JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 3:26 dk. • April 30th, 2023
- Drosophila'nın gece boyunca yumurtaları, yumurtaları görselleştirmek için üzüm suyu ile desteklenmiş ve sinekleri çiftleşmeye ve yumurtlamaya teşvik etmek için maya ile kaplanmış agar içeren bir tabağa bırakmasına izin verin. Yumurtaları çıkarmak için, tabağa damıtılmış su ekleyin ve yüzeyi bir boya fırçası ile hafifçe silin. Daha sonra karışımı, yumurtaları toplamak için plastik bir burcun içine yerleştirilmiş naylon bir ağdan dökün. Embriyodan koryonu veya koruyucu dış tabakayı çıkarmak için yumurtaları iki tur% 7 ağartıcı içinde bekletin. Bu işleme dekorionasyon denir.
Yumurtalar şimdi burcun yan tarafına yapışmıştır. Ağartıcıyı çıkarmak için üç kez suyla yıkayın. Son olarak, geliştirmeye devam etmek veya bir deneyde hemen kullanmak için yumurtaları burçtan şişelere aktarmak için bir boya fırçası kullanın. Örnek protokolde, Drosophila yumurtalarını steril koşullar altında toplayıp tanımlanmış mikrobiyota ile arka sineklere dekoryonlaştıracağız.
- Süzgeci yumurta toplamaya hazırlamak için naylon ağı plastik bir burcun içine yerleştirin. Aynı sinekler ertesi gün kullanılacaksa, hemen taze mayalı üzüm suyu agar plakaları içeren yeni bir kafese aktarın. Bir önceki kafeste bulunan üzüm suyu tabağında meyve sineği yumurtaları bulunmaktadır. Ölü sinekleri temiz bir boya fırçasıyla temizleyin ve agarı parçalamamaya dikkat edin. Agar plakasını damıtılmış suyla durulayın ve yumurtaları agarın yüzeyinden nazikçe fırçalayın, ardından yumurtaları toplamak için bulamacı ağın üzerine dökün.
Biyogüvenlik kabinini %70 etanol ile sterilize edin ve ardından UV ışığını açın. Biyolojik olmayan tüm malzemelere %70 etanol püskürtün ve hemen biyogüvenlik kabinine koyun, ardından UV ışığı ile sterilize edin.
- Biyogüvenlik kabini içinde çalışırken veya biyogüvenlik kabinine yeni malzemeler eklerken veya çıkarırken iyi aseptik tekniğin uygulanmasını sağlamak çok önemlidir.
- Yumurtalarla birlikte burcu 120 mililitrelik bir numune kabına aktarın ve 90 mililitre% 0.6 sodyum hipoklorit çözeltisi veya% 7 ağartıcıyı kenarın hemen altındaki burcun içine yavaşça dökün. Forseps kullanarak, yumurtaları yeniden askıya almak için burcu periyodik olarak çözelti içinde yukarı ve aşağı hareket ettirin. Burcu doğrudan 90 mililitre çamaşır suyu ile önceden doldurulmuş ikinci bir numune kabına aktarın.
İkinci ağartma işleminin sonunda, yumurtalar burcun kenarlarına yapışmaya başlamalıdır. Çamaşır suyunu atın ve burcu steril suyla tamamen durulayın. Yine, her yıkama sırasında yumurtayı birkaç kez yeniden süspanse etmek için forseps kullanın. Üçüncü yıkamanın sonunda, çoğu yumurta burcun yan tarafına takılmalıdır.
Steril bir boya fırçası kullanarak, yumurtaları burcun yanından steril diyete aktarın. Oksijenin tüpe girmesine izin vermek için kapakları gevşek bırakın. Aktarılan yumurtalar diyetin yüzeyinde görünür olacaktır.