Yaşam Süresi Analizi: C. elegans Uzun Ömürlülüğün Ölçülmesi

- Bir nematod popülasyonunun ortalama ömrünü ölçmek için, M9 tamponunda gelişimsel olarak senkronize L1 larvaları ile başlayın. Larvaların yoğunluğunu belirleyin, ardından her plakaya 50 ekleyin. Koşul başına en az üç çoğaltma plakasının yanı sıra yedek plakalar hazırlayın.

Bu solucanların L4 aşamasına ulaşana kadar normal şekilde gelişmesine izin verin. Şimdi plakalara FUdR ekleyebilirsiniz, bu da solucanların döl üretmesini önleyecektir. Alternatif olarak, yalnızca tek bir neslin ömrünü ölçtüğünüzden emin olmak için solucanları saydıktan sonra her gün yeni plakalara taşımanız gerekecektir.

Ardından, herhangi bir erkeği çıkarın. Bu, cinsiyet ve çiftleşme değişkenlerini deneyden kaldıracaktır. Ertesi gün, spontan hareket veya hafif dokunuşa tepki arayarak plakadaki canlı solucanların sayısını sayın. Ölü solucanları çıkarın ve sayıları kaydedin. Hayatta kalan solucanları hiçbiri kalmayana kadar günlük olarak sayın. Örnek protokolde, bir ömür boyu tahlilinin bir gösterimini göreceğiz.

- Hazırlanan bakteri tohumlu plakaları her biri 50 L1 hayvanla doldurun. Embriyolar L4 aşamasına gelene kadar plakaları 20 santigrat derecelik bir inkübatöre yerleştirin. L1'den L4'e normal gelişim yaklaşık 40 saat sürer.

Ardından, döl üretimini önlemek için her plakaya 160 mikrolitre 50x FUdR ekleyin. Daha sonra erkekleri çıkarın, çünkü yaşam süresi tipik olarak sadece hermafroditlerle ölçülür. Tamamlandığında, plakaları 20 santigrat derece inkübatöre yeniden paketleyin.

Tüm solucanlar ölene kadar, yaşayabilirliklerini günlük olarak puanlayın. Bunu yapmak için, kafadaki hareket etmeyen her nematod'a bir platin tel veya kirpik ile hafifçe dokunun. Reaktif olmayan hayvanlar ölüdür ve plakadan çıkarılmalıdır. Bu rutin sırasında herhangi bir anormallik olup olmadığını not edin.