Yüzmeye Bağlı Felç (SWIP) Testi: Dopamin Aracılı Hareketi Ölçmek İçin Bir Yöntem C. elegans

- Yüzmeye bağlı felç veya SWIP testini gerçekleştirmek için, L4 aşamalı C. elegans larvalarını sıvı ile dolu bir cam spot plakaya aktarın. Gelişmekte olan vulvanın varlığına göre L4 hermafroditlerini tanımlayın. Vücudun orta noktasında yarım ay şeklinde bir yama ve kırbaç benzeri bir kuyruk.

Dopamin aracılı yüzmeyi değerlendirmek için, solucanın C şeklinde vücut bükülme ve çarpma davranışı ile karakterize edilen hareketini kaydedin. Genellikle, dopaminerjik nöronlar dopamini sinaptik yarığa salgılar ve bu da alıcı hücredeki dopamin reseptörlerini bağlar.

Mesaj iletildikten sonra, dopamin reseptörlerden salınır ve bağlanmamış nörotransmiterler, özel taşıyıcı proteinler aracılığıyla dopaminerjik nöron tarafından alınabilir ve yeniden kullanılabilir.

Dopamin taşıyıcısındaki inaktive edici mutasyonların veya dopamin salınımını artıran ilaç tedavilerinin neden olduğu değişmiş dopamin sinyalizasyonuna sahip larvalarda, dopamin sinaptik yarıkta birikir. Aşırı dopamin, dopamin reseptörlerini aşırı uyararak motor programa müdahale eder ve larvaları felç eder. Hareket edemeyen larvalar plakanın dibine batar.

Örnek protokolde, amfetamin ile tedavi edilen C. elegans'ta manuel ve otomatik SWIP tahlillerinin ayrıntılı gösterimlerini göreceğiz.

- SWIP'in manuel olarak değerlendirilmesi için, 0,5 milimolar amfetamin içeren veya içermeyen 40 mikrolitre kontrol solüsyonunu bir cam spot plakaya ekleyin. Bir stereoskop altında, bir kirpik kazması ile 8 ila 10 geç L4 aşama solucanı toplayın ve solucanlar penadan ayrılıp solüsyona girene kadar penayı solüsyonu içeren kuyuya daldırın.

Zamanlayıcıyı başlatın. Kuyuya salınan solucanların sayısını not edin ve her dakika işaretinde SWIP sergileyen solucanların sayısını toplam 10 dakika boyunca gözlemleyin ve kaydedin.

Prosedürün sonunda, ham verileri bir elektronik tabloya kopyalayın ve her dakika felç olan solucan sayısını, test boyunca test edilen toplam solucan sayısına bölerek ve 100 ile çarparak felç olan solucanların yüzdesini hesaplayın. Yüzde değerlerini herhangi bir grafik ve istatistik yazılımına kopyalayın ve xy grafik formatını kullanarak verileri y ekseninde SWIP yüzde değerleri ve x ekseninde zaman ile çizin.

Kontrol ve amfetamin uygulanan gruplar arasında istatistiksel analiz ve tedavi süresi yapılabilir. Örneğin, iki yönlü ANOVA ve post hoc analizi kullanarak.

Yüzmenin neden olduğu felcin otomatik analizi için, izleme yazılımı analizini çalıştırmak için kamerayı, solucan izleme yazılımını ve komut dosyasını ayarlayın. Ve daha önce gösterildiği gibi tek bir geç aşama L4 solucanını bir cam spot plakaya yerleştirmek için bir kirpik penası kullanın.

Ardından, her seferinde bir solucanın yüzme videolarını kaydedin ve vücut kıvrımlarının sıklığını hesaplamak için solucan izleme yazılımını kullanın. Solucan dövme sıklığını elde etmek ve solucan dövme verilerinden ısı haritaları oluşturmak için izleme yazılımı ile sağlanan komut dosyasını takip edin.