Koryon ve Vitellin Membran Mekanik Giderimi: Drosophila Oositlerini Doğrudan Gözlem İçin Hazırlama Yöntemi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 6:27 dk. • April 30th, 2023
- Tuzlu su çözeltisinde sabit yumurtalıklardan alınan olgun oositlerle başlayın. Olgun oositler, bir dış koryon ve iç vitellin zarından oluşan yumurta kabukları taşır.
Koryon ve vitellin zarını mekanik olarak çıkarmak için, oositleri önceden işlenmiş iki sürgünün buzlu kısımları arasına yerleştirin. Oositleri yuvarlayan sürtünme oluşturmak için üst sürgüyü düz ileri geri hareketlerle hareket ettirin.
Şimdi, oositleri başka bir yönde yuvarlamak için üst sürgüyü hafif bir açıyla hareket ettirin. Dairesel hareketlerden kaçınarak, üst sürgü alt kızağa dik olarak hareket edene kadar bu açıyı kısa artışlarla artırın. Bu hareket, koryonları ve vitellin zarlarını mekanik olarak uzaklaştırır ve oosit içine probların veya lekelerin erişmesini sağlar.
Koryonları olmayan oositler uzun ve ince görünecek ve vitellin zarı olmayanların uçları sivri olacaktır. Temizlenmiş oositleri çevredeki döküntülerden ayırmak için, numune karışımını bir tüpe aktarın ve döküntü üstte yüzerken ve çıkarılabilirken oositlerin dibe çökmesine izin verin.
Bu protokolde matür Drosophila oositlerinden koryon ve vitellin membranları çıkarılacaktır.
- Geç evre oositleri ayırmak için önce sığ bir diseksiyon kabına 1 milili
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin