Koloni Oluşturan Birimlerin (CFU'lar) Sayımı: Sinek Cisimlerinden Bakterilerin Miktarının Belirlenmesi

- İlk olarak, istenen gelişim aşamasında sinekleri toplayın ve steril bir tüpe koyun. Sadece iç mikrobiyotayı saymak için, sineklerin dışını %70 etanole batırarak sterilize edin. Hem iç hem de dış mikrobiyotayı ölçmek için bu sterilizasyon adımını atlayın. Daha sonra, sinekleri seramik boncuklar ve bir doku homojenleştirici kullanarak veya manuel olarak bir havaneli ile küçük bir hacimde bakteri üreme ortamında öğütün. Numunelerin kontamine olmasını önlemek için dış kaynaklardan bakteri bulaştırmamaya özen gösterilmelidir.

Artık kültüre edebileceğiniz bakteri içeren homojen bir karışıma sahip olmalısınız. Sıvı bakteri ortamı kullanarak homojenatın hacmini yükseltin. Homojenatın seri seyreltmelerini gerçekleştirin ve bu seyreltmelerin sabit bir hacmini bakterileriniz için uygun katı büyüme ortamı üzerinde plakalayın. Bakteriler büyüdükçe plaka üzerinde koloniler oluşacaktır. Numunenin Koloni Oluşturan Birimlerini veya CFU'sunu belirlemek için 10 ila 100 koloni aralığına sahip seyreltmeyi bulun.

Örnek protokolde, steril sinekleri gnotobiyotik veya tanımlanmış bir bakteri kültürü ile aşılayacağız ve CFU'ları toplayıp ölçeceğiz.

- Gece boyunca 100 mikrolitre büyümeyi steril bir mikrofü