$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
- Drosophila melanogaster larva lenf bezi, larva hemolenfinde dolaşan hemositlerin veya kan hücrelerinin üretiminden sorumludur. Lenf bezini tanımlamak için önce vücuda hemolenf pompalayan sırt damarını veya kalbi bulun. Beyni bulana kadar sırt damarını başa doğru takip edin. Lenf bezi, beynin yanında, sırt damarını çevreleyen küçük, çok loblu bir yapıdır.
Birincil lobu bulmak için, bezin en büyük lobunu tanımlayın. Bu lob, hemosit gelişiminin farklı aşamaları ile tanımlanan üç bölge içerir. Dorsal damara en yakın medüller bölge olgunlaşmamış hemosit içerirken, kortikal bölge olgun hemositler içerir. Primer lobun arka ucunda, özel hemositlerden oluşan posterior sinyal merkezini bulabilirsiniz. İkincil ve üçüncül loblar daha küçüktür ve tanımlanmış bölgelere sahip değildir.
Lenf bezini incelemek için, bir diseksiyon mikroskobuna, larvaları manipüle etmek için iki forsepse ve tamponlu bir tuzlu su çözeltisine ihtiyacınız olacaktır.
Bu örnekte, immünohistokimyada kullanılmak üzere lenf bezlerini inceleyeceğiz.
- Lenf bezi diseksiyonuna başlamak için, diseke edilecek her deney ayarı için 24 oyuklu bir plakanın 1 oyuğuna 1 mililitre 1x PBS ekleyin. Ardından, tek kullanımlık bir transfer pipeti kullanarak, her oyuğa 1 damla %0,1 PBST ekleyin. Plakayı buzun üzerine düz bir şekilde yerleştirin. Işıklı bir stereomikroskop tabanına temiz bir diseksiyon pedi yerleştirin. Pedin üzerine %0.01 PBST'lik bir damla yerleştirmek için tek kullanımlık bir transfer pipeti kullanın.
Diseksiyon için bir larvayı PBST damlasına aktarın. Lavı bir çift forseps ile, sırt tarafı yukarı, arka uçtan yaklaşık 1/4 uzunluk uzakta tutun. İkinci forseps çifti ile, kütikülü ilk çiftin hemen önünden tutun ve larva kütikülünü ağız kancaları açığa çıkana kadar yavaşça öne doğru çekin.
Kütikülü serbest bırakın ve larvaları ikiye bölmek için her iki forseps kullanın. Arka ucu PBST damlasından çıkarın ve atın. Stabilite için kütikülü sabitleyin ve ardından açıkta kalan ağız kancalarını tutmak için ikinci forseps çiftini kullanın ve nazikçe dışarı çekin. Bu, kütikülü iç yapılardan ayıracaktır.
Ağız kancalarını tutarak tükürük bezleri, yağ gövdesi ve bağırsak gibi istenmeyen yapıları dikkatlice çıkarın. Diseke doku kompleksini ağız kancalarından nazikçe alın ve buz üzerindeki plakanın bir kuyusuna aktarın. Diseksiyonu istediğiniz kadar larva ile tekrarlayın, ancak fiksasyon adımına geçmeden önce 30 dakikalık diseksiyon süresini aşmayın.
Doku montajına başlamak için, bir cam slayt üzerine bir damla montaj tamponu yerleştirin. Ağız kancalarını tutamak olarak kullanarak, lenf bezini tampon damlacıkına aktarın. Dokuları eşit şekilde yerleştirin ve işlem sırasında montaj tamponunu yayın.
Forsepslerin bir tonunu sırt damarının altına dikkatlice kaydırın, lenf bezini dışarı çekmek ve düzleştirmek için montaj tamponunun çevresine doğru yavaşça çekin. Testere hareketi ile lenf bezi ile beyin arasındaki sırt damarını kesin. Dokuların geri kalanını lenf bezinden tamponun en dış kenarına doğru hareket ettirin.
Temiz bir kapak fişi alın ve dikkatlice montaj tamponunun üzerine indirin. Slaytlar artık görüntüleme için hazırdır veya ihtiyaç duyulana kadar 4 santigrat derecede saklanabilir.