Kalsiyum Görüntüleme: Canlı C. elegans'ta Nöral Aktiviteyi Görselleştirmek İçin Bir Yöntem

0 views • 2:23 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- GCaMP'yi (bir kalsiyum algılama proteini) ifade eden bir transgenik solucanı, solucan için bakteriyel gıda ile birlikte bir görüntüleme odasına yerleştirin. Ardından buharlaşmayı önlemek için çanağı kapak ve laboratuvar filmi ile kapatın. Geniş alan epifloresan için donatılmış bir bileşik mikroskop altında görüntüleyin. Davranışlarını izlemek ve görüntüleme yazılımını kullanarak floresan yakalamak için solucanların hızlandırılmış görüntülerini kaydedin.

Transgenik solucanlar, belirli bir nöronda GCaMP ekspresyonunu yönlendiren bir promotörün kontrolü altında bir GCaMP sensör proteinini eksprese eder. Bu nöron aktive edildiğinde, plazma zarını depolarize eden bir aksiyon potansiyelini ateşler. Polarizasyonun giderilmesi üzerine, plazma zarında voltaj kapılı kalsiyum kanalları açılır. Bu, hücreye kalsiyum iyonlarının girmesine neden olur ve bu da nöronal uyarıma neden olur.

Uyarılmış nörondaki GCaMP, kalsiyum iyonlarını bağlar. Bu, solucanlar düşük yoğunluklu bir floresan uyarma ışığıyla görüntülendiğinde GCaMP'nin floresan parlamasına neden olur. Örnek protokolde, agaroz mikro odacıklarında transgenik C. elegans'ta AVA internöron aktivitesini görselleştirmek için kalsiyum görüntüleme kullanacağız.

- Kalsiyum görüntüleme, geniş alan epifloresanı için donatılmış bir bileşik mikroskop üzerinde gerçekleştirilir. Işığa maruz kalmayı sınırlamak için, kamera bir kare kaydederken aynı zamanda numuneyi aydınlatmak için bir LED'i tetikleyen bir transistör-transistör mantık sinyali kullanın.

24 saat boyunca, her solucanı her 15 ila 30 dakikada bir görüntüleyen bir seri film çalıştırın. İlk olarak, DIC ile 20 saniye, ardından GFP floresan ile 20 saniye ve son olarak, kontrol ifadesi seviyeleri için mKate2 sinyalinin bir görüntüsünü kaydedin.

Görsel veri incelemesi için, floresan yoğunluğundaki küçük değişikliklerin görünürlüğünü artırmak için sahte bir renk haritası kullanın. Son olarak, standart prosedürleri kullanarak kalsiyum veri analizi yapın.

09:10

Kalsiyum Görüntüleme için akut subventricular dilimi Dilimleri hazırlanması

Related Videos

0 Views

09:32

Hedefli-esteraz ile ER Kalsiyum Doğrudan Görüntüleme Kaynaklı Boya Yükleme (TED)

Related Videos

0 Views

11:26

Ratiometric kalsiyum görüntüleme Caenorhabditis Elegans davranışlar içinde bireysel nöronların

Related Videos

0 Views

03:01

Caenorhabditis elegans'ta Yumurtlama Davranışını Düzenleyen Bireysel Nöronlarda Kalsiyum Görüntüleme

Related Videos

0 Views

03:17

Caenorhabditis elegans Nöronlarında Hücre Altı Kalsiyum Dinamiğinin Görüntülenmesi

Related Videos

0 Views

11:06

C. vivo Nöronal Kalsiyum Imaging'de elegans

Related Videos

0 Views

07:51

Uzun süreli Kalsiyum Görüntüleme için Agaroz microchambers Caenorhabditis elegans

Related Videos

0 Views

08:03

In Vivo Kalsiyum Görüntüleme C. elegans Vücut Duvar Kasları

Related Videos

0 Views

06:50

İyi Kontrollü, Lokalize Olmayan Titreşimli Serbest Davranan Caenorhabditis elegans'ta Kalsiyum Görüntüleme

Related Videos

0 Views

09:14

Caenorhabditis elegans'ta Dendritik Dikenleri Görüntüleme

Related Videos

0 Views

Last updated: 25 July 2026