JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 3:08 dk. • April 30th, 2023
- Kültür ortamından larva formlarının en büyüğü olan üçüncü bir instar larvası seçerek başlayın ve herhangi bir yiyeceği çıkarmak için suyla yıkayın. Larva gözleri veya Bolwig organları larvaların üst ön tarafında yer aldığından, larvaları ışık kaynağı hayvanın üzerinde olacak şekilde bir agar plakasının ortasına yerleştirin. Oda ışığını kapatın ve larvaların karanlığa alışmasına izin verin.
Larva, görünür ışıkla yapılan bir ışık noktasında zar zor tespit edilebildiğinden, hayvanı kamera için aydınlatmak için kızılötesi LED ışıklarını açın. Hayvan yolunu kontrol etmek için düz bir şekilde emeklemeye başlayana kadar bekleyin. Ve sonra plakayı, larva doğrudan ışık noktasına doğru sürünecek şekilde döndürün. Hayvanın ışığa doğru süründüğünü ve ardından ışık noktasından uzaklaştığını kaydedin. Bu ışıktan kaçınma taktiği, larvaların yiyeceğe yuva yaparak yırtıcılardan kaçınmasına yardımcı olur.
Aşağıdaki örnekte, Drosophila larvalarının farklı genetik suşlarının ışıktan kaçma yeteneğini test etmek için ışık noktası testini gerçekleştireceğiz.
- Larvaları görüntüleme kurulumuna tanıtmadan önce, ışık konumunun kısa bir videosunu alın ve filtrelenmemiş kontrol arka plan videosunu "lightarea1" olarak adlandırın. Filtreyi kamera merceğine geri yerleştirin ve larvaların net bir şekilde gözlemlenmesine izin verirken deney cihazından uzakta bir ışığı mümkün olduğunca düşük bir ayarda açın. Bazı larvaları kültür ortamından çıkarmak için bir kaşık kullanın ve nazikçe üçüncü bir instar larvası seçin.
Larvaları damıtılmış suda yıkayın ve larvaları agar plakasının ortasına yerleştirin. Larvadaki fazla suyu nazikçe alın ve oda ışığını kapatın. Kızılötesi LED ışığını açmadan önce larvaların karanlık ortamda iki dakika alışmasına izin verin. Aşağıdaki ışıktan kaçınma davranışı deneyinin karanlıkta yapılması gerekir. Gösterinin rahatlığı için parlak ışıkta çekim yaptık.
Larvaları yavaşça plakanın ortasına doğru fırçalayın. Larva düz bir şekilde sürünmeye başladığında, larvaların ışık noktasına doğru yönelmesini sağlamak için plakayı döndürün. Kaydetme yolunu seçmek için Yakala, Kurulum ve Video Yakalama'yı tıklayın. Ve tıklayın Kayda başla kaydetmek için. Lavın ışık noktasına doğru sürünmesine, girmesine ve neredeyse görüş alanından çıkana kadar ışık noktasından çıkmasına izin verin, ardından Kaydı Durdur'u tıklayın.
Filtreyi kameradan uzaklaştırın ve ışık noktasının konumunun kısa bir videosunu çekin. Ardından gönderiyi filtrelenmemiş bir video olan "lightarea2" olarak adlandırın ve ışık noktası konumunun değişmediğinden emin olmak için bu videoyu "lightarea1" videosuyla karşılaştırın.