JoVE Encyclopedia of Experiments
Biyoloji
0 görüntüleme • 2:38 dk • April 30th, 2023
- Drosophila larvalarını bir ısı probu testi için hazırlamak için, istenen gelişim aşamasındaki hayvanları toplayın ve tek larvaları ince bir su tabakası ile bir test plakasına aktarın. Su, larvaların plaka yüzeyine yapışmadan serbestçe hareket etmesini sağlar.
Drosophila larvaları, nosiseptörler olarak bilinen epidermislerinde multidendritik duyusal nöronlar aracılığıyla zararlı termal uyaranları tespit eder. Bunlar, potansiyel olarak zararlı yüksek sıcaklıklar gibi belirli bir duyusal eşiğe ulaşılana kadar ateşlenmez.
Isı probunu bu duyusal eşiği aşacak bir sıcaklığa ayarlayın ve nosiseptörlerin ateşlenmesine neden olun. Isı uygulamak için probun ucunu larvaya hafifçe bastırın. Larva, sondadan çekilerek termo-nosiseptif davranışlarla zararlı sıcaklığa cevap verecektir. Larva, ısı probundan 360 derecelik bir rol sergilediğinde veya belirli bir süre geçtiğinde durun. Tepki süresini kaydedin.
Örnek protokolde, erken üçüncü instar Drosophila larvaları üzerinde lokalize bir ısı probu testinin bir gösterimini göreceğiz.
- İlk olarak, termal probun sıcaklığını istenen ayar noktasına önceden ayarlayın. Tek bir larvayı düz bir platforma nazikçe aktarmak için bir boya fırçası veya forseps kullanın ve lavın ince bir su tabakası ile kaplandığından emin olun.
- Basınçtaki değişimi en aza indirmenin yanı sıra ısı probunun doğru konumunu ve açısını sağlamak için uygulama mükemmelleştirir.
- Prob ucunu A4 segmentindeki larvaya doğru hafifçe bastırın, uç ile prob ile larva yüzeyi arasında yaklaşık 45 derecelik bir açıyla hafif basınç uygulayın. Basınç, larva yüzeyinde hafif bir girintiye neden olmalıdır ve genellikle hareketi önlemek için yeterli olacaktır. Bir geri çekilme tepkisi gösterilene veya 20 saniyelik kesmeye ulaşılana kadar larvaları uyarmaya devam edin.
Yanıt veren larvalar tipik olarak önce baş ve kuyruğu kaldırma ön davranışı, ardından en az 360 derece yuvarlanma geri çekilme davranışı gösterir. Geri çekme davranışı başlatıldığında, prob ile teması bırakın ve gecikmeyi veya geri çekilme için geçen süreyi kaydedin. 20 saniye içinde herhangi bir geri çekilme davranışı gözlenmezse, larva yanıt vermez.