aza indirmeye dikkat ederek çatalı kas ve epidermis arasında kaydırın.
- Epidermise verilen zararı en aza indirmek için, mümkün olan en düz tırnaklarla inceleyin. Ve kalsiyum içeren tuzlu suda diseksiyon yapmayı deneyin. Bu, kas ve epidermis arasında boşluk yaratmaya yardımcı olabilir.
- Ardından, kasın vücut duvarına olan bağlantısını bir ankraj noktasında kırmak için forsepsleri yukarı doğru çekin. İlgilenilen kalan kas segmentleri için bu işlemi tekrarlayın.
Larva filetosunu her yöne maksimum düzeyde germek için böcek kalemlerini yeniden ayarlayın.