JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 2:23 dk. • April 30th, 2023
- GCaMP'yi (bir kalsiyum algılama proteini) ifade eden bir transgenik solucanı, solucan için bakteriyel gıda ile birlikte bir görüntüleme odasına yerleştirin. Ardından buharlaşmayı önlemek için çanağı kapak ve laboratuvar filmi ile kapatın. Geniş alan epifloresan için donatılmış bir bileşik mikroskop altında görüntüleyin. Davranışlarını izlemek ve görüntüleme yazılımını kullanarak floresan yakalamak için solucanların hızlandırılmış görüntülerini kaydedin.
Transgenik solucanlar, belirli bir nöronda GCaMP ekspresyonunu yönlendiren bir promotörün kontrolü altında bir GCaMP sensör proteinini eksprese eder. Bu nöron aktive edildiğinde, plazma zarını depolarize eden bir aksiyon potansiyelini ateşler. Polarizasyonun giderilmesi üzerine, plazma zarında voltaj kapılı kalsiyum kanalları açılır. Bu, hücreye kalsiyum iyonlarının girmesine neden olur ve bu da nöronal uyarıma neden olur.
Uyarılmış nörondaki GCaMP, kalsiyum iyonlarını bağlar. Bu, solucanlar düşük yoğunluklu bir floresan uyarma ışığıyla görüntülendiğinde GCaMP'nin floresan parlamasına neden olur. Örnek protokolde, agaroz mikro odacıklarında transgenik C. elegans'ta AVA internöron aktivitesini görselleştirmek için kalsiyum görüntül
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin