Sıcaklık Gradyanı Deneyi: Drosophila Larvalarında Sıcaklık Tercihini Test Etmek İçin Bir Yöntem

- Drosophila larvalarının sıcaklık tercihini test etmek için, bir alüminyum tahlil plakasının bir tarafını ısıtarak ve diğer tarafını soğutarak bir sıcaklık gradyanı oluşturun. Alüminyum yüksek ısı iletkenliğine sahiptir, yani ısı verimli bir şekilde aktarılır ve sabit bir doğrusal sıcaklık gradyanı oluşturur. Sistem dengelendikten sonra, aynı büyüklükteki sıcaklık bölgelerinde plaka boyunca sıcaklıkları kaydedin, ardından plakanın merkezini temiz larvalarla doldurun.

Parlak ışıktan kaynaklanan paraziti ortadan kaldırmak için tüm sistemi örtün ve denemeyi başlatın. Larvalar, çok sıcak veya çok soğuk olan caydırıcı bölgelerden kaçınarak gradyan boyunca dağılır ve uygun sıcaklıktaki bölgelere yerleşir. Bu davranışa termotaksi denir. Larvaların sıcaklık tercihini değerlendirmek için, her sıcaklık bölgesindeki hayvan sayısını kaydedin.

Örnek protokolde, 18 ila 28 santigrat derece arasında tek yönlü bir sıcaklık gradyanının nasıl kurulacağını ve test sırasında larvaların nasıl ele alındığını göreceğiz.

- Tek yönlü bir gradyan hazırlamak için önce tahlil için nemli bir ortam ortamı oluşturun. Ayrı su banyolarına bağlı iki alüminyum bloğu 10 santimetre aralıklarla ıslak kağıt havluların üzerine yerleştirin. Su banyolarının önceden ısıtılması gerekir. Daha sonra, 100 mililitre% 1 agaroz yapın ve düz bir yüzeyde her bir tahlil plakasına 25 mililitre ekleyin. Agaroz katılaştıktan sonra, yüzeyi biraz kaba hale getirmek için yüzeyi bir melamin süngerle hafifçe ovalayın.

Ardından, verimli sıcaklık transferini teşvik etmek için, tahlil plakalarındaki alüminyum bloklar arasındaki boşlukları bir sprey şişesinden verilen suyla doldurun. Şimdi, tahlil plakalarını alüminyum blokların üzerine yerleştirin ve alüminyum blokların kenarlarıyla tam olarak eşleşmesi için sınırların her iki kenardan 2 santimetre olduğundan emin olun.

Ardından, jellerin kurumaması için plakaların yüzeyine bir film su püskürtün. Ardından, buharlaşmayı azaltmak ve jel yüzeyinin sıcaklığını stabilize etmeye yardımcı olmak için sistemi bir karton kutu ile örtün. Sıcaklığın dengelenmesi için 5 ila 10 dakika bekleyin. Ardından, boyunca eşit bir sıcaklık olduğundan emin olmak için plaka üzerindeki yüzey sıcaklığını en az 12 yerde kontrol edin, 2 santigrat derece verin veya alın. Ardından, tahlil yapılana kadar kutu kapağını değiştirin.

İlk olarak, jelin üzerindeki karton kutuyu çıkarın ve jel yüzey sıcaklığını hızlı bir şekilde kontrol edin. Yüzey kuruysa, yüzeye az miktarda su püskürtün. Jel iyiyse, küçük bir boya fırçası kullanarak her plakanın ortasına 100 ila 200 larva yükleyin. Ardından, larvaları yakalamak için her tahlil plakasının üzerine bir kapak yerleştirin ve ışığa maruz kalmayı önlemek için kurulumu bir karton kutu ile örtün. Tahlil şu anda devam ediyor.

10 ila 30 dakika sonra karton kutuyu ve mikroplaka kapağını çıkarın. Ardından, larvaların konumunu kaydetmek için plakaları yukarıdan fotoğraflayın. Jelin yüzeyinde yansımayı önlemek için kutuyu kameranın üzerine yerleştirin. Plakayı temizlemek için, dağılmış olabilecekleri her yerde tüm larvaları aspire edin.

Şimdi, görüntü analiz yazılımı kullanarak her bölgedeki larvaların yüzde dağılımını hesaplayın. Tahlil plakasındaki sınırlara göre her 2 santimetrede bir çizgiler yapın ve her bölgedeki larva sayısını sayın.

- Sayarken, her kenardan 0,5 santimetre uzaklıktaki bölgelere dağılmış larvaları göz ardı edin. Jel kalınlığı ve sıcaklık koşulları kenara yakın yerlerde eşit değildir.