Canlı Drosophila Embriyolarının Mikroenjeksiyonu: Reaktiflerin Gelişmekte Olan Embriyoya Erken Verilmesi

- Canlı Drosophila embriyolarını toplayın ve şeffaf olmayan koryonlarını çıkarın. Ardından, bir cam lamel üzerine, sıvı heptan içinde çözülmüş bant yapıştırıcısı olan bir dizi heptan yapıştırıcısı uygulayın. Artık dekoryona uğramış embriyoları işleyebilmek için, numuneleri yapıştırıcı üzerine arka arkaya dikkatlice hizalayın.

Embriyoları kısmen kurutmak için lamel bir dehidrasyon odasına aktarın. Bu, enjeksiyonlar sırasında veya sonrasında sitoplazmik sızıntıyı önleyecektir. Daha sonra, lameli çıkarın ve oksijenin embriyolara yayılmasına izin verirken daha fazla dehidrasyonu önlemek için embriyoları halokarbon yağı ile kaplayın.

Mikroenjeksiyonu gerçekleştirmek için uyumlu bir mikroskop üzerinde bir mikroenjeksiyon sistemi kullanın. Göz parçalarına bakarak, hem embriyoları hem de enjeksiyon çözeltisi ile önceden yüklenmiş iğneyi tanımlayın. İğneyi kırın ve tutarlı ve uygun boyutta sıvı damlaları ürettiğinden emin olun. Daha sonra iğneyi embriyonun içine getirin ve uygun hacmi enjekte edin. İğneyi çıkarın ve kalan embriyolar için enjeksiyonu tekrarlayarak bir sonrakine geçin.

Örnek protokolde, hücre bölünmesinin canlı görüntüleme çalışmaları için Drosophila embriyo mikroenjeksiyonun