JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 4:51 dk. • April 30th, 2023
- Yıkanmış peletlenmiş solucanlarla başlayın ve SDS, bir deterjan ve bir indirgeyici ajan olan DTT içeren lizis tamponu ekleyin. Bu, solucanın koruyucu kütikülünü parçalayarak vücudu hücre ayrışmasına maruz bırakır. Hücre lizizini ve ölümünü en aza indirmek için lizis tamponuna uzun süre maruz kalmaktan kaçının.
Daha sonra, lizis reaktiflerini birkaç yıkama soğuk izolasyon tamponu ile çıkarın. Hücre ölümünü önlemek için bu tamponun doğru ozmolariteye sahip olması önemlidir. Hücreden hücreye bağlantıları parçalamak için bir proteaz enzimi kullanın. Karışımı tüp duvarına pipetleyerek mekanik enerji ile birlikte homojenizasyon işlemine yardımcı olun.
Enzim reaksiyonunu durdurmak için serum ve kontaminasyonu önlemek için antibiyotik içeren ortam ekleyin. Kalıntıların çoğunu temizlemek için numuneyi birkaç kez pelet haline getirin ve yıkayın.
Son olarak, yerçekimi sedimantasyonuna izin vermek için tüpü buzun üzerine yerleştirin. Kütikül kalıntıları veya hücre kümeleri de dahil olmak üzere döküntüler çökelirken, ayrışmış hücreler ortamın üst tabakasında asılı kalır. Bu hücreler, kısa süreli kültürleme için veya FACS veya immünopresipitasyon ile spesifik hücre popülasyonlarını izole etmek
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin