C. elegans Blastomer Diseksiyonu: Yumurta Kabuğunu Çıkarmak ve Embriyonik Hücreleri Ayırmak İçin Bir Yöntem

- Bu diseksiyon için iki mikropipet kullanın: biri yumurta ile yaklaşık olarak aynı genişlikte ve diğeri iki kat daha geniş bir açıklığa sahip ve aralarında hızlı transferi kolaylaştırmak için kuyucuklarda düzenlenmiş bir dizi çözelti.

İlk olarak, yetişkin hermafroditleri, embriyoların patlamasını önlemek için ozmotik olarak dengelenmiş yumurta tuzu çözeltisine yerleştirin. Gelişmekte olan embriyoları serbest bırakmak için solucanları ikiye bölün.

Ardından, iki hücreli aşama embriyolarını tanımlayın. Bu hücreler döllenmiş yumurtanın bölünmesi ile oluşan blastomerlerdir. Bir embriyoyu koruyucu yumurta kabuğunu parçalamaya başlayacak olan hipoklorit çözeltisine, ağartıcıya aktarmak için daha büyük açıklığa sahip mikropipeti kullanın.

Sadece 40 ila 55 saniye sonra, embriyoyu Shelton'un büyüme ortamına veya SGM'ye aktarın. Üçüncü bir kuyucuğa yerleştirmeden önce ağartıcının tüm izlerini gidermek için her embriyoyu iki SGM kuyusunda kısa bir süre yıkayın.

Şimdi, yumurta kabuğunu çıkarmak ve blastomerleri açığa çıkarmak için mekanik kuvvet sağlayan embriyoyu tekrar tekrar pipetlemek için daha küçük mikropipeti kullanın. Tek tek blastomer hücrelerini ayırmak için embriyoyu yavaşça pipetle