Floresan mikroskobu için böcek bacaklarının işlenmesi: görüntüleme için nöromüsküler yapıları korumak için bir yöntem

- Başlamak için, kütikülün hidrofobikliğini azaltmak için anestezi uygulanmış böcekleri% 70 etanol çözeltisine batırın. Daha sonra, fiksasyon sırasında doku penetrasyonuna izin vermek için dokuyu en az 30 dakika boyunca bir deterjan içeren fosfat tamponlu salin ile yıkayın ve geçirgenleştirin.

Ardından, başı ve karnı torakstan çıkarın. Koksa-toraks bileşkesine hafif bir baskı uygulamak için forseps kullanın ve bacağı ayırın. Dokuya nüfuz etmesini sağlamak için bacakları gece boyunca buz gibi soğuk% 4 paraformaldehit çözeltisine dikkatlice yerleştirin. Paraformaldehit, proteinleri çapraz bağlayarak dokuları sabitler.

Daha sonra, fiksasyon solüsyonunu çıkarın ve dokuyu birkaç kez fosfat tamponlu tuzlu su içeren deterjanla yıkayın. Montajdan önce, tamponun dokuya girmesi için yeterli zaman sağlamak için bacakları en az bir gün boyunca saf veya hafifçe seyreltilmiş montaj tamponuna yerleştirin.

Son olarak, bacakları bir damla montaj ortamına monte edin. Numunenin hasar görmesini önlemek için mikroskop lamı ile lamel arasında bir ara parça kullanın ve montajı oje ile sabitleyin.

Aşağıdaki örnekte Drosophila melanogaster bacaklarının diseksiyonunu, fiksasyonunu ve montajını göreceğiz.

-