Drosophila In Vivo Kalsiyum Görüntüleme: Nöronal Aktivitenin Fonksiyonel Görüntülenmesi İçin Bir Yöntem

- Drosophila sinir sisteminde in vivo kalsiyum görüntüleme yapmak için, GCaMP gibi genetik olarak kodlanmış bir kalsiyum indikatörünün ekspresyonunu ilgili nöronlara hedefleyin. Nöronlar bir aksiyon potansiyelini ateşlediğinde, zarın hızlı depolarizasyonu voltaj kapılı kalsiyum kanallarının açılmasına neden olur ve bu da hücreye hücre dışı kalsiyum akışına yol açar.

GCaMP, geliştirilmiş yeşil floresan proteinin veya EGFP'nin modifiye edildiği ve N-terminalinde miyozin hafif zincirinin M13 fragmanına ve C-terminalinde kalsiyum bağlayıcı protein olan kalmodulin'e modifiye edildiği bir füzyon proteinidir. Kalsiyum kalmoduline bağlanır, GCaMP'deki konformasyon değişikliklerini tetikleyerek proteinin floresansında bir artışa neden olur.

GCaMP floresansındaki değişiklikleri in vivo nöronal aktivitenin bir temsilcisi olarak görüntülemek için, sinir sisteminin bölgesini beklenen aktivite ile ortaya çıkarın. Ardından, GCaMP dinamiklerini yakalayabilen ve bir uyaran iletim kurulumu ile donatılmış bir floresan mikroskobu kullanın. Yanıt veren nöronlarda GCaMP floresansını kaydederken uyaranı, örneğin bir kokuyu verin.

Örnek protokolde, koku alma çağrışımsal öğrenme sırasında beynin mantar göv