JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 3:10 dk. • April 30th, 2023
- Gravid yetişkin solucanların ağartılmasıyla izole edilmiş peletlenmiş yumurtalarla başlayın. Kültürlenmiş hücrelerin kontaminasyonunu önlemek için bu prosedürün her adımının steril olarak yürütüldüğünden emin olun. Peletleri, yumurta kabuğunun yapısal bir bileşeni olan büyük bir polisakkarit olan kitini parçalayan bir enzim olan kitinaz çözeltisinde askıya alın.
Uygun bir sindirim periyodundan sonra, yumurtaları nazikçe santrifüjleyin ve sindirimi durdurmak için süpernatanı hücre kültürü ortamıyla değiştirin. Ardından, tek tek hücreleri mekanik olarak ayırmak için embriyoları 18 gauge bir iğneden geçirin. Ardından, yumurta kabuğundaki veya ayrılmamış hücre kümelerindeki kalıntıları temizlemek için çözeltiyi süzün. Hücreleri, fıstık aglütinini ile kaplanmış bir cam kapak astarı üzerindeki bir kültür kabına yerleştirin - hücre yüzeyi karbonhidratlarını bağlayarak hücrelerin kapak kaymasına bağlanmasına yardımcı olan bir lektin.
Örnek protokolde, embriyonik hücreleri in vitro morfolojik farklılaşma ve analiz için hazırlayacağız.
- Bakteriyel kontaminasyonu önlemek için laminer bir akış başlığı altında çalışırken, peletlenmiş yumurtaları mililitre kitinaz başına bir mililitre ila iki
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin