C. elegans'ın Nil Kırmızısı Boyanması: Sabit Hayvanlarda Lipid Damlacıklarını Görselleştirmek İçin Bir Yöntem

- Nötr lipitler için hücre içi depolama organelleri olan lipid damlacıklarını görselleştirirken, numuneye Triton X-100 içeren bir deterjan çözeltisi ekleyerek başlayın. Bu, solucan hücrelerine nüfuz edecektir. Ardından, numuneyi uygun izopropanol konsantrasyonunda, örneğin %40'ta sabitleyin.

Daha sonra numuneye Nil Kırmızısı ekleyin ve boya ışığa duyarlı olduğu için ışıktan koruyun. Fiksasyon, boyanın hayvan boyunca lipit damlacıklarına erişmesine izin verir. Nil Kırmızısı, floresan emisyon spektrumu yerel lipid ortamının polaritesine bağlı olan lipofilik bir boyadır.

Fosfolipidler gibi polar lipidlere maruz kaldığında, Nil Red'in emisyon spektrumu daha yüksek, kırmızı dalga boylarındadır. Lipid damlacıklarının nötr çekirdeğindeki triaçilgliseroller ve sterol esterleri gibi nötr lipidlere maruz kaldığında, Nil Red'in emisyon spektrumu daha düşük, sarı-altın dalga boylarına kayar.

Bu nedenle, hayvan boyunca lipit damlacıklarının Nil Kırmızısı lekelenmesini görselleştirmek için sarı-altın dalga boyu emisyonlarını toplayacak bir floresan mikroskobun yeşil kanalını kullanın. Örnek protokolde, Nil Kırmızısı boyama prosedürünü ve sabit numunelerde lipit damlacıklarının görüntülenmesini g