Elektrotaksi Deneyi: C. elegans'ta Hareketi Gözlemlemek İçin Bir Yöntem

- Duyusal uyaranlar olmadan, C. elegans hareketi genellikle ileridir ve geri dönüşler ve dönüşlerle kesintiye uğrar - yön değişikliğine neden olan rastgele yeniden yönlendirme manevraları. C. elegans elektroreseptiftir. Yani, elektrik alanlarını algılayabilirler. Hafif bir doğru akıma veya DC'ye maruz kaldıklarında, solucanlar negatif elektrot veya katot yönünde düz ve kesintisiz bir yolda hareket eder, bu davranışa elektrotaksi denir.

Solucanın hareketini daha doğru bir şekilde gözlemlemek için, hayvanı mikroakışkan bir cihaza yerleştirin ve bir DC elektrik alanı uygulayın. Alanın yönünü tersine çevirin ve solucan ters yöne dönecektir - katot yönüne doğru. Alternatif bir akım, AC uygulayın ve solucan duracaktır. Alanın yönündeki alternatif değişiklik, solucanın nöromotor sistemlerini zorlar ve solucanın hareketsiz kalmasına neden olur. DC alanını yeniden uygulayın ve solucan katoda doğru ileri harekete devam edecektir.

Aşağıdaki örnek protokolde, mikroakışkan bir cihazda bir elektrotaksi testini gösteren bir kurulum göreceğiz.

- Bu adıma, yeni monte edilmiş mikro kanalı, bir monitöre bağlı monte edilmiş bir kamera ile bir mikroskobun xy- hareketli bir aşamasına yerleştirerek başlayın. Güç kaynağını mikro kanalın elektrotlarına bağlayın.

Mikro kanalın direncinin yaklaşık 0,6 mega ohm olduğunu onayladıktan sonra, mikro kanalın çıkış tüpünü tek kullanımlık bir şırıngaya takın. Daha sonra giriş borusunun ağzını M9 fizyolojik tamponunda süspanse edilmiş bir nematod çözeltisine batırın. Sıvıyı kanala aspire etmek için şırınganın içine negatif basınç uygulayın.

Giriş ve çıkış tüplerinin her ikisi de dolduğunda, şırıngayı ayırın ve kanalın ortasına bir solucan yerleştirmek için tüpün göreceli yüksekliğini ayarlayarak akışı hidrostatik olarak manipüle edin. Ardından her iki tüpü de aynı yükseklikte düz bir şekilde yerleştirin. Bir elektrotaksi deneyi sırasında solucan numunelerini değiştirirken mikro kanal içinde sıfır akışı korumak için, her iki giriş tüpünü aynı yüksekliğe düzleştirdikten sonra, hala akış varsa, tüpün birbirine göre yüksekliğinde küçük ayarlamalar yapın.

- Akışın gerçekten sıfır olup olmadığından emin değilsek, elektrik alanının polaritesini değiştirerek ve ardından solucanın kendi etrafında dönerken doğrusal hızını değerlendirerek solucanın hareketinde bir tersine dönüşe neden olabiliriz.

- Şimdi, güç kaynağını uygun voltaja ayarlayın. Elektrik sinyalini etkinleştirin ve solucanın tarlaya alışması için bir dakikalık ön maruziyete izin verin, bu süre zarfında solucan katoda doğru hareket etmeye başlamalıdır. Dakika geçtiğinde kayda başlayın.

Deney bittiğinde, kanaldaki tüm sıvıyı ve solucanları çıkarın. Hazneyi deiyonize suyla durulayın ve cihazı kuruması için 125 santigrat derecede sıcak bir plaka üzerinde bırakın.