Yumurtlama Deneyi: C. elegans'ın Yumurtlama Davranışını Ölçmek İçin Bir Yöntem

- Yumurtlamayı ölçmek için yapılan deneyler, bu davranışı etkileyen nörolojik bileşenleri ve çevresel ipuçlarını ortaya çıkarmıştır. Yumurtlama davranışındaki değişiklikler, nöromüsküler veya üreme sistemleri üzerinde toksik etkilere işaret edebilir.

Toksisiteyi test etmek için, ilgilenilen bileşik olsun ya da olmasın, nematod büyüme ortamı plakaları üzerinde gelişimsel olarak senkronize yumurtalar yükseltin. Bu deneyler, bakterilerin bileşiği metabolize etmesini önlemek için ısıyla öldürülmüş bakteri solucanı yemi kullanır. Bu neslin genç yetişkinler olana kadar büyümesine izin verin.

Daha sonra solucanları uygun kontrol veya deney koşulları altında yeni plakalara taşıyın ve 24 saat boyunca yumurtlamaya bırakın. Her gün yetişkinleri yeni bir tabağa aktarın ve önceki tabaktaki yumurtaları sayın. Yetişkinler yumurtlamayı bırakana kadar, vahşi tip solucanlar için yaklaşık beş gün devam edin. Her gün yetişkin solucan başına bırakılan yumurta sayısını hesaplayın ve deneyin sonunda toplamı toplayın.

Örnek protokolde, üreme toksisitesi için bir kemoterapi ilacı olan etoposidi test etmek için C. elegans yumurta yumurtlama testini kullanacağız.

- Yaşa senkronize yumurtaları, genç yetişkin aşamasına kadar 64 saat boyunca 20 santigrat derecede DMSO veya etoposit içeren NGM plakasında kuluçkaya yatırın. Beş yetişkin solucanı kimyasallar içermeyen yeni NGM plakalarına veya aynı kimyasal ön işlemi içeren yeni NGM plakalarına aktarın ve 24 saat boyunca inkübe edin.

Yetişkinleri az önce gösterildiği gibi yeni NGM plakalarına aktarın ve her gün yumurta sayısını sayın. Ek olarak, sürünen, ölen veya içten yumurtadan çıkan solucanları sayın. Metin protokolüne göre hesaplamalar yapın.