C. elegans'ın Nil Kırmızısı Boyanması: Sabit Hayvanlarda Lipid Damlacıklarını Görselleştirmek İçin Bir Yöntem

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biyoloji

0 görüntüleme • 3:34 dk • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- Nötr lipitler için hücre içi depolama organelleri olan lipid damlacıklarını görselleştirirken, numuneye Triton X-100 içeren bir deterjan çözeltisi ekleyerek başlayın. Bu, solucan hücrelerine nüfuz edecektir. Ardından, numuneyi uygun izopropanol konsantrasyonunda, örneğin %40'ta sabitleyin.

Daha sonra numuneye Nil Kırmızısı ekleyin ve boya ışığa duyarlı olduğu için ışıktan koruyun. Fiksasyon, boyanın hayvan boyunca lipit damlacıklarına erişmesine izin verir. Nil Kırmızısı, floresan emisyon spektrumu yerel lipid ortamının polaritesine bağlı olan lipofilik bir boyadır.

Fosfolipidler gibi polar lipidlere maruz kaldığında, Nil Red'in emisyon spektrumu daha yüksek, kırmızı dalga boylarındadır. Lipid damlacıklarının nötr çekirdeğindeki triaçilgliseroller ve sterol esterleri gibi nötr lipidlere maruz kaldığında, Nil Red'in emisyon spektrumu daha düşük, sarı-altın dalga boylarına kayar.

Bu nedenle, hayvan boyunca lipit damlacıklarının Nil Kırmızısı lekelenmesini görselleştirmek için sarı-altın dalga boyu emisyonlarını toplayacak bir floresan mikroskobun yeşil kanalını kullanın. Örnek protokolde, Nil Kırmızısı boyama prosedürünü ve sabit numunelerde lipit damlacıklarının görüntülenmesini göreceğiz.

- Nil Kırmızısı lipid boyamasını gerçekleştirmek için, geç log OP50 E. coli ile tohumlanan nematod büyüme ortamı veya NGM üzerinde plaka kurtları ve solucanları 20 santigrat derecede erken L4 aşamasına kadar büyütün. Solucanları 1 mililitre PBST çözeltisi ile yıkayın ve solucan süspansiyonunu 1.5 mililitrelik bir mikrofüj tüpüne aktarın.

Solucanları bir dakika boyunca 560 kez yerçekiminde santrifüjleyin, ardından süpernatanı çıkarın ve E. coli süspansiyondan temizlenene kadar PBST yıkamasını tekrarlayın. Daha sonra, solucan peletine 100 mikrolitre %40 izopropanol veya ORO boyama için %60 ekleyin ve numuneyi oda sıcaklığında üç dakika inkübe edin.

- İzopropanol ilavesi, boyamadan önce solucanların uygun şekilde geçirgenleşmesi için çok önemlidir.

- Solucanları bir dakika boyunca 560 kez yerçekiminde santrifüjleyin ve solucan peletini bozmadan süpernatanı çıkarın.

- Santrifüjleme adımları sırasında ışığa maruz kalmayı en aza indirmek önemlidir.

- Şimdi, karanlıkta, her numuneye 600 mikrolitre önceden hazırlanmış NR çalışma solüsyonu ekleyin. Tüpleri üç kez ters çevirin ve solucanları ve çözeltiyi tamamen karıştırın. Daha sonra numuneyi karanlıkta oda sıcaklığında iki saat inkübe edin.

Kuluçka işleminden sonra solucanları santrifüjleyin ve süpernatanı çıkarın. Daha sonra 600 mikrolitre PBST ekleyin ve fazla NR lekesini çıkarmak için numuneleri karanlıkta 30 dakika inkübe edin. Numuneleri daha önce olduğu gibi tekrar döndürdükten sonra, yaklaşık 50 mikrolitre süpernatan hariç hepsini çıkarın.

16:07

Fat Kütle Biyokimyasal ve Yüksek Verimli Mikroskobik Değerlendirme Caenorhabditis Elegans

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:08

Kabarcık sütun Photobioreactors ve bir tahlil yeşil mikroalg ekimi için nötr lipitler

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:12

İnsan Bağırsak Organoidlerinde Lipid Damlacık Oluşumunun Karakterizasyonu ve Niceliği için Floresan Esaslı Bir Test

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:22

Görselleştirme Caenorhabditis Elegans Tırnak Yapıları Lipofilik Vital Boya, DII

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:32

Nil kırmızısı boyama: alglerde hücre içi nötr lipidleri tespit etmek ve ölçmek için bir teknik

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:15

C. elegans bağırsak olarak bir Model hücreler arası Lumen morfogenez ve In Vivo polarize membran Biyogenez tek hücre düzeyinde için: etiketleme antikor boyama, işlev RNAi kaybı çözümleme ve görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:46

Lipid bolluk ve değerlendirme Lipid dağılımı Nil kırmızı ve O kırmızı petrol boyama tarafından Caenorhabditis elegans miktar

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:37

Drosophila Larvalarında Oenositlerin Diseksiyonu ve Lipid Damlacık Boyaması

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:59

Uyarılmış Raman Saçılma Mikroskopisi Kullanılarak Caenorhabditis elegans Lipid Depolama Dinamiklerinin Etiketsiz Görüntülenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:12

Hepatik Steatoz Değerlendirmesi için Floresan Boyalı Lipit Damlacıklarının 3D Rekonstrüksiyon ile Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 1 Ağustos 2026