Drosophila Y-labirent Testi: Sineklerde Koku Alma Tepkilerini Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

- Bir Y labirenti, düz veya konik tüplerle birbirine bağlanmış üç sinek şişesi bulunan Y şeklinde bir konektörden oluşur. Sinekler labirentte tercih ettikleri uyaranla yana doğru hareket ederler. Deneyi başlatmak için, her şişeye uçucu kimyasalları içeren çözeltiyi içeren bir kağıt mendil yerleştirin. Ardından, bunları konik tüplere bağlayın. Konik tüpler, sineklerin labirentin merkezine geri dönme kabiliyetini sınırlar ve uçucu kimyasalların yayılmasını yavaşlatır.

Sonra, onları yavaşlatmak için aç sinekleri soğutun. Kimyasal anestezi kullanmayın, çünkü bu testin sonucunu etkileyebilir. Şişeyi soğutulmuş sineklerle hızlı bir şekilde labirentin son tarafına bağlayın. Labirenti keşfetmek için sinekleri bırakın. Parlak ışığın neden olduğu herhangi bir tercihi azaltmak için, bu adımı sineklerin görmediği uzak kırmızı ışık altında gerçekleştirin. Son olarak, labirentin her iki tarafındaki sinekleri sayın. Labirentteki konumları, bu uçucu kimyasal kokuya yönelik tercihlerini gösterir.

Örnek protokolde, vahşi tip Drosophila ile Y-labirent testinin bir kurulumunu göreceğiz.

- Ertesi sabah testi gerçekleştirmeden önce, günün sonunda, 10 ila 20 deney hattından oluşan kohortları, ıslak bir havludan sağlanan nem ile cam şişelere aktarın. Sinekler 16 ila 18 saat içinde test edilmelidir, aksi takdirde kuruma veya açlık nedeniyle ölebilirler. Ertesi gün, Y labirentini birleştirin. Kanalları oluşturan kesilmiş pipet uçlarına sahip köpük konektörler kullanarak Y şeklindeki konektörü iki cam şişeye birleştirerek başlayın. İncelen şekilleri bu tek yönlü geçişleri yapar.

"Y" nin üçüncü dalı, bir pipet ucunun büyük bir kısmından yapılmış bir yükleme tüpüne bağlanır ve yükleme şişesinden labirentin seçim noktasına geçişe izin verir. Her sivrilen tünelin ötesinde, biri bir koku verici ile doldurulması gereken bir cam şişe vardır. Bunları, 28 milimetre kare kağıt mendile batırılmış 40 mikrolitrelik boluslar olarak yükleyin. İkisinden hangisi koku verici içerir rastgele değişmelidir.

Testi yapmak için önce sinekleri buz üzerinde kısa bir süre soğutun, böylece sinekler yavaşlar. Bu, LED ampullerden gelen uzak kırmızı ışık altında ve 25 santigrat derecede olmalıdır. Sinek kohortunu yavaşça yükleme şişesine bırakın ve Y-labirentini test sinekleriyle doldurun. Gaz anestezisi kullanmayın.

- Sinekleri yükleme şişesine hem hızlı hem de nazik bir şekilde aktarmak gerçekten çok önemlidir. Aslında bu deneyin en zor adımıdır çünkü Y-labirentinde kokuların yayılmasından önce sineklerin hızlı bir şekilde uyanması gerekir.

- Sineklerin labirenti 24 saat boyunca keşfetmesine izin verilmelidir, böylece maksimum sayıda sinek bir veya diğer cam şişeye hareket eder. Farklı tüplerde bulunan sinek sayısı, koku alma indeksini hesaplamaya yarar. En fazla 10 sineğin davranışından elde edilen bu değere standart istatistiksel yöntemler uygulanmalıdır.

10 sinek kohortları tutarlı sonuçlar vermiyorsa, denemeler 20 sinek kohortlarıyla yürütülebilir. Labirent bileşenlerini temizlemek için, sökülmüş olarak gece boyunca RBS 35 MD'ye batırın. Bunu, musluk suyunda durulama ve havayla kurutmadan önce DI suyunda son bir durulama ile takip edin.