Yetişkin Bir Sinekten Midgut Diseksiyonu: Sindirim Sistemini İzole Etmek İçin Bir Yöntem

- Başlamak için, anestezi uygulanmış bir yetişkin sineğin kafasını çıkarın. Kurumasını önlemek için başı kesilmiş sineği Fosfat Tamponlu Salin veya PBS ve Sığır Serum Albümini veya BSA içeren bir çözelti ile örtün. Sineği forseps ile göğüs kafesinden tutun ve ardından bağırsakları açığa çıkarmak için karnı ikinci bir forseps çifti ile çekin. Mahsul veya yiyecek saklama çuvalı göğüs kafesine bağlanacağından, bağırsağı göğüs kafesinden nazikçe çekin.

Ayrıldıktan sonra, bağırsağı açmak için mahsulü karından uzaklaştırın. Bağırsakları karın boşluğundan kurtarmaya başlamak için sineğin arka ucunu çekin. Tüm dokuyu karın bölgesinden çıkarmak için bağırsağı çekmeye devam edin. Serbest bırakıldıktan sonra, ön bağırsağı, Malpighian tübüllerini, arka bağırsağı ve yumurtalıkları çıkarın, böylece sinek içindeki birincil sindirim bölgesi olan disseke edilmiş orta bağırsağı geride bırakın.

Örnek protokolde, Floresanla Aktive Edilmiş Hücre Sıralama veya FACS yoluyla daha fazla analiz edilmek üzere genç ve yaşlı yetişkin sineklerin orta bağırsaklarını inceleyeceğiz.

- Diseksiyona başlamadan önce, standart bir sinek yatağında karbondioksit ile 40 sinek şişesini uyuşturun. Daha sonra tüm sineklerin kafasını kesmek için bir tıraş bıçağı kullanın ve bunları agaroz jeli ile kaplanmış bir diseksiyon kabına aktarın. Agarozu kaplayacak kadar soğuk PBS artı BSA'yı tabağa dökün. Sinekler yüzecek.

Daha sonra, her böcek için, sırayla, bir çift forseps ile bir sinek karnı ve bir başkası ile göğüs kafesi alın. Göğüs kafesi karından ayırın. Bağırsak görünür olacak ve mahsul büyük olasılıkla hala göğüs kafesine bağlı olacaktır. Bağırsakları tutun ve göğüs kafesinden dışarı çekin. Ardından, mahsulü alın ve açmak için bağırsağı karından hafifçe öne doğru çekin.

Daha sonra, forsepslerden birini karnın arka ucunu tutmak için, diğerini ise ön açık kütikülün kenarını kavramak için kullanın. Kütikülü kırmak için arka ucu çekin ve tüm bağırsak karın boşluğundan çekilene kadar çok nazikçe arkaya doğru çekmeye devam edin. Ön bağırsağı, Malpighian tüplerini, arka bağırsağı ve yumurtalıkları çıkarın ve çıplak orta bağırsağı bırakın.

Orta bağırsaklar izole edildiğinden, bağırsak dokularının birkaçını bir seferde soğuk PBS artı buz üzerinde BSA içeren 1.5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne periyodik olarak aktarmak için bir cam Pasteur pipeti kullanın.